骨关节炎患者血清微小RNA表达谱特征及内源竞争RNA分析

目的通过生物信息学方法分析骨关节炎(OA)患者与正常人血清微小RNAs(miRNAs)表达差异。方法从基因表达数据库(GEO)和ArrayExpress数据库中查找OA血清相关的芯片数据,并下载GSE105027数据集。筛选样本包括8例OA患者血清和12例正常(NC)人样本,其中女性患者5例,健康女性7例。用R语言Limma包分别筛选出男/女性OA和男/女性NC之间的差异表达miRNAs(DEMs),设定阈值为P<0.05和Ilog2FCI>1,用ggplot2包绘制火山图和韦恩图,得到2个DEMs:hsa-miR-33b-3p和hsa-miR-4284。用STRING和Cytoscape软件构件蛋白互作网络图(PPI)网络,依据LncBase和MNDR数据库筛选相关的长链非编码RNA(lncRNAs),绘制内源竞争RNA(ceRNA)网络互作图,Cytohubba筛选出关键基因,结合NONCODE和lncRNASNP2数据库筛选与骨关节炎相关的lncRNAs,得出关键调控轴。结果共筛选出男、女性共有的DEMs2个:hsa-miR-33b-3p和hsa-miR-4284,均为下调。结合ceRNA网络及数据库综合分析出lncRNA KCNQ1OT1-miR-33b-3p-PIK3CA轴。结论通过生物信息学分析结果显示OA和NC的血清miRNAs表达差异集中在细胞凋亡、炎症和代谢,而lncRNAKCNQ1OT1-miR-33b-3p-PIK3CA轴在OA发病机制中尤为很重要。

血清微小RNA：一种新型生物标志物和治疗靶点

微小RNA（MicroRNA，miRNA）是一种约21—25个核苷酸小分子单链RNA，与靶基因的mRNA的3’非编码区域结合，在转录后水平调节靶基因的表达，几乎参与一切重要生命活动和多数疾病的发病过程。miRNA研究有助于揭示疾病发生发展的可能机制，目前发现miRNA不仅存在于细胞内，也存在于血液及其他体液中，如尿液、泪液、精液、羊水等，而这些分泌性miRNA已经成为一种新型的生物标志和疾病可能的治疗靶标，其中血清miRNA的研究尤其进展迅速。该文对目前有关血清miRNA的研究进展进行综述。

用实时荧光定量PCR选择急性呼吸窘迫综合征患者血清microRNA内参照基因

目的探讨用实时荧光定量PCR检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小RNA(microRNA,miRNA)的表达并选择最优内参照基因。方法用实时荧光定量PCR检测40例ARDS患者及20例体检健康者血清中5个miRNA候选内参照基因miR-16-5p、miR-93-5p、miR-101-3p、miR-191-5p和U6,并用ge Norm法、Norm Finder法、bestkeeper法和相对△Ct法4种算法分析内参照基因稳定性,通过对4种算法稳定值进行排序并计算几何均数的方法分析综合稳定值。结果比较5个候选内参照基因在ARDS患者和体检健康者的表达水平,差异均无统计学意义(P均>0.05)。4种算法综合分析显示,miR-16-5p以最小的稳定值1.32成为综合稳定性最高的内参照基因,其次是miR-101-3p、U6、miR-93-5p和miR-191-5p。结论实时荧光定量PCR法确定ARDS患者血清miRNA最优的内参照基因为miR-16-5p。

血清中miR-21和let-7a在胃癌无创性诊断及手术效果评定中的作用

目的:探讨血清中miR-21和let-7a在胃癌无创性诊断以及手术效果评定中的作用。方法:采用荧光定量PCR法分别检测正常对照、胃窦溃疡、胃窦炎性息肉、肠上皮化生及胃窦腺癌患者血清样本及配对胃组织中miR-21和let-7a的表达。结果:血清中miR-21和let-7a的含量与配对组织中二者的表达量呈正相关(rS=0.826和0.889,P<0.001)。术后胃癌患者血清中miR-21含量较术前降低(t=0.511,P=0.030),而let-7a则升高(t=0.770,P<0.001)。5组对象血清中miR-21和let-7a含量差异均有统计学意义(χ2=10.841,P=0.028;χ2=26.460,P<0.001)。与正常对照组相比,胃癌患者血清中miR-21含量升高,肠化及胃癌患者血清中let-7a含量降低。结论:血清中miR-21和let-7a的含量可能成为胃癌的无创诊断及手术效果评定的一种新的有效的生物标记。

肺癌患者miR-21靶基因挖掘及其在血清中的表达与诊断价值

目的:挖掘microRNA-21(miR-21)在肺癌中的靶基因,探讨其与肺癌关联的分子机制;检测血清miR-21表达水平,探讨其对肺癌诊断和病理分型的价值。方法:利用生物信息学方法挖掘miR-21靶基因,并进行染色体定位、功能注释和互作分析。选取肺癌患者血清61例(含小细胞肺癌21例,腺癌18例,鳞癌22例)、正常对照血清26例。实时荧光定量PCR技术检测miR-21表达水平,评估血清miR-21诊断不同病理类型肺癌效能。结果:获得miR-21肺癌靶基因30个,主要位于胞外,参与细胞凋亡、增殖等调控过程,能与ATP和蛋白质结合;靶基因互作网络中PTEN、PDCD4和CDKN1A为中心节点蛋白。血清miR-21在肺癌患者中的相对表达水平显著高于正常对照组(P<0.001);肺腺癌患者血清miR-21水平显著高于小细胞肺癌与肺鳞癌患者。血清miR-21诊断肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞癌、腺癌的AUC分别为0.915、0.879、0.934、0.911、0.962。结论:miR-21的靶基因及其表达与肺癌相关,血清miR-21的检测能够辅助肺癌诊断,且有望用于腺癌的鉴别和病理分型。

儿童先天性心脏病心力衰竭与血清miR-30a水平的关系

目的探讨血清miR-30a水平与先天性心脏病(CHD)患儿心功能的相关性及其对心力衰竭的诊断价值。方法2013年1月至2013年6月选取CHD患儿65例,依据改良Ross评分法分为心力衰竭组(40例)和无心力衰竭组(25例)。采用荧光定量PCR法测定血清miR-30a水平,超声心动图检测左室射血分数(LVEF);Spearman相关分析分析miR-30a与改良Ross评分和LVEF的相关关系,绘制ROC曲线并计算miR-30a曲线下面积。结果心力衰竭组患儿血清miR-30a水平较无心力衰竭组显著增高,LVEF明显降低,差异有统计学意义(P均<0.001);血清miR-30a水平与改良Ross评分呈正相关(r=0.63,P<0.01),与LVEF呈负相关(r=–0.32,P<0.01);miR-30a诊断心力衰竭的ROC曲线下面积为0.744。结论 miR-30a与CHD患儿的心功能相关,可作为CHD合并心力衰竭的检测指标之一。

非小细胞肺癌患者血清hsa-miR-107低表达的潜在临床价值

目的:评估非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清hsa-miR-107表达水平及临床价值,探究其潜在靶向调控机制。方法:基于全球NSCLC血清miRNA和组织mRNA基因芯片及测序数据集,评估hsa-miR-107综合表达水平,计算标准化平均差(standardized mean difference,SMD),鉴定差异表达miRNA、mRNA。以Kaplan-Meier生存分析评价hsa-miR-107的预后价值。参考萤光素酶报告基因测定和降解组测序结果对hsa-miR-107靶向mRNA进行鉴定,并对hsa-miR-107候选靶基因、NSCLC差异表达基因的交集进行功能注释、蛋白质交互分析。绘制汇总受试者操作特征曲线、Pearson相关系数散点图初步验证hsa-miR-107的靶向枢纽基因。结果:与155份正常人血清样本相比,hsa-miR-107在全球145份NSCLC患者血清样本中表达水平明显降低[SMD=-0.49(-0.73~-0.24)],且对NSCLC有中等区分能力[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.79,95%CI:0.75~0.82]。然而,血清hsa-miR-107高水平表达预示NSCLC患者预后较差(P<0.05,样本数:67)。hsa-miR-107靶基因主要富集于细胞周期通路、DNA复制通路、p53信号通路及细胞衰老通路,其中CCNE1、CDK1基因与hsa-miR-107呈显著负相关且均在NSCLC中呈高表达,被鉴定为hsa-miR-107靶向通路枢纽基因。结论:hsa-miR-107在NSCLC患者血清中低表达且其表达可预示NSCLC患者不良预后。低表达hsa-miR-107可能通过调控细胞周期通路基因CCNE1、CDK1促进NSCLC进展。

依达拉奉联合丁苯酞治疗急性缺血性脑卒中的临床观察

目的:观察依达拉奉联合丁苯酞治疗急性缺血性脑卒中(AIS)的临床疗效及安全性。方法:选取AIS患者258例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各129例。两组患者均给予抗血小板聚集、改善微循环、控制血压、降糖、调脂、稳定斑块和营养脑细胞等常规治疗。对照组患者在常规治疗基础上口服丁苯酞胶囊200 mg,tid;观察组患者在对照组基础上给予依达拉奉注射液30 mg加入氯化钠注射液100 ml中,ivgtt,bid。两组患者均持续治疗14 d。观察两组患者治疗前及治疗后7、14 d血清炎性因子、血清微小RNA(mi R)222及神经功能缺损评分,并比较两组患者临床疗效及不良反应发生情况。结果:治疗前,两组患者血清炎性因子、mi R-222及神经功能缺损评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后7、14 d,两组患者血清炎性因子水平及神经功能缺损程度评分均显著降低,血清mi R-222显著升高,且观察组明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者临床总有效率为92.2%,显著高于对照组的69.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者均未见明显不良反应发生。结论:依达拉奉联合丁苯酞治疗AIS疗效显著,能明显降低患者血清炎性因子水平,促进mi R-222表达,改善神经功能,且安全性较好。

2型糖尿病脾虚证患者血清microRNA表达谱和生物信息学分析（英文）

目的:通过对2型糖尿病脾虚证患者血清micro RNA(miRNA)表达谱和生物信息学分析,从miRNA水平上探讨脾虚证的发病机制和辨证分型。方法:选择5例2型糖尿病脾虚证患者和5名健康志愿者,从他们的血清标本中提取RNA,进行miRNA定量PCR芯片实验。筛选出两组之间差异表达的miRNA,利用miRSystem数据库进行靶基因预测和功能注释。结果:在2型糖尿病脾虚证患者和健康志愿者的血清中发现16个差异表达的miRNA。聚类分析显示,这16个差异表达的miRNA能够将2型糖尿病脾虚证患者和健康志愿者很好的区分。靶基因预测和功能注释显示,14个上调miRNA的调控122个靶基因显著富集到6个KEGG通路和6个GO分子功能。这些富集的KEGG通路包括与脂肪酸、氨基酸和2型糖尿病相关的营养物质代谢通路,钙离子信号通路,致病的大肠杆菌感染通路和亨廷顿氏舞蹈病通路。这些富集的GO分子功能包括羧酸、脂类、辅因子和药物结合功能,和酶激活剂和转录抑制剂活性功能。然而,2个下调miRNA调控的10个靶基因显著富集到2个KEGG通路。它们是内质网中的蛋白质加工通路和志贺氏菌病通路。结论:本研究可能为2型糖尿病脾虚证患者的临床辨证提供了一些血清miRNA标志物,同时从miRNA水平上为脾虚证患者的发病机制提供了依据。

外周血miR-152、PIGF、sFlt-1和sEng水平对子痫前期患者不良孕产结局的预测分析

目的探讨子痫前期(PE)患者血清中微小RNA152(miR-152)、胎盘生长因子(PIGF)、可溶性血管内皮生长因子(sFlt-1)及可溶性内皮抑素(sEng)表达水平对不良孕产结局的诊断预测价值。方法选取西安医学院第一附属医院2019年1月至2020年12月收治的145例PE患者为研究对象,其中发生不良孕产结局者为研究组(n=60),未发生不良孕产结局者为对照组(n=85),绘制受试者工作特征(ROC)曲线、计算曲线下面积(AUC)分析预测价值。结果本研究145例PE患者中发生不良孕产结局的患者为60例(41.38%),其中早产40例(66.67%)、胎盘早剥5例(8.33%)、胎儿窘迫12例(20.00%)、低出生体重儿44例(73.33%)、胎死宫内1例(1.67%)、新生儿肺炎13例(21.67%);研究组患者孕周和胎儿出生体重小于对照组,差异有统计学意义(t/H值分别为7.58、11.29,P<0.05),两组间年龄和住院天数差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,研究组患者miR-152、sFlt-1、sEng的表达水平上升,PIGF水平下降,差异均具有统计学意义(t/H值分别为-7.73、-3.62、-5.18、4.06,P<0.05);单独指标诊断PE患者发生不良孕产结局时,miR-152诊断AUC最大,为0.80;联合指标诊断时,AUC为0.89,特异性为86.23%,敏感性为77.47%。结论PE患者血清中PIGF、sFlt-1和sEng水平联合miR-152检测,对于PE患者发生不良孕产结局的预测诊断具有一定临床价值。

血脂异常症脾虚证患者血清microRNA差异表达谱生物信息学分析

目的通过对血脂异常症脾虚证患者血清microRNA(miRNA)表达谱和生物信息学分析,从miRNA水平上探讨脾虚证的发病机制和辨证分型。方法选择5例血脂异常症脾虚证患者和5名健康志愿者,通过miRNA定量PCR芯片实验,筛选出两组之间差异表达的miRNA,进行靶基因预测和功能注释。结果在血脂异常症脾虚证患者和健康志愿者的血清中发现12个差异表达miRNA,它们能将两组样本很好的区分。靶基因预测和功能注释显示,10个下调miRNA调控的178个靶基因显著富集到9个KEGG通路,主要涉及细菌和病毒等病原体入侵、脂肪酸代谢、DNA转录和修复、吞噬作用和慢性粒细胞白血病5个方面。2个上调miRNA调控的101个靶基因显著富集7个KEGG通路,主要涉及与增值和凋亡相关的信号通路、剪接体、药物代谢和肌萎缩性脊髓侧索硬化症4个方面。结论本研究发现了一些血脂异常症脾虚证患者的血清miRNA标志物,并从代谢和免疫方面为脾虚证患者的发病机制提供了miRNA证据。

血清miR-25在肺癌诊断中的临床价值

目的探讨miR-25在不同病理类型肺癌的血清表达量与应用价值及其与临床参数的相关性。方法收集非小细胞肺癌(30例)、小细胞肺癌(28例)、健康人(30例)共88例样本,采用实时定量PCR对血清miR-25含量进行定量检测,并建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)计算敏感度及特异度,评价其对肺癌的诊断价值。结果 miR-25在健康人血清表达量比小细胞肺癌组(P=0.000)、非小细胞肺癌组(P=0.001)显著减低,且小细胞肺癌组血清miR-25含量比非小细胞肺癌组明显增高,差异具有统计学意义(P=0.001);进一步建立ROC曲线分析血清miR-25对肺癌的诊断价值,非小细胞肺癌患者的ROC曲线下面积为0.659,敏感度为56.7%,特异度为90%,对应的临界值为1.854;小细胞肺癌的ROC曲线下面积为0.869,敏感度为78.6%,特异度为97%,对应的临界值为2.424。Spearman秩相关表明,血清miR-25表达量与病理分型(r=0.422,P=0.001)、肿瘤分期(r=0.370,P=0.004)、淋巴结转移(r=0.670,P=0.000)、肿瘤标记物(r=0.372,P=0.004)显著相关。结论血清miR-25在肺癌患者中表达量明显升高,尤其是在小细胞肺癌中,可能是小细胞肺癌诊断的一个潜在肿瘤标记物。

子痫前期患者中孕期子宫动脉血流多普勒联合血清miR-152检测的临床价值

目的探讨子宫动脉血流多普勒联合血清微小RNA-152(miR-152)检测在中孕期子痫前期(PE)患者预测诊断、疾病监测中的临床价值。方法按照纳入标准选取2016年1月2日-2017年1月10日在某院行常规产检的孕妇146例,均于孕中期(孕28周~32周)应用多普勒超声检测并记录子宫动脉的阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及收缩期峰值血流速度与舒张末期血流速度的比值(S/D);实时定量PCR(RT-q PCR)检测所有孕妇血清中mi R-152表达水平;随访所有患者孕晚期临床诊断结果及妊娠结局,回顾分析并应用受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic curve,ROC曲线)判断子宫动脉血流多普勒联合血清mi R-152表达在PE预测诊断中的临床价值。结果 146例孕产妇中共有27例发生PE(18.5%),所有孕妇妊娠结局良好;27例PE孕产妇(PE组)中孕期子宫动脉的RI、PI以及S/D值明显高于119例正常孕产妇(对照组);PE组中孕期血清miR-152表达水平高于对照组,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。子宫动脉血流多普勒联合血清miR-152表达应用于PE预测诊断的特异性为90.51%,优于诊断指标的单独应用。结论中孕期子宫动脉血流多普勒联合血清miR-152检测,两者相互弥补,对于PE的预测诊断具有一定临床应用价值。