微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

艾滋病患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p和miR-296-5p的检测意义分析

目的研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义。方法选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组。另选取同期健康志愿者100例设为参考组。比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平。根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平。采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素。结果AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用。

槲皮素通过生长抑制特异性基因5调节微小RNA-23a-3p和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制垂体神经内分泌肿瘤的增殖机制

目的:探讨槲皮素对垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)生长的抑制作用及其可能机制。方法:通过Starbase工具预测生长抑制特异性基因5(GAS5)与微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-23a-3p之间的结合关系。体外培养人垂体瘤细胞系RC-4B/C,分为对照组(Control)、槲皮素组(Quercetin)、GAS5抑制组(Si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(Quercetin+si-GAS5),对比分析槲皮素对GAS5、miR-23a-3p及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,以及人垂体瘤复苏细胞(RC-4B/C)生长和侵袭能力的影响。结果:Starbase工具预测GAS5与miR-23a-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-23a-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-23a-3p和PI3K/AKT的表达,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);下调GAS5、miR-23a-3p表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-23a-3p、PI3K/AKT表达增加,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。结论:槲皮素可能通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-23a-3p,降低了PI3K/AKT,抑制垂体神经内分泌肿瘤的生长。

电针关元穴经微RNA-199a-3p调控c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用

目的探讨电针关元穴经miRNA-199a-3p调控酪氨酸激酶受体c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用。方法采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只,按随机数字表法平均分为5组:模型组、电针组、miRNA-199a-3p抑制剂组、miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组,另选取SD大鼠12只作为假手术组。使用药物分组干预处理后,检测大鼠尿动力学,比较各组大鼠膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力;采用肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性,比较各组肌条自发性收缩频率;采用H-E染色观察各组大鼠膀胱组织病理形态改变;用试剂盒测定各组大鼠血清炎症细胞因子环氧化酶2(COX-2)、IL-18、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;采用qPCR检测各组大鼠膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织磷酸化(p)-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组相比,电针组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均降低(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均升高(P均<0.05);miRNA-199a-3p抑制剂组大鼠膀胱组织病理损伤均加重,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平及膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论电针关元穴可通过上调miRNA-199a-3p表达激活c-kit/ERK通路,减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤,增强逼尿肌兴奋性,修复膀胱功能,改善尿潴留症状。

计算机断层扫描联合血清三叶因子1、微RNA-130a-5p检测对肺癌的诊断价值分析

目的 探究计算机断层扫描(CT)联合血清三叶因子1(TFF1)、微RNA-130a-5p(miR-130a-5p)检测对肺癌的诊断价值。方法 选取2015年2月至2016年9月石家庄市人民医院收治的94例肺癌病人为肺癌组,85例同期确诊的肺良性病变病人为良性病变组。对所有受试者进行CT检查,并分析CT对肺癌病人的诊断效能;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TFF1水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-130a-5p相对表达量;ROC曲线分析血清TFF1、miR-130a-5p对肺癌的诊断价值;分析CT、TFF1、miR-130a-5p单独检测及联合检测对肺癌的诊断价值。结果 CT诊断肺癌误诊16例,19例漏诊。CT诊断肺癌的灵敏度为79.79%,特异度为81.18%,准确度为80.45%,误诊率、漏诊率分别为18.82%与20.21%。与良性病变组相比,肺癌组病人血清TFF1显著上升,miR-130a-5p水平显著下降(P<0.05)。血清TFF1、miR-130a-5p对肺癌诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.85、0.83,截断值分别为1.17μg/L、0.72。与联合检测相比,CT检测的灵敏度、准确度显著降低,漏诊率显著升高;血清miR-130a-5p检测的特异度、准确度均显著降低,误诊率显著升高(P<0.05)。结论 肺癌病人血清TFF1、miR-130a-5p呈异常表达,CT联合血清TFF1、miR-130a-5p可提高肺癌诊断的灵敏度和特异度,可为肺癌的诊治提供参考依据。

miR-23a-3p、ZNF395水平与妊娠期高血压病人胎儿生长受限的关系

目的:探讨妊娠期高血压病人胎盘组织微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)、锌指蛋白395(ZNF395)水平与胎儿生长受限的关系。方法:选取120例妊娠期高血压病人作为研究对象,根据孕期胎儿生长状况将其分为正常对照组(95例)和胎儿生长受限组(25例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测胎盘组织中miR-23a-3p表达水平,免疫组化法检测ZNF395蛋白表达水平,收集新生儿体重、胎盘重量等一般资料;采用Pearson法及Spearman法分析胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395水平与新生儿体重、胎盘重量的相关性;采用单因素及多因素Logistic回归分析胎儿生长受限的影响因素。结果:胎儿生长受限组胎盘组织ZNF395蛋白阳性率、新生儿体重、胎盘重量低于正常对照组,miR-23a-3p水平高于正常对照组(P<0.05)。胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p与ZNF395水平呈负相关(P<0.05);新生儿体重、胎盘重量与miR-23a-3p呈负相关(P<0.05),与ZNF395呈正相关(P<0.05)。miR-23a-3p是胎儿生长受限的独立危险因素(P<0.05),ZNF395是胎儿生长受限的保护因素(P<0.05)。结论:胎儿生长受限病人胎盘组织中miR-23a-3p高表达,ZNF395低表达,miR-23a-3p可能通过下调ZNF395表达影响胎儿生长发育。

微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)、突变型(Mt)RECK 3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体Wt-RECK和Mt-RECK,使用脂质体2000将Wt-RECK或Mt-RECK载体与miR-NC或miR-103a-3p mimics共转染入MKN-45细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt-RECK组、miR-103a-3p+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组,使用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞的相对荧光素酶活性。结果4组细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(F=16.044、60.975,P<0.05);RECK组细胞划痕愈合率显著低于NC组,miR-103a-3p组细胞划痕愈合率显著高于RECK组,miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率显著低于miR-103a-3p组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组与NC组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);RECK组与miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RECK组侵袭细胞数显著少于NC组,miR-103a-3p组侵袭细胞数显著多于NC组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著多于RECK组(P<0.05);miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著少于miR-103a-3p组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=33.473,P<0.05);RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著高于NC组,miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著低于RECK组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-103a-3p组与miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。Starbase数据库预测显示,miR-103a-3p与RECK的3′UTR存在结合位点。miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性显著高于miR-103a-3p+Wt-RECK组(P<0.05);miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-103a-3p可能通过靶向抑制RECK的表达而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

金丝桃苷通过调控微RNA-125a-5p/信号传导和转录激活因子3轴减轻脑缺血/再灌注损伤

目的探讨金丝桃苷调控微RNA-125a-5p(miR-125a-5p)/信号传导和转录激活因子3(STAT3)轴对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的影响。方法通过GEO数据库筛选脑I/R损伤的差异表达基因。于2021年6月至2022年1月建立大鼠I/R模型并将其分为假手术组、模型组、金丝桃苷低剂量组(20 mg/kg)、金丝桃苷高剂量组(50 mg/kg)。通过氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)法建立I/R细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织与细胞中miR-125a-5p、STAT3的表达的情况。酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测细胞的抗氧化能力。结果金丝桃苷在脑I/R损伤大鼠中起保护作用。相对于假手术组(1±0.09、1±0.08、0.67±0.06),模型组大鼠脑组织中miR-125a-5p表达(0.21±0.03)降低、STAT3的mRNA(4.89±0.52)和蛋白表达(2.25±0.24)水平升高。金丝桃苷能够促进miR-125a-5p的表达并抑制STAT3的表达。细胞实验中,与对照组比较,OGD/R组miR-125a-5p表达被抑制,IL-6、TNF-α浓度增强,SOD活性下降而LDH活性增加,加入金丝桃苷后上述指标表达被部分逆转。但是金丝桃苷对I/R细胞模型的保护作用能够被miR-125a-5p inhibitor和STAT3过表达部分挽救。结论金丝桃苷在I/R动物和细胞模型中均具有保护作用,而该作用可能是通过调控miR-125a-5p/STAT3轴实现的。

长链非编码RNA OTUD6B-AS1、微RNA-365a-3p在肝癌中表达与临床病理特征及预后的关系

目的探究血清及肝癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA1(OTUD6B-AS1)、微RNA-365a-3p(miR-365a-3p)的表达水平与肝癌病人临床病理特征及预后的关系。方法纳入2015年3月至2017年3月海南医学院第一附属医院收治的肝癌病人86例(肝癌病人组),同时募集同期体检的健康志愿者86例(健康对照组),收集所有研究对象的临床资料。采用qRT-PCR法检测血清及肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达;Star⁃base数据库预测LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间的关系;使用Pearson分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与病人5年生存率之间的关系;Cox回归分析肝癌病人预后的影响因素。结果与健康对照组比较,肝癌病人组血清中LncRNA OTUD6B-AS1高表达(1.59±0.41比1.02±0.32),miR-365a-3p低表达(0.42±0.15比1.05±0.26)(P<0.05)。肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1表达水平高于癌旁组织(1.70±0.44比0.97±0.16),miR-365a-3p表达水平低于癌旁组织(0.53±0.17比1.01±0.14)(P<0.05)。血清中Ln⁃cRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与TNM期、淋巴结转移以及分化程度相关(P<0.05)。生物信息学预测显示LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间存在靶向结合位点。Pearson分析显示,肝癌病人血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达存在负相关(r=−0.47,P<0.05)。LncRNA OTUD6B-AS1低表达组肝癌病人的5年生存率高于LncRNA OTUD6B-AS1高表达组(37.21%比13.95%,χ^(2)=6.11,P=0.013);miR-365a-3p高表达组肝癌病人的5年生存率高于miR-365a-3p低表达组(41.86%比9.30%,χ^(2)=8.03,P=0.005)。LncRNA OTUD6B-AS1高表达以及miR-365a-3p低表达是影响肝癌病人死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p在肝癌病人血清及肝癌组织中分别呈高、低表达,二者均与TNM期、淋巴结转移、分化程度等临床病理特征以及预后有关。

胰腺癌血清微RNA-486-3p的异常表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究胰腺癌患者血清微RNA(microRNA,miRNA/miR)-486-3p的表达情况及其在体外实验中对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:于消化科、胰腺外科及老年科病房收集确诊胰腺癌患者21例为试验组,20名健康成人为对照组,留取外周血并分离血清,实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血清中miR-486-3p的表达水平;体外实验采用细胞计数试剂盒8(cell-counting kit 8,CCK-8)法和流式细胞仪分别检测miR-486-3p对人胰腺癌细胞增殖、细胞凋亡的影响。结果:与健康对照组相比,胰腺癌患者血清中miR-486-3p的表达水平明显升高(50.73±0.82比34.80±0.74,P<0.05);体外实验中采用干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)瞬时转染的方法增高miR-486-3p的表达,使得人胰腺癌细胞SW1990和PANC-1的增殖能力明显增强(2.77±0.07比2.05±0.06,P<0.05;2.81±0.04比1.89±0.04,P<0.05);抑制miR-486-3p则可明显减少胰腺癌细胞的增殖(1.71±0.03比2.07±0.05,P<0.05;1.61±0.03比2.20±0.07,P<0.05);增高miR-486-3p的表达可明显减少细胞凋亡(24.1%±1.14%比45.9%±1.11%,P<0.05;21.9%±0.25%比42.3%±1.62%,P<0.05)。结论:胰腺癌患者血清中miR-486-3p较健康对照组明显升高,可促进胰腺癌细胞的增殖并抑制细胞凋亡而发挥促癌作用。

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染患儿血清miR-19a-3p和SOCS1的表达及临床意义

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)下呼吸道感染患儿血清微小RNA-19a-3p(miR-19a-3p)和细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)的表达及临床意义。方法 选取2019年1月—2022年1月在本院儿科接受的呼吸道感染患儿180例为研究对象。RSV-RNA结果呈阳性的患儿(80例)作为RSV感染组,将RSV-RNA结果呈阴性的患儿(100例)为对照组。根据入院时Lowell评分进一步将RSV感染组分为重度组(Lowell评分≥10分)和轻度组(Lowell评分<10分)。采用实时定量PCR检测血液中miR-19a-3p、SOCS1 mRNA水平;患儿血清中miR-19a-3p、SOCS1表达的相关性分析采用Pearson法。结果 两组中的临床表现(发热、气促、喘息、呕吐、腹泻)和影像学胸片(散在斑片状影)之间有显著性差异(P<0.05)。相较于对照组,RSV感染组患者血清中的IL-6、TNF-α、IL-1β水平显著升高(P均<0.05)。相较对照组,RSV感染组患者血清中的miR-19a-3p、SOCS1水平显著升高(P均<0.05)。相较于轻度组,RSV重度组患者血清中的miR-19a-3p、SOCS1水平显著升高(P均<0.05)。RSV患者血清miR-19a-3p与SOCS1、IL-6、TNF-α、IL-1β水平呈正相关(r=0.701、0.557、0.569、0.613,P均<0.05)。SOCS1与IL-6、TNF-α、IL-1β水平呈正相关(r=0.592、0.571、0.564,P<0.05)。ROC结果显示,RSV患者血清中miR-19a-3p、SOCS1水平及二者联合预测RSV感染严重程度的AUC分别为0.714、0.735、0.851,其中联合预测AUC显著高于二者单独预测AUC(Z_(二者联合-miR-19a-3p)=3.217,P<0.05)(Z_(二者联合-SOCS1)=3.679,P<0.05)。结论 RSV患者血液miR-19a-3p、SOCS1水平较高,二者成正相关性,且均与RSV患者的IL-6、TNF-α、IL-1β水平成正相关,与RSV患者严重程度密切相关,二者联合对RSV严重程度的预测效果较好。

微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic,miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF-β_(1)。实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织和细胞中miR-133a-3p和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用TargetScan数据库通过生物信息分析预测miR-133a-3p与TGF-β_(1)的3′非翻译区(3′-UTR)存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)和突变型(Mt)TGF-β_(1)3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体,分别将用脂质体2000包裹的Wt TGF-β_(1)或Mt TGF-β_(1)报告基因载体与miR-133a-3p mimics或miR-NC共转染入KF细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组,双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞双荧光素酶活性。Western blot检测空白对照组、miR-NC组、miR-133a-3p组KF细胞中TGF-β_(1)、Smad3蛋白的相对表达量。结果瘢痕疙瘩组织中miR-133a-3p相对表达量显著低于正常皮肤组织(t=18.988,P<0.05)。KF细胞中miR-133a-3p相对表达量显著低于NF细胞(t=18.679,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中miR-133a-3p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组,CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞中miR-133a-3p和CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-133a-3p组细胞凋亡率显著高于空白对照组和miR-NC组,细胞增殖活力显著低于空白对照组和miR-NC组(t=13.912、14.227、-8.020、-6.947,P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞凋亡率、细胞增殖活力比较差异无统计学意义(t=-0.607、0.448,P>0.05)。miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性显著低于miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组(t=-15.729、-19.490、-16.186,P<0.05)。miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性两两比较差异均无统计学意义(t=-0.596、0.847、0.842,P>0.05)。KF细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于NF细胞(t=5.758、9.027,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于miR-NC组(t=-4.913、-8.314,P<0.05)。miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量和细胞增殖活力显著高于miR-133a-3p组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组,细胞凋亡率显著低于miR-133a-3p转染组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。miR-133a-3p组与miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量及细胞凋亡率和细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-133a-3p可通过负调控TGF-β_(1)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,提示miR-133a-3p/TGF-β_(1)通路可能是瘢痕疙瘩治疗的一个新的靶点。

肾癌患者血清miR-23a-3p、miR-29a表达变化及临床意义

目的探讨肾癌患者血清微小RNA(miRNA)-23a-3p、miR-29a的表达变化及临床意义。方法选取80例肾癌患者为肾癌组,另选取同期52例体检健康者为对照组。采用qRT-PCR技术检测血清miR-23a-3p、miR-29a,比较肾癌组和对照组血清miR-23a-3p、miR-29a表达,分析血清miR-23a-3p、miR-29a表达与肾癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-23a-3p、miR-29a表达对肾癌的诊断价值。结果肾癌组血清miR-23a-3p、miR-29a表达高于对照组(P均<0.05)。血清miR-23a-3p、miR-29a表达与肾癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-23a-3p+miR-29a诊断肾癌的曲线下面积(AUC)为0.945(95%CI:0.892~0.977),明显大于miR-23a-3p(AUC=0.885,95%CI:0.818~0.934)、miR-29a(AUC=0.853,95%CI:0.781~0.909)单独诊断(P均<0.05)。结论肾癌患者血清miR-23a-3p、miR-29a表达上调,其表达变化与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关,可作为肾癌诊断指标。

p75NTR、LINGO-1、miR-23a-3p在脑出血中的表达及与病情严重程度相关性研究

目的分析神经营养因子受体p75(p75NTR)、LINGO-1、患者血清微RNA-23a-3p(mi R-23a-3p)在脑出血患者中的表达及与病情严重程度的相关性。方法选取脑出血患者132例作为脑出血组,另选取健康人80例作为健康组。采用实时荧光定量法检测p75NTR、mi R-23a-3p表达量,采用Western Blot检测LINGO-1表达量,分析三者在脑出血中的表达及与病情严重程度的相关性。结果与健康组相比,脑出血组p75NTR、LINGO-1、miR-23a-3p表达升高(均P<0.05)。随着脑出血严重程度的加重,p75NTR、LINGO-1、miR-23a-3p的升高加剧(均P<0.05),重度脑出血>中度脑出血>轻度脑出血患者(均P<0.05)。p75NTR、LINGO-1、mi R-23a-3p为影响脑出血严重程度的因素(均P<0.05)。相关性结果显示,p75NTR与LINGO-1正相关(P=0.479,P<0.05);p75NTR与miR-23a-3p正相关(=0.388,P<0.05);LINGO-1与mi R-23a-3p正相关(=0.361,P<0.05)。结论p75NTR、LINGO-1、miR-23a-3p在脑出血中表达升高,且与患者疾病严重程度相关,可作为评估患者疾病严重程度的指标。

miR-23a-3p通过调控SIRT1/FOXO1通路影响NAFLD小鼠肝脏脂质代谢的研究

目的:探究微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)通路在其中的作用。方法:qPCR检测miR-23a-3p在脂肪肝细胞模型及NAFLD小鼠模型中的表达情况。高脂饮食(HFD)诱导miR-23a-3p基因敲除(miR-23a KO)小鼠,设置野生型(WT)C57BL/6小鼠正常饮食(ND)组和HFD组及miR-23a KO小鼠ND组和HFD组,每组10只,HFD组小鼠均接受HFD 12周。对各组小鼠体重和肝脏指数进行统计;HE染色观察肝组织病理损伤变化;油红O染色检测肝脏组织脂质蓄积程度;生化分析检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、丙氨酸转氨酶(AST)、天冬氨酸转氨酶(ALT)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;qPCR检测肝脏脂代谢相关基因Srebp1、Fas、Pparγ、Pparα、Acc1和Cpt1的mRNA水平;双萤光素酶报告基因实验分析miR-23a-3p和SIRT1基因的靶向关系;Western blot检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)、SIRT1、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及FOXO1蛋白的表达。结果:与对照组比较,脂肪肝细胞模型、动物模型及db/db小鼠肝组织中miR-23a-3p表达显著升高。与HFD(WT)组比较,HFD(miR-23a KO)组体重和肝脏脏器系数显著降低;HE和油红O染色结果显示,HFD(miR-23a KO)组肝脏脂肪蓄积减轻;血清TC、TG、AST和LDL-C水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平显著升高(P<0.05);脂代谢相关基因Srebp1、Fas、Pparγ和Acc1的mRNA水平显著降低(P<0.05),Cpt1的mRNA水平显著升高(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验证明miR-23a-3p可以靶定SIRT1基因。Western blot结果显示,与HFD(WT)组比较,HFD(miR-23aKO)组SIRT1和PPARα表达显著增加(P<0.05),p-AMPK/AMPK比值显著升高(P<0.05),AcFOXO1/FOXO1比值显著降低(P<0.01)。结论:miR-23a-3p的缺失能够减轻HFD诱导的NAFLD小鼠肝脏脂质蓄积,改善肝脏的生理功能。miR-23a-3p的作用可能是通过靶定SIRT1基因而使FOXO1去乙酰化,进而影响肝脏脂质代谢。

血清miR-24-3p、H2AFX与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系研究

目的探讨血清微RNA(miR)-24-3p、H2A组蛋白家族成员X(H2AFX)与肝癌患者临床病理特征及术后复发的关系。方法选取2018年3月至2022年3月南通大学附属肿瘤医院收治的108例肝癌初诊患者为研究对象(肝癌组), 另选取同期于本院就诊的86例肝脏良性病变患者作为良性病变组, 行体检的64例健康者为对照组。采用荧光定量PCR法检测并分析各组受试者血清miR-24-3p、H2AFX水平, 对复发和未复发肝癌患者血清miR-24-3p、H2AFX水平进行比较, 对不同血清miR-24-3p、H2AFX水平肝癌患者临床病理特征进行比较, logistic回归分析肝癌患者术后复发的影响因素。结果至随访结束, 108例肝癌患者46例复发。对照组、良性病变组、肝癌组血清miR-24-3p水平分别为1.01±0.23、0.79±0.21、0.55±0.13, 差异有统计学意义(F=125.86, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清miR-24-3p水平均低于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清miR-24-3p水平低于良性病变组(P<0.05);3组血清H2AFX水平分别为1.02±0.25、1.27±0.31、1.59±0.37, 差异有统计学意义(F=65.40, P<0.001), 良性病变组、肝癌组患者血清H2AFX水平均高于对照组(均P<0.05), 肝癌组患者血清H2AFX水平高于良性病变组(P<0.05)。miR-24-3p、H2AFX高水平与低水平肝癌患者TNM分期(χ^(2)=7.85, P=0.005;χ^(2)=6.32, P=0.012)、分化程度(χ^(2)=11.59, P=0.001;χ^(2)=9.92, P=0.002)差异均有统计学意义。与未复发肝癌患者相比, 复发患者血清miR-24-3p水平明显降低(0.44±0.12比0.64±0.14), H2AFX水平明显升高(1.87±0.42比1.38±0.33), 差异均有统计学意义(t=7.79, P<0.001;t=6.79, P<0.001)。单因素分析显示, TNM分期(OR=1.57, 95%CI为1.05~2.35, P=0.029)、分化程度(OR=2.20, 95%CI为1.20~4.02, P=0.011)、miR-24-3p水平(OR=0.66, 95%CI为0.45~0.95, P=0.026)、H2AFX水平(OR=1.73, 95%CI为1.14~2.60, P=0.009)均是肝癌患者术后复发的影响因素;多因素分析显示, TNM分期(OR=2.10, 95%CI为1.14~3.86, P=0.017)、分化程度(OR=1.58, 95%CI为1.12~2.23, P=0.009)、miR-24-3p水平(OR=0.76, 95%CI为0.63~0.92, P=0.005)、H2AFX水平(OR=1.90, 95%CI为1.20~2.99, P=0.006)均是肝癌患者术后复发的独立影响因素。结论不同血清miR-24-3p、H2AFX水平的肝癌患者肿瘤TNM分期、分化程度差异均有统计学意义, 血清miR-24-3p、H2AFX水平是肝癌患者术后复发的影响因素。

微RNA-130a-3p对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞炎性因子的保护作用及机制研究

目的探讨微RNA-130a-3p(miR-130a-3p)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549炎性因子的保护作用及机制研究。方法不同浓度的LPS处理A549细胞,MTT检测细胞活性,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130a-3p水平。LPS诱导miR-130a-3p过表达的A549细胞,MTT检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α基因(HIF1A)、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-130a-3p与HIF1A关系。结果LPS处理后,A549细胞活性和miR-130a-3p表达水平显著降低(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平、A549细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。过表达miR-130a-3p提高了LPS诱导的A549细胞活性,降低了LPS诱导的A549细胞IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平和凋亡率(P<0.05)。miR-130a-3p负调控HIF1A表达,过表达HIF1A降低了过表达miR-130a-3p对LPS诱导的A549细胞活性、凋亡率及IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达的影响。结论miR-130a-3p通过抑制HIF1A表达降低LPS诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡和炎性反应。

放疗对血清miR-150-5p和miR-23a-3p表达水平的影响

目的:通过采集肿瘤患者放疗前后外周血,探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响,以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法:以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法,检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化,分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果:放疗后,患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t=4.97,Z=-2.77,P<0.05)。不同的肿瘤类型中,乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t=3.47、2.47、2.87,P<0.05),消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z=-1.99,P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05),而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t=2.04、-3.34、-2.29,P<0.05)。结论:放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达,其有作为辐射生物学标志物的潜力。

川陈皮素通过调控微RNA-374a-3p表达抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤研究

目的研究川陈皮素对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMECs)损伤的影响,分析其机制是否与调控微RNA(microRNA,miR)-374a-3p表达有关。方法采用50μg/ml的ox-LDL培养HBMECs,建立体外细胞损伤模型。将HBMECs分为对照(control,Con)组、ox-LDL组、ox-LDL+川陈皮素低剂量组、ox-LDL+川陈皮素中剂量组、ox-LDL+川陈皮素高剂量组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-374a-3p组、ox-LDL+川陈皮素+anti-miR-NC组、ox-LDL+川陈皮素+anti-miR-374a-3p组。检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性。分析细胞凋亡率和miR-374a-3p表达量。结果与Con组比较,ox-LDL组细胞MDA水平、凋亡率显著升高(P<0.01),SOD和CAT活性、miR-374a-3p表达显著降低(P<0.01)。与ox-LDL组比较,ox-LDL+川陈皮素低剂量组、ox-LDL+川陈皮素中剂量组、ox-LDL+川陈皮素高剂量组的MDA水平和凋亡率显著降低(P<0.01),SOD和CAT活性、miR-374a-3p表达显著升高(P<0.01)。与ox-LDL+miR-NC组比较,ox-LDL+miR-374a-3p组细胞MDA水平、凋亡率显著降低(P<0.01),SOD和CAT活性显著升高(P<0.01)。与ox-LDL+川陈皮素+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+川陈皮素+anti-miR-374a-3p组细胞MDA水平、凋亡率显著升高(P<0.01),SOD和CAT活性显著降低(P<0.01)。结论川陈皮素通过上调miR-374a-3p表达,能够减轻ox-LDL诱导的HBMECs凋亡和氧化应激损伤。

沙格列汀调控miR-23b-3p/EGR1轴对高糖诱导足细胞损伤的影响及机制研究

目的 探讨沙格列汀通过调控微小RNA(micro RNA,miR)-23b-3p/早期生长反应因子(early growth response factor,EGR)1轴对高糖诱导足细胞损伤的影响。方法 将人足细胞分为对照组、高糖组、高糖+沙格列汀组、高糖+沙格列汀+anti-miR-对照组以及高糖+沙格列汀+anti-miR-23b-3p组。分别检测细胞miR-23b-3p、EGR1信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达、增殖、凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肌间线蛋白、裂孔隔膜蛋白(Podocin、Nephrin)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(B cell lymphoma-2 related X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3以及EGR1表达,并验证miR-23b-3p与EGR1的靶向关系。结果 与对照组相比,高糖组的miR-23b-3p表达水平、增殖率、SOD、Podocin以及Nephrin均降低,EGR1表达、凋亡率、IL-1β、IL-6、MDA、ROS、Caspase-3、Bax以及肌间线蛋白均升高(P <0.05);与高糖组相比,高糖+沙格列汀组miR-23b-3p表达、增殖率、SOD、Podocin以及Nephrin均升高,EGR1表达、凋亡率、IL-1β、IL-6、MDA、ROS、caspase-3、Bax以及肌间线蛋白均降低(P <0.05);下调miR-23b-3p可减弱沙格列汀对足细胞损伤的改善(P <0.05);miR-23b-3p靶向负调控EGR1表达。结论 沙格列汀可能通过上调miR-23b-3p负调控EGR1,减轻高糖诱导的足细胞凋亡和损伤。