胰腺癌血清微RNA-486-3p的异常表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究胰腺癌患者血清微RNA(microRNA,miRNA/miR)-486-3p的表达情况及其在体外实验中对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:于消化科、胰腺外科及老年科病房收集确诊胰腺癌患者21例为试验组,20名健康成人为对照组,留取外周血并分离血清,实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血清中miR-486-3p的表达水平;体外实验采用细胞计数试剂盒8(cell-counting kit 8,CCK-8)法和流式细胞仪分别检测miR-486-3p对人胰腺癌细胞增殖、细胞凋亡的影响。结果:与健康对照组相比,胰腺癌患者血清中miR-486-3p的表达水平明显升高(50.73±0.82比34.80±0.74,P<0.05);体外实验中采用干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)瞬时转染的方法增高miR-486-3p的表达,使得人胰腺癌细胞SW1990和PANC-1的增殖能力明显增强(2.77±0.07比2.05±0.06,P<0.05;2.81±0.04比1.89±0.04,P<0.05);抑制miR-486-3p则可明显减少胰腺癌细胞的增殖(1.71±0.03比2.07±0.05,P<0.05;1.61±0.03比2.20±0.07,P<0.05);增高miR-486-3p的表达可明显减少细胞凋亡(24.1%±1.14%比45.9%±1.11%,P<0.05;21.9%±0.25%比42.3%±1.62%,P<0.05)。结论:胰腺癌患者血清中miR-486-3p较健康对照组明显升高,可促进胰腺癌细胞的增殖并抑制细胞凋亡而发挥促癌作用。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

血清微小RNA-1-3p及微小RNA-182-5p联合检测对原发性肝癌诊断及预后的预测价值研究

目的:探讨血清微小RNA-1-3p(miRNA-1-3p)及微小RNA-182-5p(miRNA-182-5p)联合检测对原发性肝癌(PHC)诊断及预后的预测价值。方法:选取2021年9月—2022年9月吉林省肿瘤医院收治的PHC患者78例作为PHC组,另选取同期健康体检者50名作为对照组;另根据随访3年后患者转归将PHC组患者分为存活组(n=56)和死亡组(n=22)。分别比较各组患者的血清miRNA-1-3p、miRNA-182-5p水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测对PHC预后的预测价值。结果:PHC组血清miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。死亡组血清miRNA-1-3p水平低于存活组,miRNA-182-5p水平高于存活组(P<0.05);死亡组、存活组miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测预测PHC预后的ROC曲线下面积为0.923,特异度为94.6%。结论:血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p与PHC密切相关,且联合检测对PHC预后的预测价值较高。

微小RNA-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平及诊断价值

目的探讨微小RNA(miR)-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平及诊断价值。方法选取2021年1月至2023年3月于三亚中心医院心内科就诊并确诊为原发性高血压的患者180例作为研究组,选取同期来我院体检且与研究组一般资料匹配的健康志愿者160例作为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应检测2组血清miR-483-3p水平。结果与对照组比较,研究组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压、舒张压水平升高(P<0.01)。研究组血清miR-483-3p水平高于对照组(2.15±0.57 vs 1.00±0.05,P<0.01)。研究组中高血压1级、2级、3级患者血清miR-483-3p水平呈明显升高趋势(1.44±0.45 vs 1.79±0.58 vs 3.35±0.64,P<0.05)。相关性分析显示,研究组血清miR-483-3p水平与高血压分级呈正相关(r=0.745,P=0.000);研究组血清miR-483-3p水平与TC、TG、LDL-C、收缩压、舒张压水平均呈正相关(P<0.01)。miR-483-3p、TC、LDL-C、收缩压、舒张压是原发性高血压的独立影响因素(P<0.05,P<0.01)。血清miR-483-3p水平预测原发性高血压的曲线下面积为0.923(95%CI:0.890~0.949)。结论miR-483-3p在原发性高血压患者血清中的水平随病情严重程度的加重呈上升趋势,对原发性高血压有较高的诊断价值。

血管性认知功能障碍病人血清微RNA-335-5p、血清应答因子水平及其临床意义

目的 探究血管性认知功能障碍(VCI)病人血清微RNA(miR)-335-5p、血清应答因子(SRF)水平及临床意义。方法以石家庄市人民医院2019年1月至2020年12月因脑卒中治疗后6个月出现VCI的110例病人为研究对象(VCI组),其中非痴呆型血管性认知功能障碍(VCIND)者48例(VCIND组)、血管性痴呆(VD)者62例(VD组)。同时间段该院脑卒中未合并认知障碍者110例为对照组。分析各组病人发病时(入院次日)、发病后6个月、发病后1年血清miR-335-5p、SRF水平。logistic回归模型分析脑卒中病人发生VCI的影响因素。Pearson法分析血清miR-335-5p与SRF水平的相关性。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-335-5p、SRF水平对VCI的预测价值。结果 VCI组发病时miR-335-5p水平0.76±0.15低于对照组1.06±0.07,而SRF水平1.52±0.24高于对照组1.01±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,对照组、VCIND组、VD组的miR-335-5p水平逐次降低(1.06±0.07比0.86±0.17比0.68±0.14),SRF水平依次增加(1.01±0.09比1.32±0.25比1.67±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。VD组、VCIND组受试者在发病后6个月及1年时SRF水平低于发病时,而miR-335-5p水平高于发病时(P<0.05)。三组蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、miR-335-5p、SRF组间、时间、交互作用差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,VCI组血清miR-335-5p与SRF水平存在负相关性(r=-0.64,P<0.001)。年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、miR-335-5p、SRF是影响脑卒中病人VCI的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,血清miR-335-5p、SRF、miR-335-5p联合SRF预测脑卒中后VCI的曲线下面积为0.88[95%CI:(0.84,0.93)]、0.90[95%CI:(0.86,0.95)]、0.93[95%CI:(0.89,0.97)]。结论VCI病人血清miR-335-5p水平明显降低,而SRF水平升高,二者水平变化与VCI严重程度有关,是导致脑卒中后VCI的影响因素,且二者联合对脑卒中后VCI有较高预测效能。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

微RNA-887-3p能抑制大鼠椎间盘纤维环细胞中MDM4表达和细胞增殖并促进细胞凋亡

目的探讨微RNA(microRNA,miRNA或miR)-887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织,离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4组:正常组(Normal group)是不做任何处理的原代纤维环细胞;对照组(Control group)用10 ng/mL白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理纤维环细胞24 h,形成退变细胞模型;干扰组(miR-887-3p inhibitor)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p抑制子;过表达组(miR-887-3p mimics)是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p模拟物。采用CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-887-3p和鼠双微体4(murine double minute 4,MDM4)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果免疫荧光染色法鉴定分离培养的细胞发现,大鼠椎间盘纤维环细胞中Collagen I的阳性率在90%以上,提示纤维环细胞纯度大于90%。实时荧光定量PCR结果显示,利用IL-1β构建纤维环退变细胞模型后,miR-887-3p表达水平与正常组相比显著上升(P<0.001);与对照组相比,转染miR-887-3p抑制子后,miR-887-3p表达水平显著下降(P<0.001)。CCK-8法检测结果表明,与正常组相比,对照组细胞活力显著下降(P<0.001);与对照组相比,抑制miR-887-3p的表达后,细胞增殖能力显著增强;miR-887-3p过表达后,细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测结果表明,与正常组相比,对照组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组的细胞凋亡率显著降低(P<0.001),miR-887-3p过表达组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果发现,与正常组相比,对照组中Bcl-2的表达水平显著降低(P<0.001),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.001);与对照组相比,miR-887-3p干扰组中Bcl-2和MDM4表达水平显著升高(P<0.01),Caspase-3的表达水平显著降低(P<0.01);而miR-887-3p过表达组中Bcl-2和MDM4表达水平显著降低(P<0.05),Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示,干扰miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达增加(P<0.001);过表达miR-887-3p后,MDM4蛋白和mRNA的表达降低(P<0.01,P<0.001)。结论miR-887-3p可能通过调控MDM4的表达来影响大鼠椎间盘纤维环细胞的增殖和凋亡,进而影响椎间盘退变的发生和发展。

微RNA-509-3p/干扰素刺激基因15轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的探究微RNA(miR)-509-3p/干扰素刺激基因15(ISG15)轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法2022年1―9月,将喉癌M4E细胞分为Con组、miR-NC组、miR-509-3p组、pcDNA-ISG15组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中miR-509-3p表达;细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Matrigel体外成管实验检测血管生成能力;蛋白质印迹法检测细胞中ISG15、VEGF蛋白表达;萤光素酶活性报告检测miR-509-3p和ISG15的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69中miR-509-3p表达(1.01±0.13)μg/L相比,喉癌细胞SCC-40、SCC-2、M4E中miR-509-3p表达[(0.61±0.08)、(0.45±0.07)、(0.18±0.07)μg/L]均降低,且M4E细胞中miR-509-3p表达低于SCC-40、SCC-2细胞(P<0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞中miR-509-3p表达增加[(1.17±0.05)μg/L比(118±0.03)μg/L];Con组细胞中miR-509-3p表达与miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞增殖(1.71±0.02比3.09±0.07)、侵袭(55.33±2.52比150.67±2.52)、迁移(30.58±2.08比98.33±1.53)、形成小管数量(61.28±2.15比135.62±2.54)及细胞中ISG15(0.24±0.03比1.11±0.13)、VEGF(0.35±0.02比0.99±0.04)蛋白表达均降低,细胞凋亡率[(18.76±0.18)%比(5.61±0.08)%]增加(P<0.05);Con组细胞增殖、侵袭、迁移、形成小管数量、凋亡率及细胞中ISG15、VEGF蛋白表达和miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR-509-3p组相比,pcDNA-ISG15组细胞增殖(3.25±0.06)、侵袭(144.00±2.65)、迁移(89.34±5.13)、形成小管数量(131.56±2.08)及细胞中ISG15(0.83±0.05)、VEGF蛋白(0.89±0.03)表达增加,细胞凋亡率降低(6.85±0.06)%(P<0.05)。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞血管生成及VEGF蛋白表达。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

长链非编码RNA DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p(miR-214-3p)在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义。方法 lnCAR数据库检索结肠癌组织、正常结肠组织中LncRNA DNAJC3-AS1表达情况;选取2016年5月至2019年1月北京市丰台中西医结合医院收治的86例结肠癌病人、53例结肠腺瘤性息肉病人为研究对象,收集结肠癌病人的结肠癌组织、对应癌旁组织及结肠腺瘤性息肉病人的结肠腺瘤性息肉,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定组织中lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平;分析结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平与结肠癌病人临床病理特征、预后关系;分析结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p相关性,生物信息学预测lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p的关系。结果 lnCAR数据库分析显示,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(4.40±0.49)高于正常结肠组织(4.00±0.36)(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,与结肠腺瘤性息肉(1.71±0.57、0.67±0.22)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(2.63±0.88)升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平(0.31±0.10)降低(P<0.05);与癌旁组织(1.04±0.35、1.01±0.34)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平在不同分化程度、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期方面,分布差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p呈负相关(r=-0.58,P<0.05),且lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p存在结合位点;lncRNA DNAJC3-AS1高表达组29.75个月、miR-214-3p低表达组30.16个月结肠癌病人累积生存率低于lncRNA DNAJC3-AS1低表达组34.69个月、miR-214-3p高表达组34.37个月(P<0.05)。结论 癌旁组织、结肠腺瘤性息肉、结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达依次升高,miR-214-3p表达依次降低,且结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p、临床病理特征、预后有关。

长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1靶向调控微RNA-128-3p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的探究长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌中的表达情况及靶向调控微RNA-128-3p(miR-128-3p)对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)定量分析2017年1月至2018年12月在郑州大学人民医院住院并进行手术治疗的38例结直肠癌病人癌组织及相应癌旁组织、结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT-29和LoVo)及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p的表达。将SW620细胞设为si-OIP5-AS1组、si-NC组、miR-128-3p mimic组、mimic-NC组、miR-128-3p inhibitor+si-OIP5-AS1组和inhibitor-NC+siOIP5-AS1组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力,采用蛋白质印迹法检测E2F1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达,采用双萤光素酶报告实验验证lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p的靶向关系。结果与癌旁组织相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌组织中表达显著升高(1.42±0.40比0.98±0.29,P<0.05),miR-128-3p表达显著降低(0.72±0.21比1.52±0.39,P<0.05),且两者在结直肠癌组织中的表达呈负相关;与FHC细胞(1.05±0.10)相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌细胞株[SW480(1.60±0.25)、SW620(2.19±0.33)、HT-29(1.62±0.23)和LoVo(1.95±0.20)]中的表达显著增高(均P<0.05),miR-128-3p表达(0.70±0.15、0.46±0.03、0.59±0.14、0.74±0.09比1.02±0.11)显著降低(均P<0.05)。lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p为相互作用靶基因,lncRNA OIP5-AS1表达下调或miR-128-3p表达上调均能降低vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,增高E-cadherin蛋白表达,抑制SW620细胞的增殖、侵袭和迁移。在转染si-OIP5-AS1的同时转染miR-128-3p inhibitor可增加vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,降低E-cadherin蛋白的表达,逆转lncRNA OIP5-AS1表达下调对SW620细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌中高表达,并靶向调控miR-128-3p参与结直肠癌的增殖、侵袭和迁移过程,lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p能为结直肠癌的诊断和靶向治疗提供潜在的应用价值。

微RNA-124-3p在溃疡性结肠炎病人外周血中的表达及意义

目的检测溃疡性结肠炎(UC)病人外周血中微RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达水平,并讨论其临床意义。方法选择121例UC病人(UC组)和60例健康体检者(对照组)作为研究对象进行前瞻性研究,UC组来源于2019年8月至2021年8月期间武汉市蔡甸区人民医院住院治疗的病人,对照组为同期来院进行健康体检的个体。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-124-3p在各组外周血中的表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测C-反应蛋白(CRP)在各组外周血中的表达水平。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP水平的相关性采用Pearson法,与UC内镜严重指数(UCEIS)评分、改良梅奥(Mayo)评分的相关性分析采用Spearman法。结果与对照组相比,UC组病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.84±0.22比0.52±0.17,P<0.05),CRP水平显著升高[(7.08±2.52)mg/L比(9.83±2.91)mg/L,P<0.05]。与UC缓解期病人相比,活动期病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.67±0.22比0.44±0.14,P<0.05),CRP水平显著升高[(9.06±2.85)mg/L比(10.25±2.94)mg/L,P<0.05]。UC不同临床活动度病人外周血miR-124-3p表达水平由高至低依次为轻度(0.53±0.16)、中度(0.45±0.13)、重度(0.30±0.09),CRP表达水平及UCEIS评分、改良Mayo评分由高至低依次为重度[(12.03±3.02)mg/L、(5.97±1.82)分、(11.53±0.46)分]、中度[(10.35±2.79)mg/L、(4.82±1.51)分、(7.70±1.64)分)]、轻度[(8.74±2.83)mg/L、(3.03±0.90)分、(3.98±0.95)分],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP、UCEIS评分及改良Mayo评分均呈负相关(r=−0.57、−0.44、−0.59,P<0.05)。结论UC病人外周血miR-124-3p表达水平降低,其水平变化与UC疾病活动和病情程度密切相关。

微RNA-375-5p对心力衰竭大鼠的保护作用及机制

目的探讨微RNA(miR)-375-5p对心力衰竭(HF)大鼠的保护作用及相关机制。方法将50只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+Compound C(CC)组,每组10只。HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+CC组大鼠腹腔注射阿霉素溶液制备HF模型,假手术组大鼠腹腔注射等量的NaCl溶液。造模结束后次日,miR-375-5p组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL,miR-NC组大鼠经尾静脉注射miR-NC mimics 100μL,假手术组和HF组大鼠经尾静脉注射等量生理盐水,miR-375-5p+CC组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂CC(0.2 mg·kg^(-1));各组大鼠均每日给药1次,连续给药4周。使用彩色多普勒超声仪检测各组大鼠心功能指标,反转录聚合酶链反应检测各组大鼠心肌组织中miR-375-5p表达,酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平,苏木精-伊红染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹检测各组大鼠心肌组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、AMPK、沉默信息调节因子3(SIRT3)蛋白的相对表达量。结果与假手术组比较,HF组、miR-NC组和miR-375-5p组大鼠的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。miR-NC组与HF组大鼠LVEF、LVFS、LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率、血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、GSH水平、SOD活性、心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量及SIRT3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与HF组相比,miR-375-5p组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平、心肌组织中p-AMPK/AMPK及miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著升高,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著降低(P<0.05)。与miR-375-5p组相比,miR-375-5p+CC组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。假手术组大鼠心肌细胞规律排列,细胞核明显且无炎症细胞浸润;HF组大鼠心肌细胞形态发生明显改变,排列紊乱,细胞间隙变大,染色变浅,且出现心肌纤维化,有大量的炎症细胞浸润,HF组和miR-NC组大鼠心肌组织病理学变化无明显差异;与HF组相比,miR-375-5p组大鼠心肌细胞排列明显有序,细胞坏死程度和范围明显减少;miR-375-5p+CC组与HF组大鼠心肌组织病理学变化相似。结论miR-375-5p能抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,进而对HF大鼠发挥保护作用,其机制可能与激活AMPK/SIRT3信号通路有关。

血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1、微RNA-329-3p表达水平与急性脑梗死发生风险的关系

目的探究急性脑梗死(ACI)病人血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)、微RNA-329-3p(miR-329-3p)表达水平变化及其与疾病发生风险的关系。方法选取2020年9月至2021年9月在南京市江宁医院收治的162例ACI病人作为观察组,根据病人美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为轻度ACI组60例(NIHSS≤7分)、中度ACI组56例(8分≤NIHSS≤13分)和重度ACI组46例(NIHSS≥14分),另选取同时期在南京市江宁医院体检的165例健康志愿者作为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA SNHG1、miR-329-3p水平;采用Spearman法分析lncRNA SNHG1、miR-329-3p与NIHSS评分的关系;采用Pearson法分析lncRNA SNHG1与miR-329-3p水平的关系;采用ROC曲线分析lncRNA SN⁃HG1、miR-329-3p对ACI的诊断价值;多因素logistic回归分析影响ACI发生的危险因素。结果与对照组(1.03±0.04、1.01±0.03)相比,观察组病人血清lncRNA SNHG1表达水平(0.34±0.08)显著降低(P<0.05),miR-329-3p水平(2.15±0.70)明显升高(P<0.05);lncRNA SNHG1表达水平随疾病严重程度增加而显著降低(0.43±0.09、0.35±0.08、0.21±0.07)(P<0.05),miR-329-3p水平随疾病严重程度增加而明显升高(1.51±0.50、2.20±0.69、2.92±0.97)(P<0.05);ACI病人血清lncRNA SNHG1水平与NIHSS评分呈负相关(P<0.05),miR-329-3p水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05),lncRNA SNHG1与miR-329-3p表达呈负相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,与lncRNA SNHG1单独诊断相比,二者联合诊断ACI发生的ROC曲线下面积(AUC)差异无统计学意义(Z=1.33,P=0.920),与miR-329-3p单独诊断相比,二者联合诊断ACI发生的AUC更高(Z=2.93,P=0.003);多因素logistic回归分析显示,lncRNA SNHG1低水平、miR-329-3p高水平是影响ACI发生的危险因素(P<0.05)。结论ACI病人血清lncRNA SNHG1表达水平降低,miR-329-3p表达水平升高,且与病人病情严重程度有关。

基于微RNA-22-3p探讨双醋瑞因联合依托考昔治疗痛风性关节炎的作用机制

目的 基于微RNA(miR)-22-3p探讨双醋瑞因联合依托考昔治疗痛风性关节炎的作用机制,为临床应用提供依据。方法 选择秦皇岛市第一医院2021年3—9月收治的80例病人并依照随机信封法分为观察组和对照组;对照组给予依托考昔治疗,在对照组基础上观察组给予双醋瑞因治疗,同期选择50例高尿酸血症病人作为高尿酸组;参照《中药新药临床指导原则》中标准对病人治疗临床疗效进行判断,治疗前及治疗后对病人关节疼痛、症状体征积分进行调查;治疗前及治疗后检测受试者C反应蛋白(CRP)、血沉、肌酐、尿酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8水平;检测外周血中单个核细胞(PBMCs)中miR-22-3p表达情况;采用Spearman相关性检验分析miR-22-3p探讨双醋瑞因联合依托考昔治疗痛风性关节炎疗效相关性,采用线性回归模型分析miR-22-3p与尿酸水平关系。结果 观察组总有效率97.50%高于对照组90.00%(P<0.05);治疗后观察组病人数字等级量表(NRS-11)及症状体征积分均明显低于对照组(5.33±0.91)分比(3.12±0.87)分;(4.83±0.77)分比(3.81±0.84)分,(P<0.05);治疗后观察组病人CRP、血沉、肌酐、尿酸均明显低于对照组(14.85±1.22)mg/L比(10.42±1.02)mg/L,(18.43±1.84)mm/h比(14.85±1.12)mm/h,(84.35±1.93)μmol/L比(81.20±1.84)μmol/L,(408.29±13.24)μmol/L比(350.11±10.21)μmol/L,(P<0.05);治疗后观察组病人IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α均明显低于对照组(37.85±3.77)ng/L比(31.29±3.84)ng/L,(57.63±6.11)ng/L比(41.21±3.45)ng/L,(143.29±9.92)ng/L比(103.23±8.54)ng/L,(72.39±2.84)ng/L比(61.29±2.17)ng/L,(P<0.05);治疗后观察组病人miR-22-3p水平明显高于对照组1.13±0.11比0.84±0.12,(P<0.05);治疗后观察组病人血中miR-22-3p与尿酸水平呈显著负相关关系,其相关性模型为Y=-119.58X+488.87,R2=0.9143;痛风性关节炎病人血中miR-22-3p与双醋瑞因联合依托考昔治疗临床疗效呈显著性负相关关系(r=-0.64,P<0.05)。结论 采用双醋瑞因联合依托考昔治疗痛风性关节炎后可有效调控体内miR-22-3p水平,改善病人治疗临床疗效。

结直肠癌患者血清miR-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义

目的结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义。方法回顾性选择2020年6月至2022年11月在沧州市人民医院就诊的结直肠癌患者116例为结直肠癌组,同时选取同期在本院治疗的结肠息肉患者60例作为结直肠良性肿瘤组,选择同期在本院行健康体检者60名为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平;采用Pearson相关性分析对结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平的相关性进行分析;分析结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与病理特征的关系;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p、miR-200b-3p表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于对照组,且结直肠癌组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于结直肠良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平呈正相关(r=0.562,P<0.05)。结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P<0.05),其中低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度T 3~T 4的结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平显著低于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度T_(1)~T_(2)的患者(P<0.05)。血清miR-150-5p、miR-200b-3p单独及联合诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.828、0.893,联合诊断AUC显著高于单独预测AUC(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平降低,二者可作为诊断结直肠癌发生的辅助指标。

血清外泌体miR-486-3p对非小细胞肺癌早期诊断价值

目的分析血清外泌体miR-486-3p对非小细胞肺癌的早期诊断价值。方法选择非小细胞肺癌病人120例为观察组,同期体检健康志愿者120例为对照组,均采集空腹静脉血,磷钨酸钠溶液染色后采用透射电镜观察外泌体形态,Western blot方法检测外泌体标志性蛋白CD81、TSG101表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-486-3p水平,采用化学发光法检测血癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清外泌体miR-486-3p诊断非小细胞肺癌的灵敏度和特异度。结果透射电镜观察可见,外泌体呈盘状囊泡样结构,直径为20~300 nm,颗粒状。Western blot实验鉴定表面标志蛋白CD81、TSG101证实为外泌体。观察组血清CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1水平均高于对照组(t=10.701~31.406,P<0.01),miR-486-3p水平低于对照组(t=17.155,P<0.01);观察组高龄、男性、有淋巴转移病灶及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期病人的miR-486-3p表达水平均低于中青年、女性、无淋巴转移性病灶及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期病人(t=8.168~19.658,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体miR-486-3p诊断非小细胞肺癌的曲线下面积(AUC)为0.781,95%置信区间(CI)为0.724~0.839,灵敏度为51.67%,特异度为98.33%,最佳界值为0.945。结论血清外泌体miR-486-3p对非小细胞肺癌具有一定的早期诊断价值,血清外泌体miR-486-3p表达水平越低,非小细胞肺癌病人恶化程度越高。

血清微小RNA-222-3p在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨血清微小RNA-222-3p(mi R-222-3p)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达及其临床意义。方法提取121例PTC及甲状腺良性疾病患者血清中的总RNA,采用q RT-PCR方法检测mi R-222-3p的表达情况,分析其与PTC临床病理特征的关系,并探讨其对PTC的临床诊断价值。结果血清mi R-222-3p在PTC患者中的中位表达水平显著高于良性对照组(2.2188 vs0.7022,P<0.05)。血清mi R-222-3p的表达水平与PTC的肿瘤最大径、双侧累及、病灶数量及淋巴结转移状况等密切相关(P均<0.05),但与性别、年龄、被膜侵犯及TNM分期等无关(P均>0.05)。ROC曲线分析显示,mi R-222-3p诊断PTC的AUC为0.717,灵敏度为79.75%,特异性为61.90%。结论血清mi R-222-3p在PTC患者中高表达,其表达水平能反映PTC的进展情况,并对PTC的临床诊断具有一定价值。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。