人工关节置换围手术期预防性应用不同抗生素血清的最佳时机

目的:人工关节置换术患者围手术期预防性应用不同的抗生素血清的最佳时机分析。方法:于2000-05/2001-03解放军总医院骨科行人工关节置换术患者90例,随机分为6组,术前1d、术前1h、手术开始后30min分别静脉滴注青霉素类氨苄青霉素1.5g和头孢类头孢呋辛2.0g,每组15例,皮试无药物过敏。采集手术开始时周围静脉血、首侧肢体切骨时骨质渗血、次侧肢体切骨时骨面出血、手术结束时引流管引流血10mL,备测。采用微量稀释法作血清杀菌活性(无菌生长的最低血清稀释倍数)测定,比较不同给药时间、不同时段术野出血的抗菌效能。结果:纳入患者90例,均进入结果分析。①不同抗生素血清杀菌活性的比较:氨苄青霉素和头孢呋辛对临床常见致病菌的血清杀菌活性接近。②不同时段抗生素血清杀菌活性≥1∶8比较:术前1d给药,术野血清杀菌活性微弱。氨苄青霉素于术前1h给药在手术开始至处理首侧肢体切骨时以及手术开始后30min给药在首侧肢体切骨至次侧肢体切骨时血清杀菌活性≥1∶8大于其他时段,差异显著(P<0.05);头孢呋辛于术前1h给药在手术开始至首侧肢体切骨时以及手术开始后30min给药在次侧肢体切骨至手术结束时血清杀菌活性≥1∶8大于其他时段,差异显著(P<0.05)。结论:术前1h至手术开始后静脉应用抗生素可在关节假体植入的主要阶段保持较高的术野血抗菌效能,从而有可能进一步减少术后感染的机会。但是不同抗生素的应用时机还应根据其药代动力学的差异进行相应调整。

Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体内外抗菌活性的初步研究

目的评价sansanmycinA对临床分离铜绿假单胞菌的体内、外抗菌活性。方法体外试验以微量肉汤稀释法测定sansanmycinA同时对照10种药物对150株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC），以平皿计数法测定最低杀菌浓度（MBC）；半体内试验以微量稀释法测定sansanmycinA的血清抑菌活性（SBS）和血清杀菌活性（SBA）。结果Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体外抗菌活性与哌拉西林相似，其MIC50和MBC50分别为8和16μg／mL，MIC范围为2-〉512gg／mL，MBC范围为2～〉512μg／mL，头孢曲松和替卡西林对铜绿假单胞菌的MIC50和MBC50较sansanmycin A高2-4倍。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌显示浓度依赖性杀菌作用。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌峰时SBS和SBA中位数分别为1：256和1：128。结论SansanmycinA对铜绿假单胞菌显示较强的体外和体内杀莴活件，有讲一步研究和开发的价佰。

成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗对5～59岁健康人群的免疫原性再评价

目的：对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在5～59岁健康人群中的免疫原性进行再评价。方法对2005年在广西河池市进行的临床试验中采集的血清，采用国际标准化的酶联免疫吸附试验（ELISA）和血清体外杀菌试验（SBA）方法检测血清中抗A群C群脑膜炎球菌荚膜多糖的特异性IgG抗体含量和对A群C群脑膜炎球菌的抗体杀菌功能。结果免疫前、后，A群血清中抗荚膜多糖特异性IgG抗体平均几何浓度（GMC）分别为23．66μg/ml和78．83μg/ml （P＜0．05），C群分别为1．23μg/ml和51．25μg/ml （P＜0．05）；免疫前、后血清中抗荚膜多糖IgG抗体浓度≥2μg/ml的比例，A群分别为99％和100％（P＞0．05），C群为20％和99％（P＜0．05）；免疫后较免疫前抗荚膜多糖IgG抗体浓度≥4倍升高的比例，A群为34％和C群为100％。免疫前、后血清中针对脑膜炎球菌的杀菌抗体平均几何滴度（GMT），A群分别为1164和5530（P＜0．05），C群分别为4和6225（P＜0．05）；免疫前、后血清杀菌抗体GMT≥128的比例，A群分别为91％和99％（P＞0．05），C群分别为14％和96％（ P＜0．05）；免疫后较免疫前血清杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为A群53％和C群100％。免疫前、后血清中抗荚膜多糖IgG抗体浓度和杀菌抗体滴度之间的Pearson相关系数，A群分别为r＝0．15和r＝0．23，C群r＝-0．14和r＝0．58（P＜0．05）。结论本研究以标准化检测方法产生的具体免疫原性数据，证明A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗良好的免疫原性。

B群脑膜炎球菌重组H因子结合蛋白的免疫原性研究

目的:通过检测血清抗体滴度和杀菌抗体检测(SBA)评价重组H因子结合蛋白(factor H binding protein,fHBP)的免疫原性。方法:选择并合成fHBP序列,连接至pET43.1a质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达两个亚家族的重组fHBP蛋白,fHBPA和fHBPB,经过纯化后免疫家兔和小鼠,通过ELISA和SBA试验检测免疫抗血清效价和B群脑膜炎球菌流行菌株的杀菌滴度。结果:fHBP免疫兔血清效价均大于2.0×10^(6),免疫小鼠血清效价高于1.0×10^(6)。69株流行株SBA试验中fHBP免疫兔血清对41株A亚家族和20株B亚家族均有大于1∶128杀菌滴度,亚家族靶菌之间没有交叉保护作用。fHBPA小鼠血清对A亚家族流行株Nm210902、Nm211009、Nm450522平均滴度为1∶1024、1∶608、1∶861,对Nm510703、Nm311304、Nm431002流行株的滴度为1∶234、1∶861、1∶430;fHBPB小鼠血清对B亚家族流行株Nm311302、Nm311113和Nm321114的杀菌滴度分别是1∶2896、1∶1878和1∶430。而fHBPA和fHBPB混合蛋白质免疫鼠血清Nm210902、Nm510703和Nm311302平均滴度分别1∶876、1∶274、1∶1858,对3株靶菌均存在有效杀菌。结论:fHBP免疫抗血清效价均在1.0×10^(6)水平以上,对61株B群流行株的杀菌滴度大于1∶128,对69株B群脑膜炎球菌流行株有94.2%的保护效果。

Tn-seq法筛选高毒力肺炎克雷伯菌新毒力基因

目的建立转座子突变文库,筛选高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKp)的新毒力基因。方法构建转座子突变文库,血清处理,通过转座子测序(transposon sequencing,Tn-seq)比较分析血清处理前后各基因突变株在文库中丰度变化,并对筛选出的基因进行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)注释和富集分析。结果以处理后丰度低于初始丰度20%为界,共筛选出405个基因,其中351个基因在HS11286、NJST258_1、NTUH-K2044和RJF293等4株参考菌株中保守存在,占86.7%,10个基因为NTUH-K2044和RJF293两株高毒力株共有而低毒力株HS11286和NJST258_1缺失;荚膜多糖基因簇中基因如糖基转移酶基因wzy、聚集蛋白基因wzi、荚膜转运蛋白基因wza等突变株在血清处理后不能检出,气杆菌素、沙门氏菌素等铁载体基因簇在各文库中的丰度变化不超过1倍;KEGG注释结果显示,注释最多的基因为参与氨基酸代谢、辅助因子和维生素代谢、碳水化合物代谢等。结论Tn-seq是功能基因筛选的可靠方法,本研究成功筛选出405个hvKp的候选新毒力基因,为后续深入研究hvKp的新毒力基因功能和调控机制提供实验依据。