血清淀粉样P成分的DNA结合特性

目的 检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法 用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴细胞等不同DNA,用DOT-EIA方法检测SAP与它们的结合活性,用巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响。结果 人和小鼠SAP均与细菌DNA结合最强,其次为质粒、酵母DNA,与淋巴细胞DNA和小牛胸腺DNA的结合较弱,与单链λDNA结合最弱;与来源于活化状态小鼠淋巴细胞DNA的结合力高于非活化状态;SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可促进巨噬细胞对DNA的吞噬。结论 SAP与不同DNA结合活性各异。

血清淀粉样P成分转基因小鼠模型的建立

目的:建立可表达血清淀粉样P成分(SAP)转基因小鼠模型,以研究SAP基因的功能。方法:采用基因重组技术将SAP基因插入到pCMV-Tag5A真核表达载体上。经BciVI限制性内切酶酶切后,琼脂糖凝胶电泳回收2.7 kb目的片断,受精卵原核显微注射法将其注入雄原核,制备转基因小鼠。采用PCR法在基因水平筛选SAP转基因小鼠阳性小鼠;免疫沉淀法结合免疫印迹法在蛋白水平检测SAP基因在PCR阳性转基因小鼠中的表达情况。结果:成功构建了pCMV-Tag5A/mSAP真核表达载体。经显微注射法将2.7 kb线性目的基因片断注射入受精卵雄原核,移植入代孕母鼠,所生127只小鼠,其中PCR鉴定获得10只转基因阳性小鼠。免疫沉淀法和免疫印记法随机检测83#♂founder、7#♀founder与C57 BL/6J小鼠回交F1代PCR阳性转基因小鼠血清中外源SAP基因蛋白水平的表达,发现均有表达。结论:该研究以C57BL/6J小鼠为研究对象,成功地产生能稳定遗传SAP基因的过表达转基因小鼠模型,它将有利于研究SAP基因在炎症、淀粉样沉淀、自身免疫系统中的作用。

血清淀粉样P物质对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究血清淀粉样P物质(SAP)对血清对氧磷酶1(PON1)活性、炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响,探讨SAP调节动脉粥样硬化的可能机制。方法 C57/BL6雄性小鼠6只为正常组,予普通饮食喂养;雄性Apo E-/-小鼠12只高脂饲料喂养12周,随机分为SAP组和PBS组,每组各6只,SAP组予腹腔注射SAP(6mg/g),隔天1次,共14d,PBS组予腹腔注射PBS(6mg/g),隔天1次,共14d。第16周时收集各组血液及动脉标本,检测小鼠血清血脂4项和PON1活性,ELISA检测血清SAP和MCP-1水平,HE染色观察动脉斑块大小,油红O染色观察斑块内脂质沉积情况,免疫组化检测斑块内SAP的表达。结果与正常组相比,PBS组和SAP组小鼠血清PON1活性明显下降(P<0.01),MCP-1水平明显增高(P<0.01),血管内大量斑块形成;与PBS组相比,SAP组小鼠血清PON1活性增高(P=0.046),MCP-1水平明显下降(P=0.032),血管内斑块面积减少(P=0.001),斑块内油红O阳性脂肪细胞数量减少(P=0.03)。结论 SAP可能通过提高PON1活性、降低MCP-1水平而延缓动脉粥样硬化的发生发展。

SAP基因注射干预小鼠SLE样综合征的发生

目的 :研究SAP基因注射对SLE发病的干预作用 ,并进一步探讨SAP发挥作用的可能机制。方法 :通过RT PCR方法克隆SAP基因 ,构建其真核表达质粒pcDNA3 SAP ,观察SAP基因注射对活化淋巴细胞免疫诱导小鼠产生的SLE样综合征的干预作用 ,以ELISA方法检测抗dsDNA抗体的产生情况 ,以免疫荧光法检测肾脏免疫复合物沉积 ;通过巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响 ;用增殖实验检测巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后对预致敏淋巴细胞活化的影响。结果 :SAP基因注射可有效干预小鼠SLE样综合征的发生 ,SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可明显促进巨噬细胞对DNA的吞噬 ,并且巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后不引起预致敏淋巴细胞的增殖。结论

^(131)I-SAP的制备及应用安全性研究

目的探讨一种新型淀粉样变性诊断标记物131I-SAP的制备方法及其应用安全性。方法应用Iodogen法对SAP标准品进行131I标记;纸层析法测定131I-SAP的标记率与放射化学纯度。将131I-SAP分别于4℃和37℃新鲜人血清中0h,24h,48h,72h和96h,测定放射化学纯度,评价其体外稳定性。对131I-SAP进行热原、异常毒性等安全性实验。结果131I-SAP的标记率为70.6%,96h后的放射化学纯度仍大于90%。热原、异常毒性实验均为阴性。结论131I-SAP具有较好的体外稳定性,并且无热原及明显毒性反应,适合进一步临床实验及应用的安全性。

血清Pentraxin-3在肺癌诊断及疗效评估中的价值研究

目的 分析血清Pentraxin-3（PTX-3）在肺癌诊断及疗效评估中的价值.方法 多中心验证试验.选择2011至2013年820例肺癌患者、462例肺良性疾病患者及522名健康对照者,来自多个独立的研究中心,分为实验组和验证组.ELISA或电化学发光法检测血清PTX-3、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白片段19（CYFRA21-1）及神经特异性烯醇化酶（NSE）水平.ROC曲线确定PTX-3最佳cut-off值,评估血清标记物诊断肺癌及早期肺癌的临床价值.对61例行肺癌切除术的患者,检测术后3d、7d、14d血清PTX-3水平,并进行随访研究.结果 实验组和验证组肺癌患者血清PTX-3水平分别为9.21（6.13 ～12.80）和10.4（5.54～13.11） g/L,明显高于肺良性疾病组的5.28（3.42～8.53）、6.52（3.84～7.89） g/L和健康对照组的2.18（0.54 ～5.44）、2.44（0.67～5.87） g/L,差异有统计学意义（实验组Z=8.161、14.118,P均＜0.05;验证组Z=9.832、17.595,P均＜0.05）.ROC曲线分析显示,PTX-3诊断肺癌的最佳cut-off值为8.03g/L,实验组和验证组患者血清PTX-3诊断肺癌的敏感度和特异度分别为76.1％、75.2％和71.3％、89.2％;PTX-3诊断肺癌的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.836、0.824;实验组和验证组患者血清PTX-3的AUC均明显高于CEA和CYFRA21-1.在早期肺癌的诊断中,PTX-3在实验组和验证组的敏感度和特异度分别为79.1％、62.2％和71.3％、69.6％,AUC分别为0.764、0.744. PTX-3诊断早期肺癌的AUC高于CEA和CYFRA21-1.PTX-3和NSE诊断小细胞肺癌的AUC差异无统计学意义,PTX-3的敏感度高于NSE.61例行肺癌切除术的患者术后3d的PTX-3水平为（7.85±3.91） g/L,和术前的11.12（9.12～ 12.59） g/L相比,差异有统计学意义（Z =4.32,P＜0.01）,术后14 d的PTX-3水平为（5.12 ±2.54） g/L,和术后7d的（7.13±3.42） g/L相比,差异有统计学意义（=2.143,P =0.023）.血清PTX-3和CRP在肺癌组、肺良性疾病组及健康对照组均有相关性（r =0.364、0.592、0.512,P值均＜0.05）.结论 血清PTX-3在肺癌及早期肺癌诊断中有较高的敏感度和特异度,肺癌切除术后PTX-3水平明显下降,可以作为肺癌新的肿瘤标记物,辅助肺癌诊断及预后判断.

肝素结合蛋白和正五聚蛋白3在新生儿细菌感染性疾病诊断中的价值

目的探讨肝素结合蛋白(HBP)和正五聚蛋白3 (PTX3)对新生儿细菌感染性疾病的临床诊断价值。方法采用回顾性分析方法,选取2017年3月至11月武汉大学人民医院新生儿科30例新生儿脓毒症(脓毒症组)、84例局部细菌感染新生儿(一般感染组)及50例单纯高胆红素血症新生儿(对照组)。一般感染组和脓毒症组的114例细菌感染新生儿中,有39例合并休克(休克组),75例未合并休克(非休克组)。分别采用免疫比浊法和双位点夹心酶联免疫吸附实验测定HBP和PTX3水平,并收集血清降钙素原(PCT)及全血白细胞(WBC)计数等实验室检查数据。非正态分布数据的比较采用非参数检验,各指标诊断性能比较采用受试者工作特征曲线(ROC),各指标相关性分析采用Pearson相关系数。结果脓毒症组、一般感染组和对照组HBP值分别为(64.41±78.51)ng/ml、(47.16±50.59)ng/ml、(31.97±20.76)ng/ml,PTX3值分别为(2.23±1.44)ng/ml、(1.76±0.94)ng/ml、(1.26±0.66)ng/ml,PCT值分别为(31.92±36.65)ng/ml、(7.72±9.28)ng/ml、(1.87±5.02)ng/ml。脓毒症组PTX3、PCT水平显著高于一般感染组(Z=3.74,Z=5.01,P均<0.05);也显著高于对照组(Z=3.98,Z=5.20,P均<0.05)。脓毒症组HBP水平高于一般感染组,但差异无统计学意义(Z=1.16,P>0.05);也高于对照组,差异有统计学意义(Z=2.37,P<0.05)。休克组PTX3和PCT水平显著高于非休克组(Z=2.20,Z=3.70,P均<0.05);休克组HBP水平高于非休克组,但差异无统计学意义(Z=0.37,P>0.05)。HBP、PTX3、PCT诊断新生儿细菌感染性疾病曲线下面积(AUC)分别为0.683、0.802、0.869;HBP、PTX3、PCT三者联合诊断优于单指标诊断,AUC最大为0.910。PTX3与PCT呈正相关(r=0.242,P<0.05)。结论PTX3和PCT能有效辅助临床诊断新生儿细菌感染性疾病,联合PTX3、PCT和HBP诊断优于单指标诊断。

胎盘组织中五聚素3的表达及其与重度子痫前期发病的关系

目的探讨重度子痫前期孕妇胎盘组织中五聚素3（PTX3）的表达及其与重度子痫前期发病的关系。方法选择2010年10月至2011年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的孕妇53例，其中重度子痫前期孕妇23例为子痫前期组，足月择期行剖宫产的健康孕妇30例为对照组。采用免疫组化SP法检测PTX3蛋白在胎盘组织中的表达部位，分别采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测两组孕妇胎盘组织中PTX3 mRNA和蛋白的表达水平。结果（1）胎盘组织中PTX3的表达部位：子痫前期组和对照组胎盘组织中均有PTX3蛋白的表达，且表达部位基本一致，主要表达于血管周围间质、蜕膜细胞及终末绒毛中。子痫前期组胎盘组织中可见中性粒细胞的浸润。（2）胎盘组织中PTX3 mRNA及蛋白的表达水平：子痫前期组孕妇胎盘组织中PTX3mRNA的表达水平为1．98±0．54，对照组为0．87±0．27，子痫前期组PTX3 mRNA表达水平高于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。子痫前期组孕妇胎盘组织中PTX3蛋白的表达水平为1．42±0．29，对照组为0．56±0．25，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PTX3在重度子痫前期孕妇胎盘组织中呈高表达，可能与重度子痫前期的发病有关。