新生儿血清游离胆红素的测定及临床应用价值探讨

[目的]探讨过氧化物酶(POD)法检测新生儿血清游离胆红素(UB)的临床适用性及应用价值。[方法]向胆红素标准品溶液(1、2、3μmol/L)加入H_(2)O_(2)(0.33 mol/L)和三种不同终末浓度(0.019、0.038、0.075μg/mL)的辣根过氧化物酶(HRP)以获得标准化的HRP一级速率常数Kp;新生儿血清上样量25μL,稀释倍数41.6,于37℃且避光条件下用2.4、4.8μg/mL HRP检测血清UB水平,并验证该方法学的准确性、精密度以及稳定性;收集33例黄疸患儿的一般情况及临床资料,主要包括血清总胆红素(TSB)、间接胆红素(IDB)、白蛋白(ALB)、胆红素与白蛋白摩尔比值(BAMR)等;用Graphpad Prism 8.0统计分析实验数据。[结果]在pH值为7.4±0.2,反应温度37℃且避光条件下,标准化Kp为(7.20±1.08)mL·μg^(^(-1))·min^(-1)。HRP活性和UB水平分别于-20℃冻存3周和1周内无明显下降。不同UB水平血清样品的平均日内、日间变异系数均小于10%。本研究用POD法检测33例黄疸患儿(胎龄≥35周)的血清UB范围为(0.32~1.20)μg/dL,与TSB、IDB及BAMR均显著相关。有5例UB水平≥1.0μg/dL,强光疗者占60%(3/5)。[结论]采用POD法结合常见设备分光光度计检测新生儿血清UB水平不仅操作简易、检测快速,且试剂成本低,具有良好的准确性和精密度,便于临床开展。血清UB的测定对新生儿黄疸的临床管理有一定的指导意义。

HPLC检测新生儿血清游离未结合胆红素的方法学的建立

目的探索HPLC法检测新生儿血清游离未结合胆红素(Free Bilirubin,FB)。方法色谱柱ODS-C18柱(150.0mm×4.6mm×5.0μm),流动相:甲醇-醋酸铵冰乙酸溶液(96∶4),流速0.9ml/min,柱温30℃,检测波长458nm,进样量20μl。检测超滤离心血清中的FB,并考察该法的精密度、准确度、回收率、稳定性。用SPSS软件包进行统计。结果胆红素的保留时间为9.583min;定量下限为0.625μmol/L;HPLC检测血清FB的线性范围为0.625~160.000μmol/L,标准曲线:y=73403x-22975,r^2=0.9995,斜率偏差为726.6496864,截距偏差为30119.92455;不同FB浓度血清的平均日内、日间精密度RSD均<5%;准确度为95%~105%;提取回收率为68%~78%;不同时长、温度的储存稳定性平均RSD值为0.565%,反复冻融稳定性平均RSD为3.020%。用HPLC法测定13例黄疸新生儿血清FB的范围为(548.20±107.19)nmol/L。结论HPLC测定新生儿血清FB的方法操作简便,专属性强,准确度、精密度和稳定性均较高,符合生物样本分析要求。