日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清筛选成虫cDNA文库与新基因分析

目的 筛选与日本血吸虫尾蚴抗原有共同免疫原性的日本血吸虫成虫抗原分子 ,为血吸虫病诊断和疫苗研究提供新的候选分子。 方法 利用日本血吸虫尾蚴可溶性抗原免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajapon icum ,Sj)成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。 结果 共筛选出 13个阳性克隆 ,PCR扩增出特异的插入片段。测序分析获 4个新基因SjCAI、SjCA、SjCAI 2和SjCAI 3 (登录号分别为AF495 883、AF5 15 83 4、AY1180 86和AY12 93 0 3 ) ,分别编码 3 5 3、161、13 7和 72个氨基酸的蛋白。SjCAI蛋白含 6个DNA结合锌指 ,与原肠胚锌指蛋白XLCGF48.2有一定同源性 ;SjCA蛋白、SjCAI 2蛋白和SjCAI 3蛋白含N 糖基化和磷酸化位点。 结论 筛选Sj成虫cDNA文库获得了新的基因序列。

3种梅毒特异性血清筛选试验的方法学评价方法初探

目的初步探究3种梅毒特异性血清筛选试验的方法学评价方法,为临床试验提供参考。方法选择我医院于2012年3月-2018年3月进行ELISA试验的患者5,642例为研究对象,ELISA检查为阳性的患者再行梅毒螺旋体颗粒凝聚试验(TPPA)和免疫胶体金法(GICT)试验,比较三组之间的阳性符合率,按吸光度分为高中低三组后,再次进行比较。结果在对5,642例患者进行ELISA试验后,检验出阳性患者85例。对85例ELISA试验呈阳性的患者行TPPA试验后,结果呈阳性的为83例,阳性符合率为97.65%;对85例ELISA试验呈阳性的患者行GICT试验后,结果呈阳性的为70例,阳性符合率为82.35%。在高、中两个吸光度的比较中,三组结果无统计学差异(P>0.05),在低吸光度的比较下,ELISA和TPPA试验方法明显优于GICT法(P<0.05)。结论 ELISA和TPPA在梅毒血清筛选试验中具有显著的灵敏度和特异性,GICT法则有一定的局限,ELISA法是进行梅毒筛查的理想方法。

HLA-B27抗血清筛选

HLA-B27是人类白细胞B位点上的一个抗原,它与强直性脊柱炎（anky losing spondy litis,AS）的发病密切相关。国内外许多研究表明AS患者中95％以上为HLA-B27阳性,而正常人群中仅4％～6％左右为阳性。HLA-B27抗原检测现已作为临床诊断强直性脊柱炎的重要标志之一。目前国内大多数实验室仍采用血清学方法来检测B27抗原,因而制备一套特异性好,效价高的HLA-B27抗血清是至关重要的。我们在三年时间内收集了 3 000份产后血,进行筛选。

孕妇血清TORCH四种病原体感染血清学筛选的临床分析

TORCH一词最早由Nahmias于1971年提出的，它是一组病原体英文首字母的缩写。此组病原体引起的感染称之为TORCH感染。所谓TORCH，是指弓形虫（Toxoplasmosis，TOX）、风疹病毒（Rubellavirus，RUV）、

利用血清筛选和模拟胃肠液消化稳定性试验评价植物源重组人血清白蛋白潜在致敏性

目的利用血清筛选试验和模拟胃肠液消化稳定性试验,探讨植物源重组人血清白蛋白(OsrHSA)是否具有潜在致敏性。方法选择对虾、小麦、屋尘螨、鸡蛋、牛奶过敏,特异性IgE抗体浓度大于3.5 kUA/L的患者血清75份和健康人血清4份,利用酶联免疫吸附试验探讨OsrHSA能否与过敏血清中的过敏原特异性IgE抗体结合;按照国家标准《转基因生物及其产品食用安全检测模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法》进行OsrHSA的模拟胃肠液消化稳定性试验,评估OsrHSA的消化稳定性。结果有3份对牛奶过敏的血清与OsrHSA发生免疫交叉反应,该蛋白与牛奶过敏原可能存在抗原交叉性;OsrHSA在模拟胃肠液中15 s内即被消化完全,表明该蛋白极易被消化。结论OsrHSA的潜在致敏性较低,对牛奶过敏的人群需要慎重使用。

蒿甲醚预防日本血吸虫病诱导的兔特异抗体相关靶抗原编码基因的筛选

目的寻找应用蒿甲醚预防血吸虫后,引起免疫保护作用的抗原分子,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法感染血吸虫7天后的家免口服蒿甲醚,收集血清,用蒿甲醚预防后的免疫免血清筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)成虫 cDNA 文库,并对阳性克隆的插入基因片段进行 PCR 扩增及测序分析。结果经三轮筛选,获8个阳性克隆。测序分折所获的这8个序列,其中5个序列分别与日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶基因(Sj GAPDH)基因同源,其余3个序列为日本血吸虫28kD 谷胱甘肽-S-转移酶(Sj.GST)基因。结论 Sj.GAPDH 和 Sj.28kDGST 可能是蒿甲醚杀伤血吸虫后,引起对再感染起免疫保护作用的抗原分子。

鼻咽癌相关肿瘤抗原基因的筛选及鉴定

目的通过筛选鼻咽癌肿瘤抗原,为鼻咽癌提供一个早期诊断指标;同时为进一步研究鼻咽癌的免疫治疗奠定基础。方法应用鼻咽癌细胞株异种免疫血清,采用血清学筛选重组cDNA表达文库(SEREX)技术对鼻咽癌cDNA表达文库进行筛选,对阳性克隆测序并进行生物信息学分析。W estern B lot检测鼻咽癌及正常人血清中阳性克隆的抗体。结果共筛选出18个阳性克隆,其中包括M AGE基因、CREM基因、2β-微球蛋白以及核糖体蛋白等已知基因或表达序列标签(EST),另外有6个基因或EST在G enB ank数据库中没有同源性,可能是新基因或EST。选取NPC-14、NPC-15、NPC-18克隆进行鼻咽癌患者及正常人群血清的检测,结果显示鼻咽癌患者的阳性率明显高于正常人群。结论所获得的未知基因产物有可能成为早期诊断鼻咽癌的血清学标志物。

中孕期唐氏综合征的筛选

目的分析使用中孕期结合筛查模式对唐氏综合征检出率及漏诊情况,从而对我院目前的唐氏综合征筛选方案作一评估。方法2004年2月24日至2006年12月31日期间在本院产前检查的胎儿9101例,根据孕妇年龄、血清学筛选指标及超声检查结果,决定是否行羊膜腔穿刺染色体检查。对唐氏综合征的检出率及漏诊情况进行分析。结果9101例胎儿中,筛查出唐氏综合征15例,漏诊3例,唐氏综合征发病率为1.98‰,检出率83.33%。结论唐氏综合征产前筛选应结合孕妇年龄,血清学检查,超声检查,作出综合判断,决定是否行羊水穿刺。我院目前的产前唐氏综合征筛选方案临床上切实可行。

采用SEREX方法从cDNA表达文库中筛选大肠癌抗原基因

目的寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。方法采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库,以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选,对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体PUCm-T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较,并根据cDNA序列进行生物信息分析。结果构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,其滴度分别为2.39×10^6pfu/mL、2.07×10^6pfu/mL和1.86×10^6pfu/mL,插入片段长度为0.5-4 kb,平均分别为1.4、1.6和1.3 kb,重组率最高达到97.5%。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×10^10pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆,代表12个不同抗原基因,其中10个基因片段为已知抗原基因,如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等,2个为未知EST片段。根据序列分析,筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。结论利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。

SEREX方法筛选人胎盘抗原

目的筛选并获得来自人胎盘有潜在应用价值的抗原。方法基于血清学筛选重组cDNA表达文库(serological analysis of recombinant cDNA expression library,SEREX)技术,制备人绒毛组织免疫的兔血清,利用该免疫血清筛选人胎盘组织cDNA表达文库,通过两轮筛选得到免疫反应阳性的单克隆重组噬菌体并测序,并对所得到的序列进行生物信息学分析。结果经过两轮筛选共得到69个阳性反应克隆,序列分析发现它们代表12种不同的基因序列,其中功能已知基因9个,功能未知基因3个,进一步分析发现绒毛膜生长催乳激素基因(CSH1和CSH2)有57个阳性反应克隆,占总数的82.6%,可能是一个具有重要功能的抗原基因,所筛选到的其他基因与胚胎生长发育相关。结论SEREX技术筛选胎盘抗原是行之有效的,本实验筛选出的抗原基因对研究胚胎生长发育具有一定的意义。

大肠癌中干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因表达及其临床意义

大肠癌（colorectal cancer,CRC）是消化系统常见恶性肿瘤,早期诊断还缺乏简易有效的手段,筛选大肠癌的肿瘤标志物十分必要.我们通过血清学筛选重组cDNA表达文库（SEREX）方法筛选出干扰素诱导的跨膜蛋白-1（interferon-induced transmembrane protein-1,IFITMP-1）基因,进一步研究其在大肠癌中的表达及临床意义.