血清类粘蛋白2下调乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ转录活性的研究

目的:探讨血清类粘蛋白2(ORM2)对乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子Ⅰ(HBV-SP Ⅰ)转录的激活作用. 方法:以我实验室前期得到的HBV-SP Ⅰ的酵母单杂交系统筛选结果为基础,利用生物信息学技术确定ORM2的基因编码区域,聚合酶链反应(PCR)扩增ORM2编码基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA3.1(-)- ORM2载体;将该质粒与SP Ⅰ的氯霉素乙酰转移酶(CAT) 报告载体pCAT3-SP Ⅰ共转染肝癌细胞系HepG2细胞系, 并以pCAT3-SP Ⅰ单独转染HepG2细胞系作为对照,酶联免疫吸附法(ELISA)检测CAT的表达活性. 结果:pCAT3-SPⅠ在HepG2细胞中能够启动CAT的表达; 共转染实验pCAT3-SP Ⅰ+pcDNA3.1(-)-ORM2组CAT 的表达活性较pCAT3-SP Ⅰ下降了81.9%. 结论:OKM2蛋白具有对HBV-SP Ⅰ的反式抑制作用.本实验验证了我室利用酵母单杂交技术筛选HBV-SP Ⅰ特异结合蛋白的结果,为进一步了解HBV-SP Ⅰ的转录调控机制及其与SP Ⅰ结合的反式作用因子提供了新的线索.

人血清类粘蛋白的研究进展

随着法医血清学和人类遗传学研究的不断深入,一些新的人类血液遗传标记已被国外学者报道。人类血清类粘蛋白(Orosomucoid,简称ORM)就是其中之一。由于ORM表型频率在大多数人群中分布较好,具有较高的个人识别机率和非父排除率,因此,ORM是法医血清学一个很有应用前途的遗传标记。

辽宁汉族人血清类粘蛋白(ORM)型的分布及其在血痕精液(斑)及脑脊液中的检出

本文作者采用PAGIEF结合免疫固定法,调查了辽宁汉族群体(431人)ORM的分布,检出了ORM1型和ORM2型各8种表现型;对不同条件下的血痕标本进行检测,成功地检出了37℃保存2年血痕的ORM1型;首次由脑脊髓液中检出了ORM1型。ORM型的总鉴别机率为0.7043,是进行个人识别和亲子鉴定的良好遗传标记。

抗α-1酸性糖蛋白血清的制备

作者用分离纯化的α-1酸性糖蛋白免疫新西兰兔,制备抗α-1酸性糖蛋白血清。鉴定结果表明,制备的抗血清与进口商品抗α-1酸性糖蛋白血清特异性相同;与人血清其他蛋白无交叉反应。琼脂双向扩散法测得抗血清效价为128,检出α-1酸性糖蛋白的最低浓度为204μg/ml。

血痕中类粘蛋白型(ORM)分型方法的研究及基因频率的调查

本研究应用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦加免疫固定技术对人血痕进行类粘蛋白型(ORM)分型,并调查了264名北京地区无血缘关系健康献血员ORM表现型,结果ORMl F1 48.9％;ORM1 F1S 37.5％;ORM1 F1F2 3.0％;ORM1 S 9.8％;ORM1 F2S 0.8％;经吻合度检验符合Hardy-Weinberg氏定律。其基因频率F1为0.6913;F2为0.2897;S为0.0189。电泳图谱清晰;分辨力好,可清楚地辨认F1、F2带;灵敏度高,检材用量仅5×2mm(血纱布);室温保存的血痕检材检出时间可长达一年半。

α-1酸性糖蛋白的分离纯化

本文报道α-1酸性糖蛋白的分离纯化。人血清经DEAE-Sephadex-A50和ReactiveBlue 2-Sepharose CL-6B两次柱层析即可获得纯化的α-1酸性糖蛋白。纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、免疫电泳和琼脂双向扩散等证明,其纯度和特异性均符合要求。

ORMDL3剪接异构体的鉴定及在反复喘息患儿中的表达水平分析

目的对反复喘息儿童外周血中血清类粘蛋白1样蛋白3(ORMDL3)的剪接异构体ORMDL3-v1进行鉴定并对其表达水平进行分析。方法反复喘息儿童外周血提取RNA,根据ORMDL3-v1的mRNA序列,设计引物行5′-RACE实验,鉴定其是否存在。随后选择48名患有反复喘息的5岁以下儿童,分为喘息A组28例和喘息B组20例;正常对照组选取的是32例正常体检的儿童,检测外周血ORMDL3-v1及其野生型ORMDL3基因的表达水平。同时计算ORMDL3-v1/ORMDL3的比值,并分析各组病例的临床特点。结果5′-RACE实验证实反复喘息儿童外周血中存在ORMDL3-v1的表达。正常对照组ORMDL3-v1及ORMDL3基因表达水平都显著低于喘息A组和B组(P<0.01),喘息B组ORMDL3的表达水平显著低于A组(P<0.01),喘息A组和B组ORMDL3-v1的表达水平在统计学上差异不明显(P>0.05)。喘息A组ORMDL3-v1/ORMDL3的比值与喘息B组无差异(P>0.05),二者均低于正常对照组(P<0.01)。结论ORMDL3-v1及ORMDL3的表达水平与5岁以下儿童的反复喘息密切相关。

人血痕ORM、Pi、AHSG和GC同步等电聚焦分型

作者在国内外首次建立了血清类粘蛋白、α1－抗胰蛋白酶、α2－HS－糖蛋白和型特异性成份等四种遗传标记同步等电聚焦免疫酶放大分型方法。累计个人识别机率为0．9878，非父排除率为0．6648，是国内外已报道同步电泳分型方法中鉴别能力最高的。本法可对稀释度为1／100的血清进行分型。对于室温保存四周的血痕盯全部正确分型。除Pi外，ORM、AHSG和GC三种遗传标记至少在24周之内皆可正确分型。

α1 抗胰蛋白酶和α1酸性糖蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义

目的分析血清α1抗胰蛋白酶（α1-AT）和α1酸性糖蛋白（α1-AGP）在儿童肾母细胞瘤血清中的表达，并探讨筛查的临床价值。方法选取2007年1月至2010年12月就诊的38例肾母细胞瘤儿童为观察组，38例健康儿童为对照组。使用荧光定量PCR分析两组儿童血清中α1-AT和α1-AGPmRNA转录水平，使用ELISA法检测血清中α1-AT和α1-AGP的浓度。结果观察组血清中α1-AT和α1-AGPmRNA相对量分别为3．50±0．37、2．10±0．41，均显著高于对照组的0．90±0．45、0．50±0．24，差异有统计学意义（P=0．000、0．002）。观察组血清中α1-AT和α1-AGP浓度分别为（4516．8±102．4）、（1316．0±27．3）g／L，均显著高于对照组的（2467．4±23．8）、（728．6±9．4）g／L，差异有统计学意义（P=0．015、0．008）。结论血清α1-AT和α1-AGP检测可用于儿童肾母细胞瘤的诊断，且可应用于儿童。肾母细胞瘤的早期筛查。