基于血清药物化学和网络药理学研究双虎肿痛宁酊剂抗炎镇痛的药效物质和作用机制

目的 基于超高效液相-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)方法定性鉴定双虎肿痛宁酊剂的入血药效成分,并结合网络药理学探究其抗炎镇痛的潜在作用机制。方法 通过对比含药血清、空白血清的色谱图,并结合PubChem、HMDB、MassBank数据库二级谱图及对照品裂解信息,分析鉴定双虎肿痛宁酊剂的入血成分。借助相关数据库对入血成分、疾病进行靶点收集筛选,运用Cytoscape软件进行网络可视化处理;对共有靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果 在给药血清中初步鉴定出阿魏酸、新乌头碱、次乌头碱、4-羟基肉桂酸、甲芬那酸5个原形成分;涉及白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路,改善、调节疼痛和炎症反应等过程,发挥药理作用。结论 本实验通过结合UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学的方法明确了双虎肿痛宁酊剂的入血成分,初步阐明了双虎肿痛宁酊剂抗炎镇痛的作用机制,为临床应用提供了参考。

基于血清药物化学和网络药理学的知母-黄柏药对盐炙前后治疗2型糖尿病药效物质基础及作用机制分析

目的基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证。方法大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液2次,中间间隔1 h,末次给药60 min后腹主动脉取血,用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶,采用色谱柱Shim-pack GIST C 18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A相为0.1%甲酸水,B相为0.1%甲酸-乙腈;梯度洗脱,正、负离子全扫描模式,质量扫描范围m/z 100~1500。结合数据库二级谱图及文献,分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分。检索2型糖尿病疾病靶点,对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析,构建“入血成分-靶点”网络图,运用AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证。验证实验以HepG2细胞为实验对象,胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型,CCK8法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响,Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出15种原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出17个原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高。KEGG和GO结果显示,知母-黄柏药对治疗2型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关。细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4蛋白表达,且盐炙组效果优于生品组。结论初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分,阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强2型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点,其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用,为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考。

基于血清药物化学的乌蕨效用成分研究

目的:对乌蕨活性部位进行血清药物化学研究,分析其体内入血成分。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,通过对比浸膏、空白血清和含药血清的图谱差异,解析乌蕨活性部位浸膏经大鼠灌胃后血清中的原型成分和代谢产物。结果:从血清中鉴定了30个吸收入血成分,其中3个为原型成分,27个为代谢产物。结论:该研究较为全面的阐释了乌蕨抗炎活性部位在大鼠血中的移行成分,为进一步研究其药效物质基础和作用机制奠定基础。

高效液相色谱分析大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位血清药物化学研究

目的应用高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)分析空白模型大鼠及胃溃疡寒证模型大鼠的血清药物成分,探讨大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位抗胃溃疡寒证作用的药效物质基础。方法采用乙醇回流提取法分别提取并纯化富集得到大高良姜和红豆蔻乙酸乙酯部位浸膏;用灌服冰乙酸及4℃冰知母水煎液法复制胃溃疡寒证模型;通过HPLC法对大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位进行基于空白模型大鼠及胃溃疡寒证模型大鼠的血清药物化学研究。结果优化确定大高良姜、红豆蔻含药血清处理方法,同时标识出10个空白模型大鼠含药血清共同入血成分,其中7个为原型入血成分;标识出12个胃溃疡寒证模型大鼠含药血清入血成分,其中8个为共同入血成分。结论大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位均具有相似的抗胃溃疡寒证作用机制,同时,初步推测出原儿茶酸、原儿茶醛、对羟基苯甲酸、芦丁、对羟基苯甲醛、对羟基桂皮酸可能为大高良姜、红豆蔻乙酸乙酯部位抗胃溃疡寒证作用的物质基础。

藏药方剂藏降脂胶囊血清药物化学和作用机制研究

目的分析藏降脂胶囊入血成分及代谢物产物,并探讨其治疗高脂血症的作用机制。方法采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对藏降脂胶囊入血成分进行检测,通过比对给药血清、空白血清质谱信息,结合已有文献,鉴定入血成分及代谢物;利用SwissTargetPrediction、SuperPred数据库预测入血成分的靶点;使用STRING数据库构建PPI网络;运用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络;通过DAVID数据库对靶点进行GO和KEGG富集分析;使用分子对接技术进行初步验证。结果从大鼠血清中共检测到13个入血成分及20个代谢物。在数据库中收集得到入血成分对应靶点556个,其中173个靶点与高脂血症靶点有交集。通过PPI、GO和KEGG分析表明,藏降脂胶囊治疗高脂血症主要的潜在作用靶点有HSP90AA1、PIK3CA、PIK3CB、AKT1、ESR1、RXRA、JAK1、JAK2等,主要涉及的信号通路有Th17细胞分化(Th17 cell differentiation)、内分泌抵抗(Endocrine resistance)、脂质和动脉粥样硬化(Lipid and atherosclerosis)、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)、鞘磷脂信号通路(Sphingolipid signaling pathway)、胰岛素抵抗(Insulin resistance)。分子对接表明关键靶标与入血成分之间具有潜在的亲和力。结论藏降脂胶囊的入血成分可能是其治疗高脂血症的主要药效物质基础,其通过调节与高血脂相关的多个靶点和多条通路来发挥治疗高脂血症的作用。本研究为藏降脂胶囊的临床应用提供了更多分子水平证据。

基于血清药物化学、网络药理学及细胞实验探究壮骨健膝方治疗膝骨关节炎的药效物质

目的探究并验证壮骨健膝方(骨碎补、杜仲、秦艽、独活等组成)治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的药效物质。方法基于壮骨健膝方药物成分自建数据库,采用超高效液相串联三重四级杆质谱技术(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定性定量检测壮骨健膝方入血成分;通过TCMSP、SwissTargetPrediction、SEA和Batman-TCM数据库筛选入血成分靶点,以“knee osteoarthritis”为关键词在GeneCards、OMIM、Drugbank数据库搜索膝骨关节炎相关靶点,将二者取交集后,通过Cytoscape软件构建入血成分-膝骨关节炎作用靶点网络,STRING平台构建蛋白互作网络,寻找核心成分与靶点;通过DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过细胞实验,以核心成分在血清中的浓度干预炎症滑膜巨噬细胞、退变软骨细胞模型,ELISA法检测细胞上清中膝骨关节炎核心靶点指标的含量。结果在壮骨健膝方含药血清中定性定量检测出6种原型入血成分,各成分及浓度分别为龙胆苦苷(1002.02±51.60)ng·mL^(-1),佛手柑内酯(448.50±13.35)ng·mL^(-1),阿魏酸(225.60±9.61)ng·mL^(-1),獐牙菜苦苷(68.49±4.62)ng·mL^(-1),柚皮苷(2.34±0.09)ng·mL^(-1),柚皮素(1.69±0.07)ng·mL^(-1);6种入血成分靶点406个,膝骨关节炎疾病靶点2492个,交集靶点155个,度值排前3位的核心成分分别是阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷,核心靶点包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)等;功能富集分析表明,壮骨健膝方通过多途径发挥其在膝骨关节炎中的药理作用,主要涉及炎症反应、凋亡过程、脂多糖的反应等;细胞实验结果显示,与模型组比较,阿魏酸组、柚皮素组、龙胆苦苷组均可明显抑制炎症滑膜巨噬细胞上清中IL-1β、TNF-α表达(P<0.05);三者均可明显抑制退变软骨细胞上清中MMP-3、MMP-13表达(P<0.05)。结论通过血清药物化学、网络药理学及细胞实验三方面的相互印证,揭示了阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷可能是壮骨健膝方治疗膝骨关节炎的核心药效物质,为该方深入开发和应用提供了客观依据。

基于血清药物化学和网络药理学的广藿香干预病毒性肺炎药效物质基础和作用机制研究

目的:基于血清药物化学与网络药理学探究广藿香干预病毒性肺炎的药效物质基础和作用机制。方法:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对广藿香水煎液、大鼠空白血清及含药血清样品中的成分进行分析,应用Compound Discoverer 3.1化合物预测软件,结合二级谱图及已有文献,鉴定广藿香的入血成分。利用SwissTargetPrediction数据库获取广藿香入血成分的作用靶点,将关键词“viral pneumonia”输入GeneCards、DisGeNET、OMIM数据库检索得到病毒性肺炎的靶点基因,利用Cytoscape3.9.1软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选关键靶点。利用DAVID数据库对成分-疾病交集靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:从大鼠血清中鉴定出12个入血成分,包括7个原型成分和5个代谢产物,原型成分分别是木犀草素-7-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、圣草酚-7,3′-二甲醚、芫花素、广藿香酮、4′,7-二甲基柚皮素、邻苯二甲酸二丁酯;丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B1(Akt1)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子受体(EGFR)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)为PPI中的核心靶点;富集分析显示,广藿香入血成分可能通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/Akt(PI3K-Akt)信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、人类免疫缺陷病毒1型感染、TNF信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Janus激酶-信号转导与转录(JAK-STAT)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路等发挥抗病毒、抗炎作用。结论:广藿香中入血成分可能通过抗病毒、抗炎、细胞增殖和凋亡等相关的蛋白及通路发挥干预病毒性肺炎的作用。

中药血清药物化学研究进展

中药是我国的文化瑰宝,相较于西药而言,重要药效物质基础明确难度较大,复方配伍机制较为复杂,种种因素导致中医药发展进程缓慢。为了推动中医药现代化发展,中药血清药物化学随之诞生,致力于深入研究不同中药材和复方,完善配套理论体系,并整合其他学科研究成果。经过长期发展,逐渐取得了一定的研究成果,对于提升我国中医药现代化水平具有重要作用。本文就中药血清药物化学研究发展情况进行综述,并阐述其未来发展前景。

补阳还五汤抗脑缺血损伤药效物质基础的血清药物化学研究

目的基于血清药物化学方法探讨补阳还五汤抗脑缺血损伤的药效物质基础。方法采用真空冷冻干燥法制备补阳还五汤水煎液冻干粉。采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠模型,按照生药5.4 g·kg^(-1)剂量灌胃补阳还五汤冻干粉药液,每日1次,连续给药7 d。末次给药后分离模型组及给药组大鼠的血清和脑组织,经前处理后采用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)方法,以0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱后,在正、负离子模式下检测。通过补阳还五汤冻干粉及血清、脑组织样品分析所得一、二级质谱数据,结合Chemicalbook和PubChem数据库及相关文献信息,对入血、入脑成分进行综合指认;通过CFM-ID 4.0软件对成分结构断裂方式进行预测;通过TCMSP数据库对指认所得入血、入脑成分来源药材进行归属。结果共指认出芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、芍药新苷等89个化学成分,其中包括黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷等44个入血成分,毛蕊异黄酮、洋川芎内酯A等24个入脑成分,以及黄芪甲苷、藁本内酯、毛蕊异黄酮、芍药新苷、二氢猕猴桃内酯、洋川芎内酯I等16种同时入血入脑成分。结论入血、入脑活性成分可能是补阳还五汤抗脑缺血损伤,发挥神经保护效应的潜在药效物质基础。

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS法的芪蛭降糖胶囊血清药物化学研究

目的对芪蛭降糖胶囊进行血清药物化学分析,阐明其口服吸收后的入血成分。方法采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术,对芪蛭降糖胶囊醇提物、空白血清、含药血清进行对比分析,根据精确分子量、分子式、碎片离子对比标准品及文献相关信息,明确血中移行成分。结果共鉴定并表征了36种成分,包含15种原型成分、21种代谢产物。原型成分包括酚酸类、环烯醚萜苷类、黄酮类、三萜皂苷类化合物,代谢产物主要为原型成分发生羟基化、去羟基化、甲基化、去甲基化、乙酰化、硫酸酯化等反应得到的产物。结论该方法快速、准确,可用于鉴定芪蛭降糖胶囊的入血成分,可为明确该制剂药效物质基础、提升其质量控制标准提供科学依据。

中药血清药物化学研究现状

中药血清药物化学是一种分析口服药物后血中移行成分的方法。近年来,中药血清药物化学得到大量学者认可并被广泛应用。本文梳理近年来国内外相关文献,对中药血清药物化学研究中选择实验动物、设计给药方案、采集血清、制备血清样品等关键技术进行归纳总结,并对中药血清药物化学具体应用和方法拓展进行多方面综述。在此基础上,分析中药血清药物化学可能存在的问题,展望其应用前景,以期为中药血清药物化学在研究领域中深入应用提供参考。

眩晕宁的血清药物化学研究

目的 基于中药血清药物化学的研究方法初步分析眩晕宁的入血成分,探讨其可能的药效物质基础。方法 采用UPLC-Q-TOF-MS技术对大鼠的空白血清、含药血清及眩晕宁药液进行数据采集,结合MassLynx V4.1及UNIFI软件,并根据保留时间、准确质量及二级碎片信息鉴定眩晕宁的入血成分。结果 在眩晕宁给药大鼠血清中共鉴定28个原形入血成分,包括香豆素类、萜类、黄酮类、挥发油类、生物碱类等。结论 血清中鉴定出的入血成分,可能是眩晕宁潜在的活性成分,为其药效物质基础研究提供了依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的五加生化胶囊血清药物化学的初步研究

目的:基于血清药物化学理论及UPLC-Q-TOF-MS技术研究五加生化胶囊的入血成分,对五加生化胶囊的药效物质基础进行初步探究。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS技术并结合Peakview、MetabolitePilot分析软件,通过对体外样品、空白血清及给药血清的比较,依据保留时间、精确相对分子质量和二级碎片离子,分析鉴定五加生化胶囊的入血成分。结果:在给药大鼠血清中初步鉴定出44种成分,包括19种原型成分,25种代谢产物。结论:通过UPLC-Q-TOF-MS技术对五加生化胶囊入血成分的初步分析,得到了其原型产物及代谢产物,为后续的质量标准研究提供参考。

布渣叶总黄酮提取物血清药物化学初步研究

目的:分析鉴定口服布渣叶总黄酮提取物后大鼠血中移行成分,揭示布渣叶总黄酮提取物的药效物质基础。方法:应用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术建立布渣叶总黄酮提取物以及大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后含药血清样品的分析方法,通过对比空白血清、含药血清、布渣叶总黄酮提取物三组样品的成分异同,确定大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后的血中移行成分。结果:大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后(0.25g/kg)在血中分析鉴定了14个血中移行成分,其中5个为新产生的代谢产物,9个成分为布渣叶总黄酮提取物的原型成分。结论:血中移行成分及代谢产物可能为布渣叶总黄酮提取物的体内直接作用物质。

六味地黄丸的血清药物化学研究

目的 :对六味地黄丸的血清药物化学进行研究。方法 :建立六味地黄丸及口服六味地黄丸后大鼠血清的HPLC指纹色谱分析方法 ;分析比较六味地黄丸、缺味处方、单味生药以及各组分给药后所得血清样品 ,鉴定口服六味地黄丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果 :口服六味地黄丸后从血中发现了 11个入血成分 ,其中 4个为新产生的代谢产物 ;7个成分为六味地黄丸所含成分的原型 ,其中有一成分虽为地黄中所含成分的原型 ,但其它两种药材也能代谢产生 ,对其体内的量变有共同的贡献。结论 :血中移行成分及代谢产物将成为六味地黄丸的体内直接作用物质 ,其来源生药为六味地黄丸的主要药物 ,对其进行深入的研究 。

地黄血清药物化学的初步研究

目的 :首次研究地黄的血清药物化学。方法 :在建立地黄HPLC指纹图谱的基础上 ,通过比较地黄药材各提取部位、给药及未给药大鼠血清的HPLC指纹图谱 ,筛选、研究地黄的活性成分及其作用机理。结果 :地黄水溶性部位给药组大鼠血清的HPLC指纹图谱与其他给药组及空白对照组有明显不同。结论 :水溶性高分子部位是地黄的主要有效部位 ,对其血清药物化学的深入研究 ,将有助于阐明地黄的药理活性。

归苓片血清药物化学研究(1)

目的:分析鉴定归苓片体内吸收入血化学成分。方法:建立归苓片以及大鼠口服归苓片含药血清的HPLC指纹图谱分析方法;分析归苓片全方/单味药及其大鼠含药血清指纹图谱,比对鉴定口服归苓片后大鼠血中成分、来源生药及其代谢产物。结果:从大鼠归苓片含药血清中显示出12个入血成分,其中7个为原型成分,5个为代谢产物。结论:血中成分及代谢产物可能为归苓片体内直接作用的药效成分,其分别来源于归苓片的组成药味。

大青叶在大鼠中的血清药物化学研究

目的:建立大青叶水煎液血清药物化学的初步研究。方法:通过HPLC-DAD图谱和紫外光谱分析比较空白血清、含药血清和水煎液的成分异同,确定灌服大青叶后大鼠血中移行成分。结果:多次重复后,确定了处理血清的方法。大青叶给药后血中出现了3个移行成分,移行成分极性中等,其中有一成分相对含量较高,且与水煎液的HPLC图谱在相同保留时间出峰,光谱类似,其他成分可能为代谢产物。结论:血中移行成分及代谢产物将成为大青叶的体内作用基础,其来源为大青叶中的主要物质,对其进行深入的研究将为进行大青叶活性成分的进一步研究奠定基础。

乌药挥发油的血清药物化学及对兔在体肠运动的影响

目的对乌药挥发油的血清药物化学进行研究,并观察乌药挥发油对兔肠道运动的影响。方法建立HPLC色谱分析方法;分析乌药挥发油给药前后血浆样品与其体外乌药挥发油的成分变化,鉴定血中移行成分。按在体肠实验操作,观察灌胃给予乌药挥发油时,兔肠肌收缩频率及幅度的变化。结果体外乌药挥发油在11.6min处有峰,给乌药挥发油后30min、1h、1.5h、2h、4h、6h的血浆与空白血浆相比,在11.6min和46.5min有新成分被测出。给乌药挥发油前后兔肠运动的频率和振幅差异无统计学意义(P>0.05),但呈下降趋势。结论乌药挥发油有成分吸收入血,并对兔在体肠的运动有抑制趋势。