鹅源血清11型鸭疫里默氏杆菌分离株生物学特性分析

从福建漳州某鹅场死亡鹅体内分离到1株细菌,经形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为鸭疫里默氏杆菌。凝集试验表明其为血清11型菌株,该菌对阿莫西林、氨苄青霉素、氟苯尼考、复方新诺明、头孢唑啉、氧氟沙星、壮观霉素和左氧氟沙星敏感,对丁胺卡那霉素、多黏菌素、红霉素、环丙沙星等12种药物不敏感,属于多重耐药的鸭疫里默氏杆菌。

Ⅰ群禽腺病毒血清11型的分离鉴定及致病性试验

【目的】了解江苏地区禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的基因遗传演化情况及致病性,为FAdV的流行病学研究和疫病防控提供参考。【方法】通过SPF鸡胚盲传、PCR鉴定、电镜观察、全基因组测序、序列比对与相似性分析判定病毒血清分型,并将分离株以5×105.33 EID50剂量胸肌注射的方式感染10日龄SPF雏鸡进行动物回归试验。【结果】PCR结果显示,该分离株为Ⅰ群FAdV阳性,在透射电镜下可见球型、无囊膜、具有腺病毒典型的二十面体结构,通过全基因组和Hexon基因进行序列分析表明该分离毒株为FAdV D种血清11型毒株,命名为JSNT-1株。将该毒株感染SPF雏鸡,死亡率为10%(1/10),病死鸡剖检可见肝脏褪色变黄,出血肿胀,边缘钝圆;肾脏肿大出血,苍白等病变。通过实时荧光定量PCR试验可从口腔及泄殖腔中检测到排毒,且病毒在鸡体内多个组织器官均有分布。病理组织学结果显示,死亡鸡的肝细胞变性坏死,出现嗜碱性核内包涵体;肾小球上皮细胞变性坏死;心肌可见大量炎性细胞浸润。【结论】分离株为FAdV血清11型,感染SPF鸡后临床发病不明显,致死率低,病死鸡能产生特征性的包涵体肝炎病变,且病毒可在鸡体内外进行复制。

血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为获得血清11型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 11,FAdV-11)纤突(Fiber)蛋白的多克隆抗体,并研究其对不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应特性,本研究利用同源重组技术将FAdV-11Fiber蛋白的编码基因克隆至原核表达载体pET-32a上,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达后,将纯化的重组蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体,并通过Western blot和IFA鉴定该多克隆抗体与不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应性。结果表明,His-FAdV-11-Fiber重组蛋白主要以包涵体形式表达且表达良好,Western blot和IFA结果均显示,制备的多克隆抗体能与FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白反应,而不能与FAdV-4的2个Fiber(Fiber 1和Fiber 2)蛋白反应。综上所述,本研究成功制备兔抗FAdV-11Fiber的多克隆抗体,并验证其能特异性识别FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白,为进一步建立FAdV-11的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。

蛋鸡禽腺病毒与沙门菌混合感染的诊断

为明确江苏省高邮市某鸡场商品蛋鸡感染疾病情况,对患病商品蛋鸡病料进行禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)、马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)、禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)核酸检测和细菌分离鉴定。结果显示:该鸡场患病商品蛋鸡为禽腺病毒(D种血清11型)和沙门菌混合感染;沙门菌分离株对利福平、恩诺沙星、链霉素、庆大霉素、氨苄西林和多西环素耐药,对环丙沙星、氟苯尼考、头孢曲松、阿米卡星、四环素、磷霉素、头孢噻肟、卡那霉素、新霉素、呋喃唑酮、氯霉素和大观霉素敏感。

鸡腺病毒血清4型和11型Penton蛋白的表达及交叉反应性评价

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应,评价FAdV-4与FAdV-11型毒株Penton蛋白的交叉反应性。Western-blot检测结果显示,FAdV-4型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,但与FAdV-11型的血清无交叉反应性;FAdV-11型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,同时与FAdV-4型的血清有微弱的交叉反应。上述结果表明,FAdV-4型血清可同时识别FAdV-4型和FAdV-11型病毒的Penton蛋白。对2株病毒Penton蛋白的氨基酸序列进行比对,结果显示,两种血清型毒株的Penton蛋白的N端差异较大,这个差异区可能与蛋白的主要抗原表位区相关,进而影响血清学交叉反应性及交叉反应的强度,这可能是造成两种血清型毒株Penton蛋白交叉反应差的原因之一。

两株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为确定贵州省三穗县2个养鸭场暴发大规模雏鸭死亡的病原,本研究无菌采集2个养鸭场疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemrella anatipestifer,RA)感染的濒死鸭的心和肝组织进行细菌分离培养。结果显示,从2个养鸭场濒死鸭肝组织中各分离到1株细菌,2株分离菌在巧克力琼脂培养基上均呈表面光滑、半透明、露滴样小菌落,镜检可见均为革兰氏阴性小杆菌;通过细菌生化试验、OmpA基因PCR扩增和玻片凝集试验对分离菌进行鉴定。结果显示2株分离菌的生化特性和OmpA基因序列均与RA相符,且均为血清11型。对雏鸭注射0.5 mL(3×10^8 cfu/mL)的分离菌纯培养液,进行致病性分析,结果显示2株分离菌均能致死试验鸭,剖检可见心和肝组织的浆膜面有纤维素性渗出,组织病理观察可见心外膜、肝被膜、脾被膜和脑膜出现纤维素性炎症。通过药敏试验和耐药基因检测对分离菌进行耐药性分析,结果显示2株分离菌对部分青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类和氯霉素类等5类抗菌药物耐药,对头孢类和喹诺酮类抗菌药物敏感;耐药基因检测结果显示,2株分离菌均携带aac(6')-Ib(氨基糖苷类)、ermF(大环内酯类)、te(t X)(四环素类)、floR(氯霉素类)和IntI1(整合子酶基因)等5种耐药基因,与耐药表型相符。本研究首次证实了血清11型RA在贵州省的存在,2株分离菌对雏鸭致病性较强且为5重耐药菌株,该结果丰富了贵州省RA的流行病学资料,为该菌的生物学特性研究和该菌感染的防控提供了科学依据。