副猪格拉菌血清2型毒力及耐药性分析

【目的】副猪格拉菌是引起猪格拉泽氏病的病原,是危害养猪业最为严重的细菌性病原之一,该菌血清型众多,不同血清型之间交叉保护力弱。血清2型是中等毒力毒株,近年来临床分离比例越来越高,危害越来越严重。从河南某规模化猪场保育猪群分离到副猪格拉菌血清2型并进行系列试验,为科学防控该病提供参考。【方法】对副猪格拉菌临床疑似病例猪只无菌采集肺脏、气管、心血等样品,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检、常规PCR、豚鼠致病性试验及琼脂扩散药敏试验等方法,对疑似细菌进行形态观察、鉴定、血清型分型、毒力基因检测、耐药基因检测、致病性和耐药性等一系列生物学特性研究。【结果】从肺脏样品中分离获得1株副猪格拉菌,经鉴定为血清2型,该菌株携带vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、cdtC、espP2毒力基因,对豚鼠有较强的致病力。该菌株携带有aadA1、strA、strB、aphA1、tet(B)、sul2多个耐药基因,对青霉素G、卡那霉素、阿米卡星、链霉素、四环素、土霉素、复方新诺明有较强的耐药性;对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、左氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星敏感性较好,临床用药效果显著。【结论】分离出的副猪格拉菌2型菌株毒力较强,且能透过血脑屏障,有明显的多重耐药性。研究结果可为副猪格拉菌血清2型流行病学调查、致病机制研究以及临床防控措施制定提供参考。

禽腺病毒血清2型分离鉴定及感染SPF鸡发病模型建立

【目的】建立禽腺病毒血清2型(FAdV-2)的发病模型,为评价FAdV-2的免疫原性和疫苗有效性提供参考。【方法】对疑似禽腺病毒感染的样品进行分离鉴定,对分离株Fiber基因和Hexon基因序列进行遗传演化分析,使用DNAStar和MEGA7.0软件对分离株和其他FAdV代表株进行核苷酸和氨基酸同源性比较。在确定分离到的病毒为FAdV-2后,通过动物实验分析分离株在不同感染途径和不同感染剂量下对6周龄SPF鸡的致病性,筛选出建立FAdV-2血清型发病模型的最佳感染方式和最佳感染剂量。【结果】从发病鸡组织样品中成功分离得到1株FAdV-2血清型毒株,命名为KM株。遗传演化分析表明,KM株和GX01株同属于禽腺病毒Ⅰ群D种中的FAdV-2血清型;同源性分析结果显示,KM株和GX01株的Fiber基因和Hexon基因核苷酸序列同源性分别为98.9%和99.3%,推导出氨基酸同源性分别为98.9%和98.8%。KM株静脉注射感染途径的致病性高于肌肉注射,试验鸡出现明显的心包积液-肝炎综合征;KM株发病模型的感染途径为静脉注射,感染剂量为108.0 TCID50,感染后鸡群死亡率为50%,剖检病死鸡可见明显的病理变化,鸡群感染后1 d泄殖腔排毒阳性。【结论】首次验证了FAdV-2能引发心包积液-肝炎综合征,建立了FAdV-2感染SPF鸡的发病模型,可为药物研发和疫苗评价提供一定参考,将有效预防和减少FAdV-2传播。

贵州省鸭疫里默氏杆菌血清2型灭活疫苗制备及免疫研究

为控制贵州省鸭疫里默氏杆菌(RA)的流行,本研究以实验室分离保存的血清2型RA地方优势流行株为菌种,制备了稳定性和安全性较好的甲醛油乳剂灭活疫苗,以其免疫麻鸭后对其抗体滴度进行检测,并于免疫后以RA分离株进行免疫保护攻毒试验。结果显示,该灭活疫苗诱导麻鸭产生的抗体滴度可达1∶3 200,免疫保护率达87.5%,高于商品化的同类灭活疫苗(62.5%)。结果表明利用贵州地区流行的优势血清型RA菌株所制备的疫苗,对防治RA病效果明显。

血清2型猪链球菌全菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的寻找血清2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)全菌体蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗侯选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学技术,分析和研究血清2型S.suisSC84菌株全菌体蛋白中能与猪链球菌病人恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。结果S.suisSC84全菌体蛋白与3份猪链球菌病人恢复期血清进行免疫杂交反应,发现8个与IgG抗体发生阳性反应的蛋白点。经MALDI-TOF-MS鉴定,这8个蛋白分别为溶菌酶释放蛋白(MRP)、琥珀酸脱氢酶/延胡索酸还原酶黄素蛋白亚单位(SDHFp/FRDFp)、触发因子(TF)、延长因子G(EF-G)、细菌糖磷酸转移酶系统甘露糖特异ⅡAB亚单位(PTS/MAN-IIAB)、丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶(6-PFK)、色氨酸-tRNA合成酶(TrpRS)。MRP定位于胞壁;TF、PTS/MAN-IIAB、PK及TrpRS定位于胞质;SDHFp/FRDFp、EF-G及6-PFK定位于胞外。并且确定了它们在S.suis05ZYH33菌株基因组的编码基因。结论在S.suisSC84全菌体蛋白中发现8个抗原活性蛋白,其中SDHFp/FRDFp、TF、EF-G、PTS、PK、6-PFK及TrpRS是在S.suis新发现的抗原性蛋白,它们作为特异诊断抗原和疫苗侯选抗原的前景有待进一步研究。

血清2型猪链球菌河南分离株毒力基因的鉴定及其cps2j全基因序列分析

为了解血清2型猪链球菌(S.suis 2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis 2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps,并对S.suis 2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析。结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis 2分离株中的检出率分别为100%(8/8)、100%(8/8)、62.5%(5/8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、100%(8/8)和100%(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis 2分离株同源性分别达98%和97%以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis 2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切。

猪链球菌血清2型JX02株溶血素基因的克隆及序列分析

采用特异性引物对猪链球菌 2型 (Streptococcus suistype 2 ) JX0 2菌株进行 PCR扩增 ,将扩增到的溶血素基因克隆到 p MD18- T质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 JX0 2株溶血素基因长度为 14 94 bp,与 P1/ 7株和 U S-1933株等进行序列比较 ,核苷酸同源性为 10 0 %和 99.7% ,氨基酸序列同源性为 10 0 %和 99.8%。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型PCR程序优化及分子鉴定

猪接触性传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)又称坏死性胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。以急性出血性纤维素性肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜炎为主要特征。各种年龄、性别的猪对本病均易感,急性者死亡率高,慢性者常能耐过。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌有15个血清型,不同血清型之间没有或仅有较弱的交叉保护作用,这给猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的诊断防治和免疫预防带来了很大的困难。因此建立一种快速血清型分子鉴定方法尤为重要。为了快速、简便的建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定的方法,本研究所从临床发病疑似病例猪肺脏和气管中分离到的放线杆菌,首先经过血清型鉴定,确定部分血清型为2型,为了确定血清型鉴定的准确性,在此基础上,采用分子鉴定的方法,对这些菌株进行鉴定,确定分离到的11株菌为猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型。这为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定及防治提供了理论依据,为今后临床血清型定型提供了一种简便方法。

间接ELISA方法检测血清2型鸭疫里默氏杆菌的研究

应用超声波裂解法制备的血清2型鸭疫里默氏杆菌裂解物作为抗原包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清2型鸭疫里默氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。特异性试验和重复性试验证明此方法的特异性高、重复性好。

血清2型鸭疫里默氏菌感染的诊治

2008年3月,福建省莆田市某养鸭场一群35日龄樱桃谷鸭发生一种以神经症状及典型的心包炎、肝周炎、气囊炎为特征的传染病,经流行病学调查、临床观察和实验室检查以及动物回归试验,确诊为2型鸭疫里默氏菌感染。现报道如下。

马立克氏病病毒血清2型与3型之间的保护协同机理

应用马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ）２ 型 Ｚ４ 株和 ３ 型 Ｈ Ｖ Ｔ 联合和单独免疫鸡，结果表明，双价疫苗免疫的鸡，其 Ｈ Ｖ Ｔ 病毒血症与单独 Ｈ Ｖ Ｔ 免疫鸡相比，差异不显著，但是联合免疫能诱导机体产生更强的抗 Ｍ Ｄ Ｖ１型的细胞和体液免疫应答。疫苗保护试验进一步证实，双价疫苗明显优于单价疫苗，能显著减少 Ｍ Ｄ Ｖ 强毒在体内生产性感染和潜伏感染的水平，减少 Ｍ Ｄ 的肿瘤发生率。

双夹心ELISA检测猪传染性胸膜肺炎血清2型抗体方法的建立

用胸膜肺炎放线杆菌血清2型(1536)菌液与弗氏不完全佐剂等体积混合乳化后免疫大白兔,制备兔高免血清,提纯抗体,建立检测猪传染性胸膜肺炎血清2型抗体的双夹心ELISA方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被纯化的兔抗App血清2型抗体为9.375μg/mL,抗原稀释度为1∶1 600,HRP-兔抗猪IgG稀释度为1∶20 000。特异性与敏感性试验结果表明,双夹心ELISA方法特异性好、敏感性高,与猪O型口蹄疫、猪传染性胃肠炎、蓝耳病等阳性血清以及App其他血清型阳性血清无交叉反应。检测样品结果与阻断ELISA比较,其相符率为99.54%,表明双夹心ELISA可用于猪传染性胸膜肺炎血清2型抗体的检测。

鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用

番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。

山西某规模化育肥场猪链球菌血清2型诊断

山西省某规模化育肥场50日龄仔猪连续以败血症死亡,疑似链球菌感染。为了解猪链球菌血清2型的感染情况,筛选出敏感药物,将疑似链球菌感染的病猪(n=10)抗凝全血进行细菌分离、革兰氏染色、毒力基因PCR鉴定及药敏试验,为该病的临床诊疗提供新思路和用药参考。结果显示,6例全血分离出疑似革兰氏阳性链球菌的菌株,5例疑似菌经PCR扩增后初步诊断为猪链球菌血清2型。5例猪链球菌血清2型分离株对恩诺沙星、大观霉素、头孢曲松钠中度敏感,对庆大霉素、丁胺卡那霉素、替米考星、链霉素、阿莫西林均耐药。

2006-2016年四川省猪链球菌血清2型多位点序列分型分析

目的了解四川省2006-2016年猪链球菌血清2型菌株的分子流行病学特征,分析10年间分离株之间的关联,为四川省人感染猪链球菌病防控提供参考依据。方法通过聚合酶链反应法扩增猪链球菌基因组上的7个管家基因片段并进行测序,对2006-2016年四川省猪链球菌病例样本中分离的27株猪链球菌血清2型菌株进行多位点序列分型分析。结果 27株猪链球菌血清2型菌株分为2个ST型,其中19株为ST7型,其余为ST1型;2006-2007年以ST7型为主,2007年后主要为ST1型。结论近年四川省人感染猪链球菌病均为散发,未出现暴发疫情,可能与流行菌株的ST型变化相关。

猪链球菌血清2型环介导等温扩增快速检测方法的建立

为了建立快速、灵敏的猪链球菌血清2型(SS2)LAMP检测方法,根据GenBank登录的SS2特异的荚膜多糖(cps2 H)基因序列作为检测靶标,在其序列的保守区域设计LAMP引物,利用参考菌株S735基因组DNA为模板进行扩增,优化了LAMP的反应条件和反应体系,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果,利用建立的LAMP方法对SS2进行扩增,扩增产物显色呈现阳性反应,电泳出现阶梯状条带,最低检测量为0.186fg/μL模板DNA,比常规PCR高1 000倍;且与其他常见的细菌无交叉反应。结果表明,建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速和重复性强等优点,适用于猪链球菌病的实验室快速检测。

血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用

目的制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性。方法构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况,镍柱亲和纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。用hisSsEno免疫兔制备其高滴度的抗血清并通过人全血杀伤模型评价Eno对猪链球菌抗吞噬能力的影响。采用ELISA和Far-Western blot法鉴定hisSsEno与hFg结合活性。结果成功构建了His标签蛋白原核表达质粒并获得了高纯度的hisSsEno重组表达蛋白。SsEno免疫的抗血清能显著降低强致病的猪链球菌05ZYH33在人全血中的存活能力。hisSsEno能特异地与hFg结合。结论获得了hisSsEno重组表达蛋白,通过抗体阻封和全血杀伤模型发现SsEno是猪链球菌潜在的抗吞噬因子,且hisSsEno能特异性结合hFg。

3.0T MR动态增强与血清PKM2、CDCA5联合检测在术前评估子宫内膜癌分期及淋巴结转移的应用价值

目的:初步探究3.0T MR动态增强与血清丙酮酸激酶M2型(PKM2)、细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)联合检测在术前评估子宫内膜癌分期及淋巴结转移的应用价值。方法:选取2020年1月-2021年10月佳木斯市妇幼保健院收治的疑似子宫内膜癌患者175例作为研究对象,所有患者均在本院接受了手术治疗,并在术前进行了3.0T MR动态增强扫描和血清PKM2、CDCA5检测。以手术病理结果为“金标准”,比较3.0T MR动态增强扫描和血清PKM2、CDCA5诊断子宫内膜癌的准确度、特异度、敏感度、阳性检出率;比较不同分期和有无淋巴结转移患者MR增强参数和血清PKM2、CDCA5水平。结果:术后病理结果显示,175例患者中,确诊为子宫内膜癌的患者有150例,其中ⅠA期82例,ⅠB期42例,Ⅱ期21例,Ⅲ期5例;淋巴结转移5例,无淋巴结转移145例。联合诊断子宫内膜癌的敏感度(96.00%)、准确度(94.86%)均比3.0T MR动态增强、PKM2、CDCA5单一诊断高(P<0.05);各种诊断方法的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合诊断ⅠA期阳性检出率(96.34%)比3.0T MR动态增强、PKM2、CDCA5单一诊断高(P<0.05);各种诊断方法的ⅠB期、Ⅱ期、Ⅲ期阳性检出率相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。不同分期子宫内膜癌患者最大对比增强率(MCER)、达峰时间(TTP)、PKM2、CDCA5水平比较,Ⅲ期>Ⅱ期>ⅠB期>ⅠA期(P<0.05)。有淋巴结转移的子宫内膜癌患者MCER、TTP、PKM2、CDCA5均高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结论:3.0T MR动态增强联合血清PKM2、CDCA5检测可提高子宫内膜癌的诊断率,并在不同分期及淋巴结转移病理进展中提供可靠的诊断参考。

血清分泌型磷脂酶A2与肺炎支原体肺炎患儿疾病严重程度的关系

目的探讨血清分泌型磷脂酶A2(sPLA2)与肺炎支原体肺炎(MPP)患儿疾病严重程度的关系。方法回顾性分析2018年2月至2021年2月湖南省儿童医院收治的256例MPP患儿的病历资料,根据患儿疾病程度分为重症组(136例)和轻症组(120例)。比较2组患儿的实验室检查指标,采用多因素Logistic回归模型分析影响MPP患儿疾病严重程度的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各指标对MPP患儿疾病严重程度的判断价值。结果重症组sPLA2、白细胞计数、红细胞沉降率、纤维蛋白原、乳酸脱氢酶(LDH)、血小板计数(PLT)、中性粒细胞计数(NEU)、C反应蛋白(CRP)水平均高于轻症组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示sPLA2、LDH、PLT、NEU、CRP均为重症MPP的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,sPLA2预测重症MPP的曲线下面积为0.892(95%置信区间:0.831~0.907,P<0.001),截断值为35.39μg/L,敏感度为81.9%,特异度为88.2%。恢复期气管、支气管内膜炎症患儿血清sPLA2水平低于亚支气管狭窄、通气不良及闭塞患儿[(33±6)μg/L比(47±10)μg/L],差异有统计学意义(P<0.001)。结论血清sPLA2水平可作为判断MPP患儿病情严重程度及预后的指标之一,sPLA2水平越高,患儿病情越重,预后越差。

卡泊三醇联合沙丁胺醇对银屑病患者血清Th1/Th2型细胞因子水平的影响

目的:探讨卡泊三醇联合沙丁胺醇对银屑病患者血清Th1/Th2型细胞因子水平的影响。方法:选取2017年4月-2019年3月本院收治的银屑病患者100例,依据治疗方案的不同将其分为对照组与研究组,每组50例。对照组患者应用沙丁胺醇进行治疗,研究组使用卡泊三醇联合沙丁胺醇进行治疗。比较两组患者血清中Th1、Th2细胞因子水平、临床治疗效果以及皮肤屏障功能。结果:治疗前,两组的TNF-α、IFN-γ、IL-10及IL-4水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组的TNF-α、IFN-γ水平均低于对照组,IL-10、IL-4水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组治疗总有效率为92.0%,显著高于对照组的80.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组皮肤屏障功能各指标水平均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在银屑病患者的临床治疗中,应用卡泊三醇联合沙丁胺醇联合方案进行治疗,可以有效调节血清中Th1/Th2型细胞因子偏移现象,同时能改善患者皮肤屏障功能各指标水平,临床治疗效果理想,可考虑普及。

丙型肝炎血清学分型

丙型肝炎病毒(HCV)具有较大的变异性,目前至少可以将其划分为3～6个基因型。HCV分型对于丙型肝炎的流行病学研究、干扰素治疗效果判定及预后的预测等均具有重要意义。目前所用的HCV基因分型方法为PCR法,因其较复杂繁琐,技术条件要求高、费用贵、