绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价

旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。

1株藏猪源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性

为了解西藏地区病死藏猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、毒力基因分布情况,对无菌采集的60份病死猪样品(肺和扁桃体各30份)进行细菌分离纯化后,对菌株进行荚膜分型及常见毒力基因的鉴定。结果表明,从藏猪肺病料中成功获得了1株与伊朗家禽多杀性巴氏杆菌(AY225343)亲缘关系较近的D型猪源多杀性巴氏杆菌,分离率达3.33%(1/30),但没有在扁桃体中分离到该菌株。经鉴定,该菌株携带16种毒力基因,且对四环素、多西环素、氨苄西林、阿莫西林具有耐药性,对卡那霉素、链霉素、新霉素、大观霉素、环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星较敏感。本研究结果为西藏猪源多杀性巴氏杆菌病原学和流行病学调查提供了参考依据。

金黄色葡萄球菌D型肠毒素抗血清的制备和致敏血球效果的初步观察

我们制定了制备抗-SED血清的免疫方案,抗原用量6.9mg/兔,注射8针,免疫时间共14周。实验表明,抗-SED血清效价可达1∶128,所制备的抗血清与纯度高(98%)及纯度较低(50%～60%)的SED肠毒素都只产生1条沉淀线,并且融合,同SEA、SEB、SEC_I、SEC_Z均没有交叉反应。硫铵盐析沉淀法提取的抗-SED IgG,用于致敏醛化血球,该抗体诊断致敏血球检出SED灵敏度较高,约1ng/ml。同时用该抗体诊断血球对6种罐头食品人工污染SED肠毒素进行了检验,检出灵敏度为0.78～3.12ng/ml,略低于含纯SED标本,食物成分对反向间接血凝没影响,不出现假阳性和假阴性。效价高或效价低的抗-SED血清都可用于致敏醛化血球。

兔D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及免疫原性研究

从山东东营发病兔场送检的肝脏病料中分离到1株病原菌,经过菌落形态观察、细菌培养、生化反应、PCR鉴定等,进一步进行了致病性试验和免疫原性试验,结果显示成功分离到1株D型多杀性巴氏杆菌,命名为LD-1,致病性试验表明该菌对兔的致死率为100%,免疫试验结果表明分离菌制成的疫苗攻毒保护率可以达到100%,因此,LD-1有望作为进一步研发D型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗的制苗菌株。

联合检测血清X型胶原α1链和ⅡA型前胶原氨基端肽在骨关节炎早期诊断中的意义

目的评价联合检测血清Ⅹ型胶原α1链（COL10A1）和血清ⅡA型前胶原氨基端肽（PⅡANP）在骨关节炎早期诊断中的价值。 方法所收集89例膝骨关节炎（KOA）患者均为2014年9月至2016年4月在新疆医科大学第一附属医院关节外科门诊就诊和住院患者，采集清晨空腹血5 ml，依据影像学Kellgren-Lawrence（K-L）分级评分系统进行病情严重程度分级，Ⅰ级20例，Ⅱ级25例，Ⅲ级23例，Ⅳ级21例，正常对照组23例，所有血清标本应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测COL10A1和PⅡANP浓度。 结果人血清COL10A1水平在KOA组[（1.30±0.65） ng/ml]明显高于正常对照组[（0.46±0.15） ng/ml]，差异有统计学意义（P＝0.000），对照组血清PⅡANP水平[（23.88±4.68） ng/ml]明显高于KOA组[（13.22±4.74） ng/ml]，差异有统计学意义（P＝0.000），血清COL10A1在KOA-Ⅱ级组[（1.84±0.44） ng/ml]和Ⅲ级组水平[（1.68±0.47） ng/ml]最高，与正常对照组[（0.46±0.15） ng/ml]比较差异均有统计学意义（P＝0.000），血清PⅡANP水平在KOA各亚组随着K-L分级等级依次降低，Ⅰ级组[（19.37±3.01） ng/ml]〉Ⅱ级组[（13.14±2.68） ng/ml]〉Ⅲ级组[（11.41±3.32） ng/ml]〉Ⅳ级组[（9.44±3.58） ng/ml]，且与正常对照组[（23.88±4.68） ng/ml]比较差异均有统计学意义（P＝0.001、0.000、0.000、0.000）。 结论骨关节炎患者血清COL10A1水平较正常对照组高，而PⅡANP水平较正常对照组低，因此联合检测血清生物学标志物COL10A1和PⅡANP有望成为KOA早期诊断的一种有效方法。