血清miRNAs在甲状腺乳头状癌诊断和预后评估中的研究进展

miRNAs是具有21~23个核苷酸的非编码RNA,在进化过程中高度保守,被认为是基因表达、细胞凋亡、癌症以及细胞生长和分化的调节因子。血清miRNA水平可作为甲状腺癌诊断及预后的分子标志物。鉴于大多数筛查甲状腺癌的常用方法不能在疾病的早期阶段检测,而检测血液中的miRNAs被认为是甲状腺癌早期诊断的关键方法。文章就血清miRNAs作为甲状腺乳头状癌诊断和预后的生物标志物研究进行阐述。

血清miRNAs作为诊断胰腺癌新型生物标志物的研究进展

胰腺癌(pancreatic cancer,PAAD)是一种预后极差且位列无症状癌症榜首的消化系统癌症,其早期确诊率非常低,导致胰腺癌被发现时患者通常处于晚期且出现转移和侵袭别处的现象,此时许多治疗方案均无较好的临床效果。传统的通过肿瘤活检与成像技术(CT、MIR、EUS、ERCP)无法及时、准确以及分类地诊断出胰腺癌,但许多前沿性研究表明,液体活检血清miRNA对胰腺癌诊断成为了新的研究方向,尤其是已被研究发现具有高敏感性和特异性的血清miRNA-1226-3p、miR-4516、miR-203a-3p等具有很大的潜力成为早期诊断各类胰腺癌亚型的生物标志物,血清miRNA将有望成为继CA19-9和CEA之后体外有效的诊断生物标记物。本文将综述现有关血清miRNA作为胰腺癌诊断的标志物的研究,说明其特点和研究现状,同时以胰腺癌发生部位进行分类的依据分别从胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)、胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(intraductal papillary mucinous neoplasms,IPMN)和胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors,PNETs)3种亚型的有关血清miRNA的研究进展来总结,为此提高血清miRNA在未来临床成熟用于胰腺癌诊断的可行性。

血清miRNAs作为胰腺癌诊断肿瘤标志物的初步研究

目的探讨血清中microRNAs联合肿瘤标记物CA19-9作为诊断胰腺癌肿瘤标志物的临床价值。方法分别收集与性别、年龄相匹配的胰腺癌患者血清16例、胰腺良性肿瘤血清5例和正常对照组血清15例,采用Real-time PCR检测血清中miR-21、miR-29a、miR-145、miR-210的相对表达量以及采用电化学发光法检测同样本中的CA19-9的表达量,通过统计学分析评价其临床诊断价值。结果检测胰腺癌患者血清中4种miRNAs后,发现miR-21、miR-29a、miR-210的表达量较正常对照组有不同程度的升高(P<0.05);同时测得胰腺癌血清中CA19-9表达亦明显高于正常对照组,进而分别联合3个特异性的miRNAs和CA19-9后,能有效提高胰腺癌的诊断。结论胰腺癌患者血清中特异性表达的miRNAs,可能成为胰腺癌潜在的血清学标记物;在联合CA19-9之后胰腺癌诊断的敏感性和特异性显著升高,这有望应用于胰腺癌的早期诊断。

血清miRNAs在类风湿关节炎患者中的表达及临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清miRNAs(miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p)的表达水平及其临床意义。方法收集2016年10月至2018年10月在我院门诊就诊的39例RA患者临床资料、全血及血清样本。全血样本用于检测血沉(ESR),血清样本用于检测类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和miRNAs核酸。采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测RA患者血清miR-146a-5p,miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平。结果RA患者治疗前血清miR-146a-5p(1.742±1.058)表达水平显著高于HC组(1.045±0.772),且与DAS28评分(r=0.8365,P=0.0045)、ESR值(r=0.4372,P=0.0325)和RF含量(r=0.7336,P=0.0137)呈正相关;而miR-155-5p(U=42.00,P=0.0329)和miR-124a-3p(U=44.5,P=0.0445)表达水平显著低于HC组,且miR-155-5p表达水平与RF含量呈负相关(r=-0.4453,P=0.0316),miR-124a-3p表达水平与DAS28评分(r=-0.5387,P=0.0258)和RF含量(r=-0.4365,P=0.0463)呈负相关;RA患者治疗后血清miR-146a-5p表达水平较治疗前显著下降(U=60.00,P=0.0038),miR-155-5p(U=64.00,P=0.0059)和miR-124a-3p(U=85.00,P=0.0422)表达水平较治疗前显著升高。结论RA患者血清miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平异常,对RA患者的诊断具有潜在的临床应用价值。

嗜酸性粒细胞型COPD患者血清miRNAs谱及其临床相关性分析

目的探讨嗜酸性粒细胞型(EOS-COPD)和非嗜酸性粒细胞型慢性阻塞性肺疾病(NEOS-COPD)患者血清miRNAs谱的表达差异以及与临床特征的关系。方法收集2019年5月至2020年5月在我院确诊并接受治疗的148例稳定期COPD患者为研究对象,进行前瞻性横断面研究。根据入院时血嗜酸性粒细胞是否≥3%和/或≥0.3×10^(9)个/L分为EOS-COPD组和NEOS-COPD组。另外选取60例排除肺部疾病者作为对照组。每组随机选取10份血清样本,采用Illumina高通量测序技术检测miRNAs表达情况,采用生物信息学软件及数据库进行miRNA鉴定、差异性表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-221-3p和miR-4668表达水平。结果32种差异表达的miRNA(倍数变化≥2,P<0.05)在不同组的患者中发现,与NEOS-COPD样本相比,有19种miRNAs表达下调,与对照组相比,有13种miRNAs表达下调。与NEOS-COPD和对照样本相比,miR-221-3p和miR-4668在所有EOS-COPD样本始终保持下调状态(倍数变化>2)。在完全队列分析中,经RT-qPCR检测,EOS-COPD组患者血清miR-221-3p、miR-4668水平低于对照组和NEOS-COPD组(P<0.05),与高通量测序所得表达趋势一致。经单因素和多因Logistic回归分析,血清miR-221-3p和miR-4668水平降低与EOS-COPD有关(P<0.05);且联合诊断EOS-COPD的ROC曲线下面积为0.959(0.925~0.994),灵敏度和特异性分别为91.5%和94.3%。结论筛选得到miR-221-3p和miR-4668在EOS-COPD患者血清样本中表达水平下调,对于鉴别诊断EOS-COPD可提供一定的参考信息。

脑侧枝循环与血清miRNAs(MIR-126)的相关性

缺血性脑卒中致残率、致死率一直居高不下且严重危害我国人民健康。脑内侧支循环的形成和建立,对缺血性脑卒中的发生、发展、治疗与预后有很重要的影响。想要制定一个很好的后续治疗方案和判断卒中预后的关键在于如何早期预测脑内侧支循环或血管新生状况。目前有TCD、CTA、MRA、MRP、DSA等方法可以用于评价侧支循环好坏,但上述检查各具优缺点,如昂贵、耗时、分辨率低、有创伤、或受医疗条件限制等诸多因素影响,存在很多局限性,不能在实际临床工作中广泛应用。因此,迫切需要找出一种能具有特异性、早期、无创、简单等特点预测脑内侧支循环状况的生物学标记物,用于指导卒中的治疗及判断预后。MIR-l26是血管新生信号通路中的正调节因子,近年研究表明血清MIR-126水平与脑侧支循环形成呈显著正相关,可能成为判别脑侧支循环形成情况的一种血液标志物。现对血清mi RNAs(MIR-126)与脑侧枝循环的相关性综述如下。

颅内外动脉狭窄患者血清中6个miRNAs的差异表达及意义

目的探讨颅内外动脉狭窄和严重程度与血清中miR-17-5p、miR-27b-3p、miR-92a-3p、miR-125a-5p、miR-186-5p、miR-208b-3p水平之间的相关性。方法选取2018年9月~2018年12月西南医科大学附属医院神经内科收治的缺血性脑卒中患者99例,依据脑血管造影(DSA)结果分为对照组(颅内外动脉无狭窄,NOCS组,n=33)和狭窄组(n=66)。狭窄组按狭窄部位分为ICAS组(单纯颅内动脉狭窄,n=24)、ECAS组(单纯颅外动脉狭窄,n=18)、COMS组(颅内外动脉均有狭窄,n=24);按狭窄程度分为轻度、中度、重度狭窄组。RT-PCR检测各组血清中miR-17-5p、miR-27b-3p、miR-92a-3p、miR-125a-5p、miR-186-5p、miR-208b-3p的水平,并分析其临床相关性。结果与对照组比较,狭窄组患者的临床血清中miR-17-5p、miR-27b-3P、miR-92a-3P和miR-186-5p表达水平均明显升高,miR-125a-5p的表达水平明显降低(均P<0.05),两组患者血清miR-208b-3p表达水平无统计学差异(P>0.05)。重度狭窄组患者血清中miR-17-5p的表达水平高于轻度狭窄组,miR-27b-3p的水平高于轻度、中度狭窄组,而miR-125a-5p明显低于轻度狭窄组(均P<0.05)。轻、中、重度狭窄组miR-92a-3p均有差异表达(P<0.05),而miR-186-5p在不同狭窄程度组间比较均无统计学差异(P>0.05)。COMS组血清中miR-17-5p、miR-27b-3p、miR-92a-3p、miR-125a-5p和miR-186-5p表达水平与ICAS组、ECAS组比较无统计学差异(均P>0.05)。结论血清miRNAs在缺血性脑卒中患者中发生明显变化,miR-17-5p、miR-27b-3p、miR-92a-3p、miR-186-5p、miR-125a-5p表达水平与颅内外动脉狭窄密切相关,且miR-17-5p、miR-27b-3p、miR-92a-3p、miR-125a-5p表达水平与颅内外动脉狭窄程度存在相关性,可望为诊断颅内外动脉狭窄提供新的生物标志物。

血清特异miRNAs的检测在甲状腺乳头状癌诊断中的意义分析

目的探讨血清特异miRNAs的检测在甲状腺乳头状癌诊断中的临床意义。方法 2017年1月~2019年5月收治的甲状腺乳头状癌病人92例为研究组,同期健康人群92例为对照组,同期甲状腺良性肿瘤病人92例为良性组,提取所有受试对象血清样本的总RNA,通过荧光定量PCR的方法检测miRNA-221、miRNA-222、miRNA-455的相对表达量,比较三组受试对象3种miRNA的表达情况,比较研究组不同临床病理特征病人3种miRNA的表达情况,并通过ROC工作曲线分析3种miRNA的诊断效能。结果研究组病人血清3种miRNA的表达均高于对照组;年龄超过45岁、肿瘤直径超过1 cm、单发病灶、存在腺外浸润的病人miRNA-455的表达升高;存在淋巴结转移和腺外浸润的病人miRNA-221和miRNA-222的表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-221、miRNA-222和miRNA-455表达在诊断甲状腺乳头状癌中的AUC分别为0.813、0.802和0.794。结论甲状腺乳头状癌病人血清miRNA-221、miRNA-222和miRNA-455的表达显著升高,可反映病人癌症病灶情况、转移情况以及浸润程度,血清特异性miRNA在诊断甲状腺乳头状癌中有一定的价值,其灵敏度和特异度仍需要进一步研究。

缺血性脑卒中急性期血清脑特异性miRNAs水平的变化及与炎症应答和梗死体积的相关性

目的探讨缺血性脑卒中急性期血清脑特异性miRNAs水平的变化及其与炎症应答和梗死体积的相关性。方法收集起病24h内的缺血性脑卒中患者22例及健康对照8例,收集临床资料,NIHSS评分评估神经功能缺损,MRI检查评估梗死体积。于卒中起病24h内(22例)及48h内(6例)采取静脉血,分离血清。结果卒中起病24h内血清miRNA-124水平显著下降,起病48h内血清miRNA-219水平较起病24h内有所升高。卒中起病24h内血清miRNA-124、miRNA-9、miRNA-219水平均与梗死体积呈负相关,血清miRNA-9水平与入院时及入院24hNIHSS评分呈负相关。结论脑特异性miRNAs参与调节缺血性脑卒中急性期炎症应答水平,血清miRNA-124、miRNA-9、miRNA-219水平降低加剧炎症反应及脑组织炎症损伤。

miRNAs联合CA19-9对胰腺癌的诊断效能

目的研究血清miRNAs(miR-16)联合CA19-9对胰腺癌的诊断效能。方法收集45例慢性胰腺炎患者、45例胰腺癌患者和30例健康人作对照,采用实时逆转录-多聚酶链反应方法检测血浆miR-16表达水平和临床检测糖链抗原19-9(CA19-9),分析miR-16、CA19-9及其二者联合对胰腺癌的诊断效能。结果 miR-16在血浆中含量胰腺癌>慢性胰腺炎(P<0.05),慢性胰腺炎组与健康对照组差异无统计学意义;miR-16联合CA19-9与miR-16、CA19-9单独诊断比较,miR-16与CA19-9联合可显著提高诊断胰腺癌的敏感性和特异性,LR+均>20,LR-均<0.2。结论 miR-16联合CA19-9可提高胰腺癌的诊断效能。

血清miRNA-21在胃癌中的诊断价值

目的:探讨血清miRNA-21在胃癌中的表达及其诊断价值。方法:收集2015年1月至2016年1月于上海交通大学医学院附属新华医院及新华医院崇明分院收治住院的50例胃镜病理确诊胃癌患者的血清及临床资料,同时收集25例胃癌癌前病变患者及25例胃黏膜基本正常患者的血清作为对照。用荧光定量PCR的方法检测miRNA-21的表达量,比较三者的表达差异,用ROC曲线确定其诊断价值。结果:胃癌患者血清中miRNA-21的表达水平显著高于癌前病变患者及胃黏膜正常患者,癌前病变患者及胃黏膜正常患者未见明显差异。此外,胃癌患者血清miRNA-21表达水平与年龄、性别、肿瘤大小无显著相关性,但因浸润深度、淋巴结转移、TNM分期不同而有显著差异。血清miRNA-21诊断胃癌的最佳灵敏度和特异度分别为0.78、0.98(P<0.05)。结论:血清miRNA-21能区分胃癌患者与非胃癌患者,并且其表达水平与胃癌的TNM分期有关,有着较高诊断价值。

PRL型垂体瘤患者血清miRNA表达谱的检测及初步筛选分析

目的检测及初步筛选分析PRL型垂体瘤患者血清miRNA表达谱。方法采集20例PRL型垂体瘤患者和20例健康志愿者血清,通过RNA提取技术、miRNA TLDA芯片技术检测血清miRNA、采用软件Data AssistTMSoftware进行数据分析和处理,筛选出差异性表达的miRNA。结果以差异表达量大于2倍,芯片检测的相对定量平均CT值小于40为标准,初步筛选出PRL型垂体瘤患者血清miRNA表达上调的有3个,表达下调的有25个,共计28个。结论 PRL型垂体瘤患者和健康志愿者血清miRNA具有内源表达的差异性,可以为进一步验证特异性血清miRNA的表达,探索药物临床疗效机制研究提供理论和实验依据。

血清miRNA在乙型肝炎诊断和预后中的研究进展

miRNA分子是一大类内源性非编码小RNA分子,通过结合靶mRNA的3’UTR区对基因表达进行调节,导致翻译的抑制或靶mRNA的失稳,从而参与了广泛的生理及病理过程。miRNA也存在于血液循环中,由于其具有相对较小、含量丰富、表达具有组织特异性并且在血清中相对稳定成为了临床上非侵袭性的生物标志物。最近的研究也显示miRNA分子与包括乙型肝炎在内的多种人类疾病有关。本文将总结血清miRNA与乙型肝炎诊断和预后之间关系的最新进展。

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗患者血清miRNA差异表达及二甲双胍干预作用

目的:二甲双胍对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)患者血清基因表达谱的影响。方法:选择PCOS-IR患者6例为治疗组,健康育龄期女性6例为健康对照组,采用基因芯片和RT-PCR的方法研究临床诊断为PCOS-IR患者的血清miRNA表达变化及二甲双胍干预后的血清miRNA变化。对筛选并验证后具有差异表达的miRNA先用生物信息学方法,再用Gene Ontology和KEGG通路的数据库进行功能和通路分析。结果:系统聚类结果显示治疗组治疗前与健康对照组和治疗后均存在差异。通过RT-PCR验证,治疗组治疗前与健康对照组比较,得到10个差异表达变化的miRNA(P<0.05);治疗组治疗前与同组治疗后比较,得到8个差异表达变化的miRNA(P<0.05)。GO分析显示:差异表达基因与转录调控、信号转导、跨膜转运、细胞增殖、细胞凋亡、细胞代谢、细胞黏附、蛋白磷酸化、蛋白质运输、多细胞生物发育、凝血功能、神经传导等有关。KEGG分析显示,差异表达miRNA参与显著表达的通路有:EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性、Rap1信号通路、wnt信号通路、前列腺癌通路、mTOR信号通路、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、MAPK信号通路。共得到878个与PCOS-IR及其二甲双胍治疗更相关的靶基因。结论:部分miRNA参与PCOS-IR的发病和二甲双胍治疗过程。

血清外泌体microRNAs单一及组合panel对结直肠癌的诊断价值

目的 检测血清外泌体miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31在结直肠癌患者中的表达水平,并评估其对结直肠癌的诊断价值。方法 选取2018年3月至2022年5月本院收治的123例直肠癌患者(结直肠癌组)及117例大肠腺瘤患者作为研究对象(结直肠癌组),并纳入150例健康对照者作为对照(健康对照组)。提取血清外泌体中miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31,qRT-PCR比较4种miRNA在各组中表达水平差异。受试者工作特征(ROC)曲线评价4种miRNA单一及组合panel对结直肠癌的诊断价值。结果 结直肠癌组血清miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31水平高于健康对照组(P <0.05),且miR-15b、miR-21和miR-31水平高于结直肠腺瘤组(P <0.05)。Ⅲ-Ⅳ期、伴淋巴结浸润、低分化程度结直肠癌组患者血清miR-15b、miR-21和miR-31水平分别高于Ⅰ-Ⅱ期、不伴淋巴结浸润、中-高分化程度患者,miR-15b、miR-21和miR-31水平与临床TNM分期、伴淋巴结浸润呈正相关,与分化程度呈负相关。4种miRNA中诊断价值最高的指标是miR-15b,其敏感度和特异度分别为81.33%和91.80%(P <0.05);且miR-15b、miR-21和miR-31的组合panel具有更好的诊断价值,其敏感度和特异度分别为95.06%和94.44%(P <0.05)。结论 miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31在结直肠癌患者外周血血清中异常表达,miR-15b、miR-21和miR-31水平与结直肠癌的发病及进展密切相关,且miR-15b、miR-21和miR-31组合panel具有作为结直肠癌的新型诊断模型的潜力。

循环血清中miRNA作为多发性骨髓瘤诊断标志的研究

目的:探讨循环血清中miRNA的变化对骨髓瘤的诊断价值。方法:收集2013年7月至2014年6月就诊于厦门大学中山医院的40例骨髓瘤患者血液样品,应用实时荧光定量PCR方法检测处于不同临床阶段骨髓瘤患者及20名健康志愿者循环血清中的miRNA(包括miR-29a,miR-155,miR-16和miR-92a)表达水平,分析miRNA表达的变化对骨髓瘤的诊断价值。结果:与健康捐献者相比,初诊的骨髓瘤患者血清miR-29a水平显著升高(P<0.01),而miR-155水平显著降低(P<0.001)。检测miR-29a/miR-155比值可以有效地区分健康者和骨髓瘤患者,诊断灵敏性为80.8%,特异性83.3%。骨髓瘤患者血清miR-29a水平与骨髓浆细胞数和患者血清M蛋白水平始终保持一致。结论:血清中miR-29a,miR-155和miR-16值的变化可以作为多发性骨髓瘤患者的分子生物学诊断标志,其中miR-29a/miR-155值对骨髓瘤诊断价值最高。

血清miRNA在肝细胞癌早期诊断、疗效监测及预后评估中的应用

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,具有恶性程度高、病死率高及预后差等特点.HCC确诊时多数已处于晚期,究其原因关键是缺乏高敏感性及特异性的早期诊断分子标志物.miRNA(microRNA)是真核生物中一类参与基因转录后水平调控的非编码小分子单链RNA,其对肿瘤生长发育、细胞分化、增殖和凋亡等生命活动用重要的调节作用.而血清miRNA的异常表达与HCC密切相关,其作为新兴的肿瘤分子标志物对于HCC的临床诊断、疗效监测及预后评估具有重要的应用价值.

血清miRNA生物标志物对NSCLC的诊断价值

目的探讨在可切除的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清中循环miRNA的表达。方法应用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)在训练集中检测115名患者和69名健康对照组的术前血清样本中的miR-15b-5p的表达量。用荧光量子点液相微珠在验证集中进一步确认在91名非小细胞肺癌患者和66名健康人群的血清样本中miRNA的差异性表达。用受试者工作曲线(ROC)分析选择最佳的截断值。用卡方检验来分析评估miR-15b-5p关于非小细胞肺癌的诊断价值。结果 miR-15b-5p在非小细胞肺癌中的表达显著上调(P<0.05)。卡方检验结果显示该方法的灵敏度为83.5%,特异度为68.1%。结论 miR-15b-5p可作为可切除的非小细胞肺癌中非侵入性的诊断生物标志物。

脾肾亏虚型重症肌无力患者血清miRNA表达差异的初步研究

目的:检测及初步筛选分析脾肾亏虚型重症肌无力患者血清miRNA表达谱。方法:采集34例脾肾亏虚型重症肌无力患者和10例健康志愿者血清,通过RNA提取技术、miRNA TLDA芯片技术检测血清miRNA,采用软件Data Assist TM Software进行数据分析和处理,筛选出差异性表达的miRNA。结果:以差异表达量大于2倍,芯片检测的相对定量平均CT值小于40为标准,初步筛选出脾肾亏虚型重症肌无力患者血清miRNA表达上调的有21个,表达下调的有22个,共计43个。结论:脾肾亏虚型重症肌无力患者和健康志愿者血清miRNA具有内源表达的差异性,可以为进一步验证特异性血清miRNA的表达,探索药物临床疗效机制研究提供理论和实验依据。

自发性早产孕妇血清中子宫平滑肌功能相关miRNA的表达及生物学功能分析

目的 基于自发性早产子宫平滑肌中调控失常的miRNAs,寻找早产孕妇血清表达失常的miRNAs。方法 采用病例-对照研究募集2017年5月—2018年8月于复旦大学附属妇产科医院就诊的妊娠24+0周至36+6周的产妇。病例组为自发性早产的入院患者,对照组为同时期门诊产检的正常孕晚期妇女,遵循伦理原则收集和随访其临床资料和血清样本。采用定制Real-time PCR检测两组血清中子宫平滑肌功能相关的8个miRNA的表达水平,寻找早产血清中差异表达的miRNA,并通过生物信息学工具探索差异表达miRNA可能的生物学通路。结果共募集42例自发性早产孕妇(病例组)和32例非早产孕妇(对照组)。与对照组相比,miR-26b-5p和miR-936在病例组血清中的相对表达显著升高(FDR均为0.036)。生物信息分析提示:miR-26b-5p和miR-936可能通过PCNA、JARID2、PTEN和GATA4等靶分子调控血管上皮生长因子生成、细胞周期调控、磷脂酰肌醇3-激酶活性的正调节和凋亡通路等生物学通路。结论 自发性早产孕妇血清中miR-26b-5p和miR-936表达失常,血清miR-26b-5p和miR-936异常升高可能与自发性早产有关。