血清sCTLA-4表达在甲状腺功能亢进发病中的意义

目的 探讨甲状腺功能亢进血清中可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(sCTLA-4)表达及在甲状腺功能亢进中的意义。方法 以ELISA ABC-HRP法测定sCTLA-4；以ELISA双抗法测定TPO-Ab、TG-Ab；以电化学发光法测定FT3、FT4。结果 实验组sCTLA-4水平与对照组相比明显升高(P<0．01)，但与TPO-Ab、TG-Ab相关性不显著(P>0．05)，与FT3、FT4亦无明显相关性(P>0．05)。结论 sCTLA-4可能在甲状腺功能亢进症的发病机理中发挥重要作用，但作用机制似与甲状腺自身抗体TPO-Ab、TG-Ab及甲状腺激素FT3、FT4无关。

表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。

血清4型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及其在抗体检测中的应用

为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗体的间接ELISA方法,对该方法进行特异性、重复性、稳定性、灵敏性试验,并与BioChek FAdV商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果显示:建立的ELISA仅与抗FAdV-4阳性鸡血清发生反应,与检测的抗其他病原的血清以及SPF鸡血清均无反应性,批间重复性与批内重复性良好,其变异系数分别在4.345%~6.983%和4.326%~9.391%之间,包被酶标板保存12个月后,变异系数为4.4%~10.0%,其检测灵敏度是间接免疫荧光检测技术的8~32倍,是基于包被GST-Fiber-2蛋白ELISA的2倍;建立的ELISA对FAdV-4灭活疫苗免疫的鸡血清检出率高于BioChek试剂盒,两者对临床感染FAdV-4的鸡血清的检测结果一致。研究表明,试验构建的基于重组蛋白His-Fiber-2的检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法为临床上FAdV-4感染监测以及疫苗的免疫评价提供了技术,具有良好的应用前景。

血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组蛋白fiber-2的表达,并采用免疫琼扩试验(AGP)检测fiber-2蛋白效价。以fiber-2蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫SPF鸡进行免疫效力试验,分别设fiber-2疫苗组、fiber-2疫苗配伍免疫增强剂CVCVA5组及生理盐水对照组。免疫后14 d、21 d和28 d采集SPF鸡外周血分离血清,利用AGP法检测其血清抗体水平。IFA结果显示fiber-2蛋白在昆虫细胞中获得表达;western blot结果显示该蛋白能够与FAdV-4阳性血清发生特异性免疫反应,蛋白分子量约62 ku;AGP结果显示fiber-2蛋白AGP效价达1:16。免疫后14 d两组实验组鸡均可检测到特异性琼扩抗体,免疫后28 d fiber-2疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:24,配伍CVCVA5疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:104。以上结果表明fiber-2蛋白具有一定的免疫原性,免疫后可诱导机体产生特异性抗体,本研究为进一步研制FAdV-4亚单位疫苗提供实验依据。

血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。

鸭源血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达与初步应用

为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究。结果表明:PCR方法扩增得到大小为1 011 bp的FAdV-4 Hexon主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白;重组蛋白变性纯化后进行Western-blot检测,其可与FAdV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性;以纯化蛋白为包被抗原,初步建立检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法,用该方法进行检测,FAdV-4灭活疫苗免疫鸭场的免疫合格率为96.46%,FAdV-4感染鸭场的阳性感染率为99.46%,无FAdV-4免疫史和感染史鸭场的阳性感染率为0。说明试验获得了具有良好生物学活性的FAdV-4 Hexon重组蛋白。

抑郁症和躯体形式障碍患者血清T_3、T_4以及TSH表达水平特征及临床意义研究

目的探讨抑郁症和躯体形式障碍患者血清T_3、T_4以及TSH表达水平特征,并结合其临床特点分析彼此间的关系,为抑郁症和躯体形式障碍的预防以及控制该群体血清T_3、T_4以及TSH表达水平处于正常范围提供参考依据。方法于2017年5月至2018年1月采用定群抽样的方法选择研究对象,采用横断面调查的研究方法对入选人群开展不记名问卷调查,并结合受试对象的实验室结果进行进一步分析。结果本研究按照入选及排除标准共获得符合要求的观察对象220例。220例受试对象中判定为轻度抑郁的受试者37例(16.82%),判定为中度抑郁的受试者14例(6.36%),判定为重度抑郁的受试者14例(6.36%);判定为躯体形式障碍的受试者93例(42.27%);抑郁、躯体形式障碍严重程度均与血清TT_4、TT_3水平呈负相关,而与血清TSH水平正相关,均有P<0.05。结论抑郁症和躯体形式障碍患者的血清T_3、T_4以及TSH表达水平特征均与正常群体存在差异,且提示一定的病理特征,同时二者可以互为影响因素,因此改善患者的抑郁症和躯体形式障碍不仅具有精神病学层面的意义,同时对甲状腺功能的改善也可能具有潜在意义。

小牛血清去蛋白注射液对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响

目的观察小牛血清去蛋白注射液(DECB)对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌中葡萄糖转运因子4(GLUT4)的mRNA表达的影响。方法以高脂高糖饮食加链脲佐菌素制作2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,观察DECB对大鼠葡萄糖耐量(OGTT),运用RT-PCR方法检测大鼠模型骨骼肌中GLUT-4的mRNA表达。结果 DECB可改善OGTT,增加大鼠模型骨骼肌中GLUT4的mRNA表达。结论 DECB具有较好的降血糖、改善胰岛素抵抗、防治糖尿病并发症的作用。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞TLR4表达及血清CRP检测的临床意义

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者外周血单个核细胞TLR4表达及血清CRP检测的临床意义。方法选取2010年1月～2012年1月在我院呼吸内科住院的COPD患者70例作为试验组，选取同期在我院接受健康体检的70例健康志愿者作为对照组。检测两组单个细胞TLR4表达、肺功能指标和血清CRP含量。结果试验组肺功能指标和对照组相比明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；试验组单核细胞TLR4表达和对照组相比明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；试验组CRP血清和对照组相比明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 COPD患者中单核细胞表明TLR4的表达下调，血清CRP含量上调，都反映了COPD发病时机体的调节机制，因此为有效预防和治疗COPD患者提供了新的科学根据和思路。

肺炎链球菌SPD1672蛋白EL4功能环的原核表达及多克隆抗血清制备

目的原核表达肺炎链球菌SPD1672蛋白膜外EL4功能环,制备并鉴定其多克隆抗血清。方法生物信息学分析SPD1672蛋白结构功能区,用p Cold TF质粒构建含EL4功能环的原核表达载体,IPTG诱导蛋白质表达后行镍柱纯化。经HRV 3C蛋白酶酶切、鉴定后,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗血清,间接ELISA鉴定效价,western blot鉴定抗血清与肺炎链球菌D39菌株天然蛋白质的亲合力。结果 EL4环可能为SPD1672蛋白酶活性中心。成功构建p Cold TF-SPD1672EL4原核表达载体,诱导表达后获得纯度大于95%的重组融合目的蛋白质。该蛋白质免疫新西兰大白兔后获得效价达到5.12×106的多克隆抗血清,此抗血清与重组的SPD1672EL4蛋白及肺炎链球菌中天然SPD1672蛋白有较好的亲合力。结论成功获得高纯度的肺炎链球菌SPD1672EL4蛋白及其特异的多克隆抗血清,为进一步对SPD1672蛋白的结构与功能研究奠定了基础。

PCV4 Cap抗体ELISA检测方法的建立及血清流行病学调查

旨在建立一种猪圆环病毒4(porcine circovirus type 4, PCV4)Cap蛋白间接ELISA抗体检测方法,对猪群中PCV4抗体进行检测,并与以往的关于PCV4血清流行病学的调查结果进行对比研究,从而更全面地了解PCV4在猪群中的感染和流行情况。本研究利用原核表达系统成功表达PCV4 Cap蛋白,对反应条件进行优化,建立了基于PCV4 Cap蛋白的间接ELISA方法。采用建立的ELISA方法对中国18个省份的不同阶段的2 298份猪血清样本进行检测,以调查中国猪群中PCV4的血清学流行情况。同时将Cap-ELISA检测方法与之前建立的Rep-ELISA进行对比,平行检测845份血清样本。结果显示,在18个省份中,17个省的血清样本中检测到PCV4抗体。PCV4总血清阳性率为34.94%,母猪和育肥猪阳性率分别为59.95%和31.64%,仔猪阳性率为21.14%,保育猪中检出的阳性率最低,为4.20%。两种方法共同检测845份血清样本,符合率为82.84%,其中Cap-ELISA检测总阳性率为31.83%,Rep-ELISA检测总阳性率为35.03%。研究表明,PCV4在中国广泛传播,不同年龄阶段的猪只均能感染。Cap-ELISA和Rep-ELISA两种方法一致性高,从抗体消长规律来分析,两种方法都说明猪群感染PCV4主要在育肥猪和母猪阶段。本研究提供了中国PCV4的最新血清流行病学特征和PCV4在不同阶段猪群中的感染情况,进一步证实了PCV4在我国猪群中有一定的感染率,其危害值得进一步研究和关注。

原花青素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4、E2F1基因表达的影响

目的：探讨原花青素（Proanthocyanidins，PAC）对β-淀粉样肽（25—35）[βamyloidpeptide-（25．35），Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达的影响。方法：种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期，分为0对照组、Aβ25-35诱导组、PAC保护组，按实验需要分别在不同时间加入药物并收集细胞，通过RT-PCR和Westernblot从mRNA及蛋白水平检测CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达水平的变化。结果：本课题组在前面的研究中发现PAC对Aβ25-35诱导体外去血清培养PCl2细胞周期变化有逆转作用，但具体机制尚未清。

血清4型禽腺病毒纤突蛋白的真核表达及其免疫反应性

研究对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)表面纤突蛋白基因F1及F2进行了克隆及真核表达载体的构建,分别命名为pcDNA3.1-F1以及pcDNA3.1-F2。间接免疫荧光以及Western blot分析证明,所构建的表达载体表达的F1及F2均能与抗FAdV-4的阳性血清进行良好免疫反应。在间接免疫荧光试验中,转染pcDNA3.1-F1及pcDNA3.1-F2的293T细胞内均可见特异性亮绿色荧光;在Western blot中分别出现F_1及F_2特异性蛋白条带。纤突蛋白F1及F2真核表达载体构建、表达及其良好的免疫反应性,为进一步建立FAdV-4快速血清学诊断方法、探究纤突蛋白F_1及F_2在病毒感染致病中作用奠定了基础。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21(DE3),诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Western blot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析(Ni-NTA)纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB/c小鼠,抗血清ELISA效价达1∶16 000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。

PAPP-A、AFP、NF-κB、TLR4及uE3在子痫前期患者血清中的表达及临床意义

目的探讨妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、甲胎蛋白(AFP)、核因子κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)及游离雌三醇(uE3)在子痫前期(PE)患者血清中的表达及其临床意义。方法选取75例(轻度40例,重度35例)进行检查确诊并顺利分娩的子痫前期患者作为研究组,另选取同期50例进行检查的正常孕妇作为对照组。比较两组PAPP-A、AFP、NF-κB、TLR4及uE3的血清表达差异。结果研究组uE3为(0.67±0.21)μg/L、PAPP-A为(3056.26±234.22)mU/L,均低于对照组的(0.98±0.11)μg/L、(3890.34±321.22)mU/L,AFP为(43.32±2.11)μg/L、TLR4为(4.98±0.34)ng/ml、NF-κB为(243.34±23.45)ng/ml,均高于对照组的(38.45±3.21)μg/L、(3.98±0.43)ng/ml、(102.32±34.21)ng/ml,差异均具有统计学意义(P<0.05)。PAPP-A、NF-κB、TLR4、AFP及uE3均具有预测子痫前期的价值(P<0.05),其中uE3的预测价值最优,其约登指数为0.71。结论PAPP-A、NF-κB、TLR4、AFP及uE3均具备一定的预测子痫前期的价值,uE3的预测价值最优。

禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及其免疫原性分析

旨在解决大肠杆菌表达系统对禽腺病毒血清4型(FAdV-4) Fiber-2蛋白进行表达时存在的多包涵体问题。通过添加不同的化学伴侣分子来提升Fiber-2的可溶性表达量,并进一步通过动物试验评价蛋白的免疫原性。结果显示,添加化学伴侣分子β-环糊精显著提高了Fiber-2的可溶性表达量,且重组蛋白与FAdV-4阳性血清具有良好的反应性,琼脂扩散(AGP)效价达1∶128;以表达的可溶性Fiber-2蛋白作为抗原,制备油乳剂疫苗并免疫SPF鸡,通过AGP检测免疫后血清中针对FAdV的特异性抗体水平,结果Fiber-2蛋白疫苗及FAdV-4全病毒灭活疫苗于免疫后14 d,均可诱生特异性的AGP抗体。以上结果表明β-环糊精显著提高了Fiber-2的可溶性表达量,且免疫原性良好。本研究为FAdV-4亚单位疫苗的研制及产业化奠定了基础。

Graves病患者血清sCTLA-4测定及临床意义

目的 研究Graves病患者血清中sCTLA—4表达及与甲状腺自身抗体TPO—Ab、TG—Ab和甲状腺激素FT3、FT4相关性在Graves病发病中的作用。方法 以ELISA ABC—HRP法测定sCTLA—4;以ELISA双抗法规定TPO—Ab、TG—Ab;以电化学发光法测定FT3、FT4。结果 实验组sCTLA—4水平与对照组相比明显升高(P<0.01),但与TPO—Ab、TG—Ab相关性不显著(P>0.05,P>0.05),与FT3、FT4亦无明显相关性(P>0.05,P>0.05)。结论 sCTLA—4可能在Graves病的发病机理中发挥重要作用,但作用机制似与甲状腺自身抗体TPO—Ab、TG—Ab及甲状腺激素FT3、FT4无关。

支原体肺炎患儿血清可溶性B7-H4表达水平及临床意义

分析支原体肺炎患儿血清可溶性B7-H4表达水平及临床意义,为临床诊断提供参考依据。方法 将我院儿科2020年10月~2021年10月诊治的62例支原体肺炎患儿纳入研究组,另将我院儿科同时期行常规体检的62例健康儿童纳入对照组,运用酶联免疫吸附法检测可溶性B7-H4表达水平,对比两组的差异;对研究组患儿的临床病理特征进行分析,对比不同临床病理特征患儿的可溶性B7-H4表达水平;对研究组患儿予以治疗,对比治疗前与治疗后的血清可溶性B7-H4表达水平变化;运用Pearson相关性分析法分析血清可溶性B7-H4表达水平与IgM、C-反应蛋白、降钙素原的相关性;以临床诊断结果为准,评价血清可溶性B7-H4表达水平诊断小儿支原体肺炎的应用价值,计算准确率、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果 研究组的血清可溶性B7-H4表达水平高于对照组,P<0.05;不同性别、年龄患儿的血清可溶性B7-H4表达水平对比,P>0.05;IgM、C-反应蛋白、降钙素原阳性患儿的血清可溶性B7-H4表达水平均高于阴性患儿,P<0.05;研究组患儿治疗后的血清可溶性B7-H4表达水平低于治疗前,P<0.05;Pearson相关性分析结果显示,血清可溶性B7-H4表达水平与IgM、C-反应蛋白、降钙素原之间均呈明显的正相关性;血清可溶性B7-H4表达水平诊断小儿支原体肺炎的准确率、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为37.90%(47/124)、41.94%(26/62)、33.87%(21/62)、38.81%(26/67)、36.84%(21/57)。结论 支原体肺炎患儿的血清可溶性B7-H4呈高表达水平,经治疗后其表达水平明显降低;血清可溶性B7-H4与IgM、C-反应蛋白、降钙素原之间呈正相关性,其检测对小儿支原体肺炎的诊断可发挥指导作用,具有一定的应用价值。

鸡血管生成素样蛋白4重组蛋白的原核表达及其对肉鸡血清生化指标和激素水平的影响

本试验旨在实现鸡血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)重组蛋白的原核表达,并探讨其对肉鸡血清生化指标和激素水平的影响。将带有His-SUMO标签的鸡ANGPTL4基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pET21a(+)的NdeⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET21a-His-SUMO-ANGPTL4,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对其菌液进行诱导表达,经包涵体复性和复性蛋白的Ni柱纯化,得到预期大小的融合蛋白His-SUMO-ANGPTL4。将得到的鸡ANGPTL4重组蛋白按照0(对照)、20、100、500、2500和12500 ng/kg BW的剂量静脉注射给35日龄的健康爱拔益加肉公鸡,每个剂量注射6只,并于注射后30 min采集肉鸡的空腹血液。结果显示:1)与对照组相比,2500和12500 ng/kg BW鸡ANGPTL4重组蛋白组其血清葡萄糖(GLU)和极低密度脂蛋白(VLDL)含量均显著提高(P<0.05);同时,随着鸡ANGPTL4重组蛋白注射剂量从0增加到12500 ng/kg BW,血清GLU和VLDL含量均呈现一次线性和二次曲线增加的效应(P<0.05)。2)与对照组相比,20、2500和12500 ng/kg BW鸡ANGPTL4重组蛋白组血清生长激素水平显著降低(P<0.05);同时,随着鸡ANGPTL4重组蛋白注射剂量从0增加到12500 ng/kg BW,血清生长激素水平呈现一次线性和二次曲线降低的效应(P<0.05)。3)与对照组相比,20、100、500、2500和12500 ng/kg BW鸡ANGPTL4重组蛋白组血清瘦素水平显著降低(P<0.05)。由此可见,本试验实现了鸡ANGPTL4重组蛋白的原核表达,静脉注射2500和12500 ng/kg BW该重组蛋白均可显著提高肉鸡血清中GLU和VLDL含量,显著降低肉鸡血清中生长激素和瘦素水平。

基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立

为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。