血满草多糖介导巨噬细胞M1型极化抑制肺癌的作用机制研究

目的:探讨血满草多糖(SPS-1)调控巨噬细胞极化对小鼠肺癌细胞Lewis细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:采用Western blot检测SPS-1对IL-4诱导的M2型巨噬细胞RAW264.7膜表面分子CD206、CD86的表达水平,采用RT-qPCR检测RAW264.7细胞炎性因子TNF-α、IL-10、TGF-β及特异性iNOS和Arg-1 mRNA表达水平的影响。共培养条件下,采用Transwell法检测SPS-1对Lewis细胞迁移与侵袭能力的影响,采用ELISA技术检测Lewis细胞中HIF-1α和VEGF的分泌量,采用流式细胞术检测Lewis细胞的凋亡,采用Western blot检测转移相关蛋白N-Cadherin、E-Cadherin和Vimentin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:SPS-1可显著增加M2型RAW264.7细胞膜表面分子CD86/CD206的比例,TNF-α和iNOS mRNA显著上调,IL-10、TGF-β和Arg-1 mRNA的表达量显著下调。共培养条件下,SPS-1显著抑制Lewis细胞的侵袭和迁移,并降低HIF-1α和VEGF的分泌及N-cadherin和Vimentin的表达,同时显著上调E-Cadherin的表达。凋亡实验结果显示,SPS-1亦可显著促进Lewis细胞的凋亡。结论:SPS-1可通过调控RAW264.7细胞极化抑制Lewis细胞的转移和凋亡。

血满草多糖提取工艺优化及其单糖组分分析

为了优化血满草多糖的提取工艺并分析其单糖组成,试验考察了提取温度、提取时间、溶剂用量和提取次数对血满草多糖提取率的影响,以单因素试验结果为基础,使用响应面法对血满草多糖的提取工艺进行优化,模拟得到二次多项式回归模型,并采用气相色谱-质谱联用技术分析其单糖组成。结果表明:血满草多糖的最佳提取工艺为提取温度89.72℃,提取时间114.15 min,溶剂用量26.40 mL/g,提取4.28次。考虑到实际操作,最终将最优提取参数确定为提取温度89℃,提取时间114 min,溶剂用量26 mL/g,提取4次,此时的多糖提取率预测值为2.6885%。经验证试验,血满草多糖的实际提取率可达(2.6113±0.0277)%,与模型预测值接近,两者相对误差为2.96%。血满草多糖主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖构成,摩尔比为1.00∶2.43∶0.51∶4.96∶1.82。说明优化工艺合理,得到的回归模型可真实反映提取条件对血满草多糖提取率的影响,并明确了血满草多糖的单糖组分。