羊捻转血矛线虫病检测方法研究进展

羊捻转血矛线虫病是由捻转血矛线虫寄生于羊等小反刍动物皱胃内引起的一种危害严重的嗜血性寄生虫病。病羊临床表现为消瘦、贫血和衰弱等慢性消耗性症状,严重感染者可致死。该病在我国牧区普遍流行,目前暂无安全长效疫苗可用,加之耐药性严重,放牧羊群感染率和发病率居高不下,极大地降低了羊养殖业的经济效益。准确可靠的检测手段是诊断寄生虫感染、制定驱虫治疗方案、耐药监测及流行病学调查的关键环节。本文详细介绍了羊捻转血矛线虫病的检测技术研究现状,分析了病原学、免疫学及分子检测等方法的优缺点,并对未来检测技术发展趋势进行了展望,以期为该病新型检测方法的研发及综合防控策略提供参考。

一例山羊捻转血矛线虫病的诊治

捻转血矛线虫病是由寄生于山羊真胃的捻转血矛线虫引起牛羊消化不良、食欲减少、消瘦、低繁殖的一种疾病,严重时会造成山羊死亡,严重影响养羊业的发展。我乡某养羊户在2022年5月底发现有3只羊步态不稳、轻度消瘦,注射了头孢噻呋钠、青霉素等药物均未见好转,死亡2只;之后一个多月内又有11只羊发生相同症状的疾病,相继又死亡3只。

捻转血矛线虫LAMP-LFD检测方法的建立

为了建立一种用于检测捻转血矛线虫的特异、灵敏、快速的检测方法,用环介导等温扩增技术(LAMP)结合横向流动试纸条(LFD),针对捻转血矛线虫mt-COⅠ基因的保守序列设计特异性引物和探针,对反应温度、反应时间、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度进行优化,建立了捻转血矛线虫环介导等温扩增技术与横向流动试纸条检测技术(LAMP-LFD)相结合的核酸检测方法。结果显示,建立的LAMP-LFD检测方法最低检测限为100 fg,对奥斯特线虫、夏伯特线虫、毛首线虫DNA检测均为阴性;50份临床样品检测结果与粪便虫卵检测法结果的符合率为96%。该方法操作方便、结果判定快速简单,有望成为流行区域和基层检测捻转血矛线虫的新方法。

捻转血矛线虫对伊维菌素的耐药机制

捻转血矛线虫病作为反刍动物最常见的消化道线虫疾病,已经给养殖业带来了重大经济损失,该寄生虫对伊维菌素早已经产生严重的耐药性,为该病的防治带来了一定的阻碍。在捻转血矛线虫对伊维菌素产生耐药性的研究进展中,已报道了3种可能耐药机制,分别为靶向GABA门控Cl~-通道、降低谷氨酸门控Cl^(-)开放频率和结合外排转运蛋白。调控型非编码RNA(miRNA和lncRNA)在不同病原耐药性研究中相继报道,发现miRNA和lncRNA与P糖转运蛋白、细胞色素P450和GABA门控Cl^(-)通道等耐药机制相关。但是该非编码RNA在捻转血矛线虫对伊维菌素耐药性的研究中鲜有报道,所以要突破耐药性的问题,要将非编码RNA与已报道的可能耐药机制相关联,进行深入研究,找出关键的耐药靶点。本文主要总结了该病对伊维菌素耐药性机制的相关研究进展,为耐药性后续深入研究提供新的思路。

羊肝片吸虫病与捻转血矛线虫病的鉴别诊断与治疗方法区别

随着养羊业规模化和集约化的发展,危害羊群生长发育健康的疾病发病率也逐渐升高,其中寄生虫病可严重影响放牧羊群的生产性能,进而降低生产经济效益。在实际生产过程中羊肝片吸虫与捻转血矛线虫病较为常见,两种寄生虫病临床症状颇为相似,了解肝片吸虫病和捻转血矛线虫病的鉴别诊断和治疗措施,有助于降低这两种寄生虫病对我国养羊业的危害,减少养羊业的经济效益损失。

铜仁市某羊场捻转血矛线虫和羊链球菌混合感染的诊治

2022年10月初,贵州省铜仁市某羊场部分羊群突发高热、呼吸困难和腹泻等,部分发病严重羊群死亡,给羊场造成巨大的经济损失。通过流行病学调查、临床剖检和实验室诊断,确定该场羊群发病是由羊链球菌和捻转血矛线虫混合感染所致。进一步药敏实验结果显示,该场流行的链球菌对多环西素、头孢他啶、氟苯尼考和氧氟沙星等敏感,但对卡那霉素、复方新诺明、氨苄西林、四环素和环丙沙星等耐药。对全场羊群进行药物治疗,主要包括饲料中拌喂阿苯达唑伊维菌素粉末,肌肉注射氟苯尼考(0.2 mg/kg),并采取对症治疗,最后该养羊场病情得到控制,减少了经济损失。

羊捻转血矛线虫病的诊治报告

该文报道一例羊捻转血矛线虫病的发病情况、临床症状、剖检病变、诊断及治疗措施,供同行参考。

一例放牧山羊捻转血矛线虫病的诊治与体会

2023年4月27日龙岩市培丰镇某放养山羊群发病,根据发病情况、临床症状、剖检病变和实验室检查结果,诊断为山羊捻转血矛线虫病,经采取综合防治措施,病情得到有效控制。

捻转血矛线虫PCR检测方法的建立及其应用

为了能从粪便中对捻转血矛线虫卵进行特异性检测,基于捻转血矛线虫ITS2-28S基因序列设计特异性引物,通过对退火温度反应条件优化,建立捻转血矛线虫特异性PCR检测方法。结果显示,该方法成功从捻转血矛线虫卵中扩增出约270 bp的特异性片段,其最低检出质量浓度为0.298 pg/μL,敏感性较高;进一步对捻转血矛线虫、细颈线虫、粗纹食道口线虫等多种线虫的虫卵DNA样品进行扩增,该方法仅能特异性扩增出捻转血矛线虫卵的目的片段,证明特异性良好。利用所建立的PCR检测方法对120只山羊的粪便样品进行检测,显示受检样品中捻转血矛线虫阳性率为38.3%,高于显微镜检测结果(阳性率为24.2%)。结果表明,该研究建立的PCR方法能够应用于临床检测山羊粪便样品中的捻转血矛线虫卵,可为山羊捻转血矛线虫病的诊断与防治提供有效技术支持。

捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株与耐药虫株差异miRNA的转录组学分析

为探究捻转血矛线虫的伊维菌素(IVM)敏感虫株与耐药虫株显著差异的microRNA(miRNA)转录谱,发掘其耐药相关的miRNA,本实验采用Illumina Hiseq2000平台分别对捻转血矛线虫IVM敏感虫株与耐药虫株测序,构建cDNA文库,通过质控后采用生物信息学软件筛选捻转血矛线虫IVM敏感与耐药虫株的差异mi RNA。结果显示,捻转血矛线虫的IVM敏感与耐药虫株筛选出转录显著差异的miRNA共375个,其中253个转录上调,122个转录下调。利用RNAhybrid(V6.01)、Miranda(V3.3a)、TargetScan(V7.0)软件对筛选到的mi RNA靶基因进行预测,并取交集作为mi RNA靶基因预测结果,将筛选出显著差异的靶基因通过perl脚本与显著差异的miRNA进行关联分析,结果显示共关联到2106对miRNA-mRNA为负调控关系,其中涉及到477个差异的m RNA和603个差异的miRNA。对显著差异的miRNA靶基因进行GO富集分析,结果显示其中有492个GO terms,包括生物过程(BP)322个、细胞组分(CC)47个、分子功能(MF)123个。按照q值由小到大的顺序排列,被显著富集的有肌细胞发育分化及内肽酶活性等功能;按照富集基因数目由多到少排列,被显著富集的为有机物代谢、细胞代谢等功能。对显著差异的miRNA靶基因进行KEGG信号通路富集分析,按照q值由小到大的顺序排列,被显著富集到的有抗原处理与递呈等信号通路,其中显著差异靶基因也被富集到药物代谢-其他酶等与药物代谢相关的信号通路,以及一些在捻转血矛线虫耐IVM中起重要作用的通路,如:药物代谢细胞色素P450、细胞色素P450对外源药物代谢通路、ABC转运蛋白等。随机从差异miRNA中选10个进行RT-q PCR的验证,结果显示,相对转录水平结果与测序结果一致。本研究上述结果首次证实,捻转血矛线虫对IVM耐药性的产生与其代谢过程、肌细胞的分化发育过程及免疫过程中的某个或多个环节有一定的联系,本研究为进一步探究捻转血矛线虫耐药机制提供了科学依据。

捻转血矛线虫重组磷脂酰肌醇转移蛋白对山羊外周血单个核细胞模式识别受体和细胞因子转录水平的影响

本文旨在研究捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)磷脂酰肌醇转移蛋白(phosphatidylinositol transfer protein, HCPITP)对山羊的免疫调节功能。构建了原核表达重组质粒pET-28a-HCPITP并获得重组蛋白;分析HCPITP基因在虫卵、第三期幼虫、雌虫和雄虫中转录水平的变化;将重组蛋白与山羊外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)共孵育,研究重组蛋白对山羊PBMCs增殖、模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)表达和细胞因子分泌的影响。结果显示,HCPITP基因在雌虫、雄虫、第三期幼虫和虫卵中相对转录水平分别为1、10.2、0.47和0.58。Western blot分析发现该重组蛋白具有较好的反应原性。该重组蛋白能够显著抑制ConA对PBMCs的增殖作用,重组HCPITP显著促进山羊PBMCs的IL-2、IL-4、IL-6和IL^(-1)7转录水平,主要促进模式识别受体TLR1与TLR10的转录。综上,HCPITP基因转录水平具有明显的阶段差异性,重组蛋白对山羊PBMCs增殖、PRRs以及细胞因子mRNA转录水平有一定的影响作用。

圈养野生动物捻转血矛线虫诊断及防控综述

捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是反刍动物体内常见的寄生虫,圈养食草类野生动物感染捻转血矛线虫须引起重视,因其致病性更强,会增加宿主的死亡率。从捻转血矛线虫的病原学特点和诊断方法入手,对捻转血矛线虫病的防治技术,包括药物防治、免疫防治和生物防治进行综述,结合圈养食草类野生动物的饲养特点,提出加强饲养管理、营养供给和保护易感动物的措施,为圈养野生动物捻转血矛线虫病的防治提供参考。

羊捻转血矛线虫病的流行特点与防控

羊捻转血矛线虫病是一种在全球范围内广泛分布的寄生虫病,特别是在温暖湿润的热带与亚热带地区。本文对羊捻转血矛线虫的形态特征、生活史、流行特点、临床症状及病变、诊断方法和防控措施进行了详细介绍,为该疾病的预防和控制提供了参考依据。

一例肉羊捻转血矛线虫病的诊治与体会

羊血矛线虫病是养羊业危害最大的重要寄生虫病之一,给肉羊养殖业带来重大的经济损失。该文介绍一例福建省福州市连江县蓼沿乡张姓养殖户饲养的山羊发生捻转血矛线虫病的诊治体会,供同行参考。

小尾寒羊血矛线虫病的诊断与防治

血矛线虫病是对小尾寒羊危害比较严重的一种传染性寄生虫病,近几年来,本病的不断发生和流行,给养羊业带来了较大的经济损失.据2001年至2003年8月来我处门诊就治的小尾寒羊病例,以及死亡病例剖检,及对社会上养殖场和户的流行病学调查,该寄生虫病的羊群寄生率在32%左右,感染后期表现消瘦、虚弱、极度贫血直至死亡的占4%左右.羊群中3～6个月的羊发病率较高,成年羊发病率稍低,夏秋多雨季节易爆发本病.

苏云金芽孢杆菌毒素对羊捻转血矛线虫第三期幼虫毒力研究

从人工感染捻转血矛线虫（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓｃｏｎｔｏｒｔｕｓ）山羊的直肠内取出粪便，在２５℃温箱中培养７ｄ，用贝尔曼法分离出第三期幼虫，将它们加入含苏云金芽抱杆菌以色列亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）伴孢晶体毒素的培养液中，置２５℃下培养。当伴孢晶体蛋白含量为４００ｇ／ｍｌ时，幼虫的死亡率２４ｈ后为９４．７％，４８ｈ后为９７．３％。毒素对幼虫作用２４ｈ与４８ｈ，其毒力无显著差异（Ｐ＞０．０５），并且作用２４Ｌ与４８ｈ，其ＬＤ＿（５０）值伴孢晶体蛋白含量分别为８４。０５μｇ／ｍｌ和５８．６４μｇ／ｍｌ。由于伴孢晶体蛋白质对人畜无毒，可将苏云金芽孢杆菌的件孢晶体作为防治某些动物奇生虫的杀虫剂。

基于ITS序列的捻转血矛线虫系统进化分析

为分析捻转血矛线虫ITS序列的变异与虫株特性之间的关系,对捻转血矛线虫不同药物抗性虫株(苯并咪唑类药物抗性虫株、伊维菌素抗性虫株、莫西菌素抗性虫株、药物敏感虫株)、不同宿主来源虫株(长颈鹿、牛、绵羊、山羊、牦牛)和不同地理位置(中国、美国、意大利、法国、也门、马来西亚、澳大利亚)的分离株,以及毛圆科的其他线虫的ITS序列进行了分析。结果发现捻转血矛线虫与毛圆科其他线虫的ITS-2基因的相似性高,基于该基因建立的系统进化树可以很好地区分毛圆科不同属的线虫;捻转血矛线虫的抗药性特点与其ITS-1基因的变异进化关系不大;不同地理位置的捻转血矛线虫分离株的ITS-2基因变异很小;从野生动物长颈鹿体内分离的捻转血矛线虫的ITS-1基因与家养反刍动物分离株的差异较明显。研究结果表明捻转血矛线虫ITS序列在种内相对保守,不同虫株间变异较小,在毛圆科线虫的分子分类中具有一定意义。

林麝捻转血矛线虫的分子鉴定

为鉴定林麝粪样中疑似血矛属线虫虫卵的虫种,本研究提取四川和陕西地区林麝粪样中疑似血矛属线虫的虫卵DNA,对其核糖体内转录间隔区(ITS)全序列进行PCR扩增与序列分析。结果显示14个疑似血矛属线虫的虫卵DNA样品ITS全序列片段大小为786 bp^788 bp,序列相似性为99.0%~100%;经序列BLAST比对和系统发育分析,所有疑似血矛属线虫的虫卵样品均为捻转血矛线虫,与NCBI基因库中多株捻转血矛线虫的ITS序列相似性为97.0%~99.5%。研究结果表明,寄生于林麝的血矛属线虫为捻转血矛线虫,从而为控制林麝捻转血矛线虫病提供了重要依据。

对捻转血矛线虫幼虫有杀灭作用的苏云金芽胞杆菌的筛选

对捻转血矛线虫幼虫有杀灭作用的苏云金芽胞杆菌的筛选姚宝安，钟勤，王乾兰，赵俊龙，马丽华，喻子牛（华中农业大学牧医系，武汉４３００７０；华中农业大学部级农业微生物重点实验室，武汉４３００７０）ＴＨＥＳＩＦＴＩＮＧＯＦＢＡＣＩＬＬＵＳＴＨＵＲＩＮＧＩＥＮ...

捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析

参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物,以H.contortusZJ株的总RNA为模板,进行RT2PCR扩增,成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm2T载体连接后,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序。序列分析表明,其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99.5%。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列,推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。