土家族药物血筒抗佐剂性关节炎药效作用研究

目的 对土家族药物血筒抗佐剂性关节炎（AIA）作用进行初步评价研究,为其进一步系统和深入研究奠定基础。方法 ♂SD大鼠30只,随机分为正常组、模型组、血筒醇提物组。CFA尾根部免疫建立AIA模型,血筒醇提物（1.0g·kg^-1）口服给药治疗30d。AIA造模后进行后足肿胀测量、关节炎指数评分及体质量称量评价。治疗结束后进行后足CT扫描和组织病理学检查,同时检测血清中炎症因子含量。结果 与模型组比较,血筒组大鼠AIA发病率仅55%（P=0.035）,关节肿胀度降低1.8-2.3倍（P〈0.01）、体质量重10%-20%（P〈0.05）;CT和组织病理学检查显示,血筒明显抑制关节滑膜增生,减少关节翳形成,抑制关节软骨破坏和骨侵蚀（P〈0.01）;血筒组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显降低（P〈0.05）。结论 该研究明确了血筒治疗风湿关节疾病的药效作用,也显示了其进一步研究开发的前景。

血筒化学成分、药理作用及质量控制研究进展

血筒是湘西北土家族传统民族药材,药用历史悠久,其来源于五味子科南五味子属异型南五味子Kadsura heteroclite(Roxb) Craib的藤茎,主要含有三萜、木脂素、倍半萜、挥发油、多糖等成分。血筒具有广泛的生物活性,民间习用于治疗风湿痹痛,骨痛,风湿关节炎,胃溃疡,十二指肠溃疡,急、慢性胃病等。现代药理学研究表明,血筒具有抗炎镇痛、抗脂质过氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、神经保护等作用,具有极大的研究价值和开发前景。本文对血筒的化学成分、药理作用、质量控制进行系统综述,以期为血筒进一步开发应用提供参考。

MMPs/pH协同响应的血筒素-普鲁士蓝纳米递药系统联合光热抑制RAFLS细胞增殖和迁移的研究

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节处于弱酸性环境,关节中RA成纤维样滑膜细胞(RA fibroblast-like synoviocyte,RAFLS)被异常激活,分泌大量基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),细胞膜上CD44受体蛋白被特异性上调。血筒素(xuetongsu,XTS)是土家族药物血筒中抑制RAFLS增殖的主要活性成分,因靶向性差限制了其开发利用。该研究构建了一种可靶向CD44的仿生XTS-普鲁士蓝纳米(Prussian blue nanoparticles,PB NPs)载药递送系统THMPX NPs。THMPX NPs表面有透明质酸(hyaluronic acid,HA)和三聚甘油单硬脂酸酯(triglycerol monostearate,TGMS)-3-氨基苯硼酸(3-aminobenzeneboronic acid,PBA)长链(PBA-TGMS)修饰。炎性RAFLS中过表达的MMPs和H+可协同切割纳米粒表面的PBATGMS,从而暴露HA与CD44相互作用,使THMPX NPs在RAFLS中高度富集,近红外光照射后产热并释放XTS,抑制RAFLS细胞增殖和迁移。表征发现THMPX NPs为形态均一的立方形,粒径为(190.3±4.7)nm,平均电位在(-15.3±2.3)mV,近红外光照射5 min温度可达41.5℃,释药呈现MMPs和H+敏感性;生物安全性考察发现THMPX NPs溶血率小于4%,对正常的RAW264.7和HFLS无细胞毒性;体外摄取实验表明THMPX NPs有明显的RAFLS靶向性;自由基清除实验发现THMPX NPs有优异的自由基清除能力,可清除RAFLS中的活性氧;cell counting kit-8和划痕实验表明THMPX NPs显著抑制RAFLS活力和迁移能力。该研究为开发抗RA中药民族药创新纳米靶向药物提供了思路。

筒筒式凝血仪的研制

通过检测血样的剪切应力变化,自动测量四个凝血参数(tr、△τ/△t、τmax、S)。仪器定量检测凝血过程,并打印凝血曲线。仪器对不同血样检测差异性大;对同一血样检测重复性好。

谷胱甘肽响应型探针的制备及其在天然药物筛选中的应用

目的制备谷胱甘肽(glutathione,GSH)响应的香豆素类荧光探针并应用于中药GSH调节剂的筛选。方法以香豆素为荧光团,2-氯-5-硝基嘧啶为淬灭基团,构建GSH响应的荧光探针(HCN),通过紫外、高效液相色谱、荧光光谱和核磁等表征手段确定HCN的结构及其对GSH响应的可行性、特异性、灵敏性,以确定最佳响应条件。通过MTT实验及细胞成像考察HCN的细胞毒性及胞内荧光信号。以GSH商品化消耗剂(NEM)为阳性对照,选取民族药血筒中16种化合物为筛选对象,通过HCN检测所选化合物对GSH水平的调控能力,并进一步采用分子对接手段验证筛选结果的可靠性。结果核磁谱表明HCN合成成功,能与GSH特异性响应并呈线性关系,且HCN的最佳反应温度和反应时间分别为37℃和100 min。MTT实验表明,在HepG2细胞中,与0μmol/mL相比,80μmol/mL和100μmol/mL的HCN降低了细胞活力(P<0.05),说明HCN对HepG2细胞增殖有影响;在HL-7702细胞中,与0μmol/mL相比,各浓度HCN对细胞活力影响微弱(P>0.05),说明HCN对HL-7702细胞增殖无影响。在细胞成像实验中,与0μmol/mL相比,各浓度HCN的荧光强度增强(P<0.05)。在药物筛选中,与control相比,血筒中的化合物五内酯B、南五内酯和异南内酯A下调了GSH的水平(P<0.001,P<0.05)。分子对接结果表明,血筒中的化合物五内酯B、南五内酯和异南内酯A与GSH形成了2个及以上的氢键,结合能分别为-3.94、-3.64、-4.87 kal/mol。结论本文设计合成了一种GSH响应的香豆素类探针HCN,HCN具有良好的GSH响应特异性、灵敏性、光稳定性及低细胞毒性等特点,能应用于中药GSH调节剂的筛选,该研究可为荧光探针技术服务与中药活性成分筛选提供参考。

异型南五味子根的化学成分研究

运用硅胶柱色谱、Sephadex LH⁃20、ODS、MCI和半制备高效液相等多种色谱技术对异型南五味子Kadsura heteroclita根二氯甲烷部位的化学成分进行研究。运用NMR、MS、UV、X⁃ray单晶衍射等技术对化合物进行结构鉴定,共分离得到20个化合物,分别鉴定为血筒内酯G(1)、mallomacrostin C(2)、3,4⁃seco(24Z)⁃cychmrt⁃4(28),24⁃diene⁃3,26⁃dioic acid 3⁃methyl ester(3)、黑五味子酸(4)、五内酯E甲酯(5)、五味子酸(6)、heteroclic acid(7)、汉黄芩素(8)、(2R,3R)⁃4′⁃甲氧基二氢槲皮素(9)、15,16⁃bisnor⁃13⁃oxo⁃8(17),11E⁃labdadien⁃19⁃oic acid(10)、stigmast⁃4⁃ene⁃6β⁃ol⁃3⁃one(11)、补骨脂素(12)、(1R,2R,4R)⁃trihy⁃droxy⁃p⁃menthane(13)、香草醇(14)、2⁃(4⁃hydroxyphenyl)⁃ethanol(15)、松柏醛(16)、(E)⁃7⁃(4⁃hydroxy⁃3⁃methoxyphenyl)⁃7⁃methylbut⁃8⁃en⁃9⁃one(17)、香草乙酮(18)、香草酸(19)、香草醛(20)。其中化合物1为新的三萜,命名为血筒内酯G,化合物2~3、8~20均为首次从异型南五味子中分离得到。

异型南五味子醇提物对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨异型南五味子(血筒)醇提物对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,联苯双酯组,血筒醇提物高、中、低剂量组,用药组连续ig给药7 d。第6天除正常组皮下注射等量生理盐水外,其他各组均皮下注射CCl4。24 h后,检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,取肝脏计算肝指数,制备肝匀浆测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量,于光镜下观察肝组织的病理变化。结果:血筒醇提物低、中、高剂量组能不同程度地降低急性肝损伤大鼠肝脏指数及ALT,AST水平,升高肝组织GSH水平(P<0.05或P<0.01),减轻CCl4引起的肝组织损伤程度。结论:血筒醇提物对CCl4致大鼠急性肝损伤有明显的保护作用。