丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及机制

目的 观察丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及其机制。方法 96只12周龄的SD大鼠,雌雄不论,体质量200~220 g。采用随机数字表法分为假手术组(n=16)、脓毒症组(n=16)、丙泊酚组(n=16)、丙泊酚+ROCK抑制剂Y-27632组(n=16)、丙泊酚+PKCα抑制剂GO6976组(n=16)、丙泊酚+IP3抑制剂2-APB组(n=8)以及丙泊酚+细胞缝隙连接抑制剂甲氯灭酸钠(Movens)组(n=8),采用离体血管环张力测定技术和血管环钙敏感性测定技术,研究丙泊酚对脓毒症大鼠血管低反应性的改善作用及其与RhoA/ROCK、PKCα、IP3和细胞缝隙连接的关系。结果 离体血管环反应性测定实验和钙敏感性测定实验表明,与假手术组相比,脓毒症组大鼠血管对去甲肾上腺素的收缩反应性和钙敏感性均显著降低,量-效曲线右移,其中肠系膜上动脉降低最为明显,降低比例达51.42%(P<0.05);而丙泊酚组可明显改善脓毒症组血管低反应性以及钙敏感性,在股动脉的恢复作用最为显著,恢复比例达89.57%(P<0.05)。钙敏感性测定实验结果表明,与丙泊酚组相比,丙泊酚+Y-27632组和丙泊酚+GO6976组量-效曲线右移,Y-27632和GO6976可显著拮抗丙泊酚对严重脓毒症大鼠肠系膜上动脉主干血管钙敏感性的改善作用,抑制率分别为146.95%和88.63%(P<0.05)。离体血管环反应性测定实验显示,丙泊酚+Y-27632组和丙泊酚+Movens组可显著拮抗丙泊酚组对脓毒症组大鼠血管低反应性的改善作用,抑制程度分别为40.79%和169.90%(P<0.05);而丙泊酚+GO6976组和丙泊酚+2-APB组无明显变化。结论 丙泊酚治疗可显著改善脓毒症大鼠血管低反应性,其机制可能是通过RhoA/ROCK通路改善血管钙敏感性。

创伤失血性休克血管低反应性发生机制的研究进展

创伤失血性休克是由严重创伤引起大出血导致的一种低血容量性休克,在其发生过程中,失血引起有效循环血量锐减,创伤、失血作为应激原引起神经-体液因子失调,导致微循环障碍、重要组织器官灌流不足,出现以急性缺血、缺氧为特征的全身性损害。随着休克的进展,内源性血管活性物质在体内堆积,微血管对血管活性物质的反应性逐渐下降以至消失,表现为麻痹性扩张,成为顽固性低血压、休克难治的重要因素,是患〔1〕

Rho-激酶在失血性休克大鼠血管低反应发生中的作用

目的观察Rho-激酶在失血性休克大鼠血管低反应发生中的作用。方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),采用离体血管环张力测定技术,观察在失血性休克后不同时相点大鼠肠系膜上动脉血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力,在去极化状态下(120mmol/L K+)血管环对梯度浓度Ca2+的收缩力,以及肠系膜上动脉Rho-激酶活性,分析不同时相点SMA对NE的反应性及Ca2+收缩反应性与Rho-激酶活性变化之间的关系;同时观察Rho-激酶激动剂血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、Rho-激酶特异性抑制剂Y-27632对休克2小时大鼠SMA血管反应性和钙敏感性的影响。结果休克早期SMA对NE和Ca2+的反应性明显升高,最大收缩力(Em ax)明显升高(P<0.05);但休克2小时,血管环对NE反应性和钙反应性明显降低,Em ax明显降低(P<0.01)。与正常组相比,Rho-激酶活性在休克即刻升高(P<0.05),休克1小时和2小时时,Rho-激酶活性明显降低(P<0.05)。SMA对NE的反应性与Rho-激酶活性变化之间呈直线正相关,相关系数r=0.9861(P<0.05);SMA对Ca2+反应性与Rho-激酶活性变化之间呈直线正相关,相关系数r=0.9704(P<0.05)。Rho-激酶激动剂Ang-Ⅱ(10-9mol/L)可明显升高休克2小时血管环对NE和Ca2+的反应性(P<0.05或P<0.01),而休克2小时后,Rho-激酶特异性抑制剂Y-27632可进一步降低血管环对NE和Ca2+的反应性。结论失血性休克时血管平滑肌细胞Rho-激酶活性明显降低,Rho-激酶通过调节钙敏感性调节血管反应性,并在失血性休克血管低反应性的发生中起重要作用。

血管平滑肌细胞钙库Ca^(2+)动员的变化在休克血管低反应性形成中的作用

目的:探讨大鼠腹主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)在缺氧培养时胞内钙库钙释放的变化情况,并探讨胞内钙库钙释放在休克血管对去甲肾上腺素(NE)低反应性中的可能作用,为进一步阐明休克血管低反应性的发生机制提供依据。方法:建立大鼠失血性休克(40mmHg,2h)的在体模型及大鼠VSMCs缺氧细胞模型;采用Fura-3/AM钙离子成像方法测定VSMCs胞浆钙离子浓度([Ca2+])的变化情况及其与IP3受体(IP3R)及雷诺定受体(RyR)介导的钙释放通道的关系;采用离体器官张力测定技术,检测不同内钙释放依赖信号通路在休克血管低反应性形成中的可能作用。结果:在细胞外液无Ca2+的前提下,NE可通过动员内钙释放引起VSMCs胞浆[Ca2+]的明显升高;缺氧培养后VSMCs胞浆[Ca2+]较正常对照组有所升高,由NE诱导的VSMCs胞浆[Ca2+]较对照组有所降低,但均无显著差别;但在缺氧培养的VSMCs,细胞内钙库钙释放功能明显改变,表现为与正常对照组比较,缺氧VSMCs由IP3R敏感钙释放通道开放剂adenophostinA(10-5mol/L)及ATP-Na2(10-4mol/L)诱导的VSMCs胞浆[Ca2+]升高不显著,但RyR敏感钙释放通道开放剂caffeine可诱导缺氧VSMCs胞浆[Ca2+]的明显升高;失血性休克(40mmHg,2h)可引起大鼠腹主动脉血管对由NE诱导的收缩反应性明显降低,IP3R激动剂ATP-Na2(10-4mol/L)并不明显提高休克血管对NE的收缩反应性,但IP3R阻断剂heparin(104U/L)可明显抑制休克血管对NE的收缩反应性;此外,在无钙及含钙的K-H液中,RyR阻断剂ryanodine(10-5mol/L)可部分恢复休克血管对NE的收缩反应性,而RyR激动剂caffeine(10-3mol/L)可进一步降低休克血管对NE诱导的收缩反应性。结论:失血性休克后由RyR介导的内钙释放被激活部分参与了休克血管低反应性的形成。

血管生成素1,2通过诱导型一氧化氮合酶调节失血性休克大鼠血管低反应性

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用。方法:采用WesternBlotting观察iNOS蛋白表达,同时采用离体微血管环张力测定技术检测血管反应性,以及细胞一氧化氮(NO)含量。结果:iNOS表达在失血性休克后逐渐增高;iNOS抑制剂可显著恢复缺氧4h的血管低反应性,抑制Ang-2进一步降低缺氧4h血管反应性的作用,去甲肾上腺素(NE)的最大收缩力(Emax)分别由5.875mN增高至8.937mN和由3.444mN增高至7.492mN(P<0.01);Ang-1,Tie-2、p38MAPK和Erk抑制剂可抑制缺氧4h的iNOS表达和增加NO生成(P<0.01)。结论:失血性休克晚期,Ang-1和Ang-2可通过p38MAPK和Erk调节iNOS蛋白表达,增加NO生成来调节血管低反应性。

血管平滑肌细胞钙敏感性调控与休克血管低反应性发生的关系

血管平滑肌细胞钙敏感性调节是血管平滑肌舒缩调节的重要途径,Rho激酶、蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)是参与其中的关键分子。在休克等病理条件下,上述分子的活性发生变化,引起钙敏感性降低,从而导致了血管对缩血管物质的反应性降低,即血管的低反应性。

平滑肌细胞内钙稳态变化在脓毒症/脓毒性休克血管低反应性形成中的作用

血管低反应性是脓毒症／脓毒性休克的重要特征。ＬＰＳ通过影响胞外Ｃａ２＋的跨膜内流、胞内Ｃａ２＋动员及收缩蛋白对Ｃａ２＋的敏感性干扰血管平滑肌对缩血管物质的反应性。ＮＯ／ｃＧＭＰ和Ｇ蛋白－ＰＬＣ－ＰＫＣ信使通路参与了这种血管低反应性的形成。

一氧化氮在休克血管低反应性发生机制中的作用

失血性休克、脓毒血症引起的血管功能受损是重症休克导致患者多器官衰竭乃至死亡的重要原因之一。休克后血管功能受损主要表现血管平滑肌功能受损和血管内皮功能紊乱。血管平滑肌损伤导致休克患者的血压逐步恶化,表现为血管低反应性,是重症休克患者死亡的重要原因之一。血管内皮损伤会导致微血管血流受阻、黏附增强、白细胞与血小板激活、凝血异常和重要器官的血液灌注与能量代谢异常,加重器官损伤。研究发现,一氧化氮(NO)。

线粒体功能不全在重症休克血管低反应性中的作用

在重度失血、严重感染、酸中毒、缺氧等致病因素导致重症休克的过程中，微血管对血管活性物质，如去甲肾上腺素（NE）或P物质（SP）的反应性降低，引起休克晚期血液循环动力低下，出现顽固性低血压、重脏器低灌注，严重影响着休克的治疗和预后，是重症休克患者死亡的主原因之一。

CaSR抑制剂Calhex231通过PTH-AR途径参与创伤失血性休克大鼠血管低反应性的调节

目的:探讨钙敏感性受体(CaSR)抑制剂Calhex231(Cal)是否通过甲状旁腺素(PTH)-肾上腺素受体(AR)途径参与创伤失血性休克大鼠血管低反应性的调节。方法:检测Cal对创伤失血性休克大鼠血PTH水平的影响,并观察外源给予PTH对正常和休克大鼠血压的影响;Western blot法检测Cal对大鼠肠系膜上动脉(SMA)以及外源给予PTH对大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)中2种AR亚型(α1-AR和β1-AR)蛋白表达水平的影响。结果:创伤失血性休克后大鼠血PTH水平显著升高,Cal治疗能够显著降低血PTH水平(P<0.01)。外源给予PTH能显著降低正常大鼠血压。在组织水平上,Cal能提高创伤失血性休克大鼠SMA中α1-AR蛋白表达水平(P<0.05);在细胞水平上,外源给予PTH能使大鼠原代VSMC中α1-AR蛋白表达水平降低,Cal能拮抗PTH降低α1-AR蛋白表达的作用(P<0.05)。结论:CaSR抑制剂Cal可通过降低血PTH水平、上调血管α1-AR蛋白表达水平而发挥改善休克后血管低反应性的作用。

经MEGJ的cAMP传递介导Ang2调节缺氧大鼠血管平滑肌细胞低反应性

目的:观察肌内皮缝隙连接(MEGJ)是否通过传递环磷酸腺苷(cAMP)介导血管生成素2(Ang2)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和血管低反应性的调节。方法:在双面共培养系统中培养大鼠血管内皮细胞(VECs)和VSMCs,并予以RNA干扰和缺氧等处理;采用Western blot技术检测VSMCs中iNOS的表达;通过检测FITC标记的牛血清白蛋白的荧光透过率反映VSMCs收缩反应性;采用Alexa Fluor 488-c AMP为示踪剂,观察cAMP从VECs到VSMCs的跨MEGJ转运。结果:在单独培养的VECs和VSMCs中,缺氧及Ang2处理后cAMP浓度均显著增高(P<0.05),但在VECs和VSMCs中的水平并不相同,在VECs中的水平显著高于VSMCs中的水平(P<0.05)。在双面共培养系统中,VECs和VSMCs中cAMP的浓度差则明显降低,且VSMCs中增高的c AMP水平可被缝隙连接蛋白43(Cx43)小干扰RNA(siRNA)显著抑制(P<0.05)。外源性Ang2作用下缺氧后荧光标记的Alexa Fluor 488-cAMP发生明显的从VECs到VSMCs的转运,且可被Cx43 siRNA显著抑制(P<0.05)。在双面共培养系统的VECs和VSMCs侧给予c AMP抑制剂均可显著抑制外源性Ang2作用下缺氧VSMCs的i NOS高表达,改善VSMCs的收缩低反应性(P<0.05)。结论:缺氧后Ang2可能通过Cx43,促进c AMP经MEGJ传递进入VSMCs,导致VSMCs的iNOS高表达和收缩低反应性。

血管生成素-2经肌内皮缝隙连接调节血管低反应性

目的 观察肌内皮缝隙连接（MEGJ）对血管生成素-2（Ang2）调节缺氧大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）低反应性的介导作用,并明确参与的缝隙连接蛋白（Cx）亚型.方法 建立血管内皮细胞（VECs）和VSMCs双面共培养模型,检测异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白（FITC-BSA）透过率反映VSMCs收缩反应性,观察鬼笔环肽荧光反映MEGJ形成,观察磺酰罗丹明B细胞培养试剂染料转运反映MEGJ通讯功能.结果 （1）在双面共培养模型,缺氧4h后VECs和VSMCs中iNOS表达显著增高,且VSMCs中的显著强于VECs中（3.6倍,P=0.003）,此增高的VSMCs中iNOS表达可被Ang2 siRNA抑制约60％ （P =0.003）.（2） MEGJ抑制剂18α-GA、Cx43 siRNA（50 nmol/L）和促血管生成素受体2（Tie2） siRNA（50 nmol/L）可降低外源性Ang2作用下缺氧VSMCs的iNOS表达（P值分别为0.001,0.001和0.001）,改善VSMCs收缩反应性（P值分别为0.004,0.009和0.001）.（3）Cx43 siRNA和Tie2 siRNA可抑制缺氧及Ang2处理后上调的MEGJ形成（P值分别为0.005和0.005）,并抑制上调的MEGJ通讯增强（P值分别为0.003和0.004）.结论 MEGJ介导Ang2对缺氧VSMCs低反应性的调节,Cx43是参与的蛋白亚型.

聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶在大鼠失血性休克后血管低反应性发生中的作用

目的研究聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶（PARP）在大鼠失血性休克后血管低反应性发生中的作用。方法将SD大鼠随机分为休克组、PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3-AB）预处理＋休克组和假手术对照组，采用股动脉放血复制失血性休克模型。在体观察给予3μg／kg去甲肾上腺素（NE）升高血压的幅度；离体测定肠系膜上动脉血管环对NE的反应性；硝酸还原酶法测定血浆和肠系膜上动脉血管环组织匀浆中一氧化氮（NO）的含量。结果休克模型完成后即刻静脉给NE，休克组血压升高幅度显著低于假手术对照组（P〈0．01）；回输血1h后再次静脉给NE，休克组血压显著低于3-AB预处理＋休克组和假手术对照组（P〈0.05和P〈0.01）。假手术对照组最大收缩张力[（0.3671士0.2213）g／mm]〉3-AB预处理＋休克组[（0.2864±0.1532）g／mm]〉休克组[（0.1856士0.1113）g／mm，P〈0.05或P〈0.01]；与休克组比较，3-AB预处理＋休克组量-效曲线左移，在NE终浓度为10^-7、10^-6和10^-5mol／L时其收缩力显著增加（P均〈0.05）。3组间血浆NO含量差异均无统计学意义，3-AB预处理＋休克组血浆和肠系膜上动脉组织匀浆中NO含量虽较休克组稍有降低，但两组间比较差异无统计学意义。结论PARP参与了大鼠失血性休克后血管低反应性的发生。

加强对休克后血管低反应性的研究

近年来许多研究表明，严重创烧伤所导致的休克晚期存在血管低反应性现象。它主要表现为全身血管对舒缩血管物质的反应降低或不反应。血管低反应性不仅影响着病情的发展及转归，而且严重影响着治疗的效果。有研究提示，制约严重创伤、休克治疗效果的内源性因素，除机体的物质代谢、能量代谢障碍及全身炎性反应所致的多器官功能衰竭外，血管低反应性也是其中非常重要的一项。临床许多重症晚期对血管活性药物治疗的反应减弱或不反应，都可能与血管的低反应性有关，所以血管低反应性问题日益受到临床医师和基础研究工作者的重视。