运动训练对高血压大鼠认知功能及脑内血管内皮一氧化氮合成酶的影响

目的:研究运动训练对高血压大鼠认知功能及脑内血管内皮一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的影响。方法:将30只3月龄自发性高血压易卒中(stroke-prone spontaneously hypertensive, SHRSP)大鼠随机分为对照组(SHRSP-Con)和训练组(SHRSP-PE),采用相同周龄的Wistar Kyoto(WKY)大鼠15只作为正常血压对照组(WKY-Con)。SHRSP-PE组给予持续4个月的跑笼训练;SHRSP-Con组和WKY-Con组不予任何针对性训练。各组大鼠在3及7月龄分别测血压、认知功能,观察皮质及海马的eNOS、β-secretase(BACE1)、β-amyloid(Aβ)的表达。结果:3月龄SHRSP大鼠的血压明显高于WKY大鼠,差异有显著性意义(P<0.05),各组大鼠认知功能无明显差异。7月龄SHRSP-Con组与WKY组比较,血压明显升高,认知功能减退,脑内eNOS表达减少、BACE1表达增加及Aβ沉积增加,差异有显著性意义(P<0.05)。与SHRSP-Con组相比,4个月的运动训练可以明显降低血压、改善认知功能且可以增加eNOS表达,减少BACE1和Aβ的表达,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:运动训练能够改善慢性高血压大鼠的认知功能,其机制可能与其促进脑内eNOS表达,进而减少BACE1表达和Aβ沉积有关。

槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶、血管内皮生长因子、乏氧及免疫功能的影响

目的:研究槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、乏氧及免疫功能的影响。方法:50只大鼠中随机抽取12只作为健康组进行对照,37只大鼠建立肝癌模型。建模过程中意外死亡1只大鼠,剩余36只大鼠建模成功,随机分为模型组、肝动脉化疗栓塞术组以及联合组,每组12只。肝动脉化疗栓塞术组给予肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗;联合组在肝动脉化疗栓塞术组基础上给予模型大鼠27 ml/kg槲芪方灌胃,2次/d,共24周。运用全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功能指标水平,流式细胞仪检测各组大鼠免疫功能指标水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠肝癌细胞凋亡,免疫印迹检测各组大鼠VEGF、iNOS、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:与健康组比较,模型组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均高于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05),模型组与联合组比较差异无统计学意义(P>0.05),与模型组及联合组比较,肝动脉化疗栓塞术组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05)。与健康组比较,模型组细胞凋亡率升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率低于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与肝动脉化疗栓塞术组比较,联合组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均降低(P<0.05)。结论:槲芪方加减可提高肝癌TACE术后大鼠的免疫功能,通过抑制肝癌大鼠乏氧微环境中HIF-1α、iNOS及VEGF水平,改善乏氧微环境,促进肿瘤细胞凋亡。

一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与血管迷走性晕厥发病的关系

目的探讨一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与儿童血管迷走性晕厥发病的关系。方法血管迷走性晕厥患儿14例(A组),其他原因引起晕厥患儿10例(B组),健康志愿者20例(C组)。于倾斜试验(HUT)前和倾斜不同时间测定A组与B组患儿的血浆一氧化氮(NO)水平,同时对3组儿童进行内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多态性检测。结果①A组患儿出现阳性反应时血浆NO水平较平卧时显著升高(76.7±9.6vs 90.0±11.4μmol/L,P<0.05);②A组患儿在症状好转后血浆NO水平较试验前显著降低(82.7±9.2 vs61.5±6.9μmol/L,P<0.01);③B组患儿倾斜时血浆NO水平较平卧时差异无显著性;④A,B两组患儿的血压、心率变化与NO水平无显著相关性;⑤A组患儿eNOS基因G894T突变型基因频率显著高于B组与C组(42.9%vs10%,P<0.05)。结论倾斜体位时血浆NO水平异常升高可能参与了血浆血管迷走性晕厥的发病机制,而其升高水平可能与eNOS基因G894T多态性表达有关。[中国当代儿科杂志,2008,10(4):478-480]

回转模拟失重对静脉内皮细胞血管生成能力的影响及内皮型一氧化氮合成酶的作用

目的 观察回转器模拟失重对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC-C)血管生成能力的影响,并分析探讨可能涉及的关键信号分子内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitricoxide synthetase,eNOS)的作用。方法体外培养HUVEC-C,随机分为回转模拟失重组、1 G静止对照组及回转+抑制剂组,选用内皮型一氧化氮合成酶的特异性抑制剂L-NAME(N-nitro-L-arginine methyl es-ter hydrochloride)。Matrigel胶小管形成实验观察不同处理组HUVEC-C血管生成能力的变化情况。RT-PCR和Western blot分别检测模拟失重前、后HUVEC-C中eNOS mRNA和蛋白的表达变化。结果24 h模拟失重使HUVEC-C的血管生成能力较对照组明显增强(P<0.01),且这种增强效应可以被L-NAME所抑制。模拟失重24 h后,HUVEC-C中eNOS mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05)。结论回转模拟失重可以诱导HUVEC-C血管生成能力增强,其发生机制与eNOS表达上调有关。

参芎葡萄糖注射液对脊髓损伤后一氧化氮合成酶和血管内皮生长因子表达及运动功能恢复的影响

目的:研究参芎葡萄糖注射液对大鼠脊髓损伤(SCI)后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达变化,探讨参芎葡萄糖注射液对急性脊髓损伤后运动功能恢复的影响和可能机制。方法:用改良Allen法制作大鼠T12脊髓损伤模型60只,随机分为对照组(30只)和药物组(30只)。术后第1、3、7、14、21天采用BBB评分和斜板试验对大鼠急性脊髓损伤后的运动功能进行评估,病理学检查观察脊髓损伤后病理改变,免疫组织化学方法和免疫印迹方法观察损伤脊髓iNOS、VEGF的表达变化,并进行比较分析。结果:术后各时相点BBB评分和斜板试验,除第1天外,第3、7、14、21天药物组明显高于对照组;药物组各时相点的病理改变明显较轻,药物组各时相点iNOS阳性表达均明显低于对照组,而VEGF的阳性表达均明显高于对照组,两组差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脊髓损伤后应用参芎葡萄糖注射液可以抑制iNOS的表达,增强VEGF的表达,抑制脊髓损伤区iNOS的表达和上调脊髓损伤区VEGF的表达可能是参芎葡萄糖注射液减轻继发脊髓损伤,促进损伤脊髓功能恢复的机制之一。

内皮素对血管平滑肌细胞中一氧化氮合成酶基因表达的影响

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定出一氧化氮合成酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ的表达（＋３４．８％），增高血管平滑肌细胞中ＮＯＳ酶活性（＋７４％）。结果提示，由内皮素引起的血管平滑肌细胞中ＮＯＳ基因表达和ＮＯＳ活性的增加，可能是高血压中的一个重要的负反馈因素。

低氧对大脑皮层微血管内皮细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的影响

未研究采用反转录多聚酶链反应技术观察了低氧对培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞中诱导型一氧化氮合成酶基因表达的影响。发现经３％Ｏ２（培养液中氧分压为６．７ｋＰａ）作用２４小时后，能够明显诱导内皮细胞中该型合成酶基因的表达，且在复氧１２小时后，仍不能消除上述作用；而１１％Ｏ２（培养液中氧分压为１０．７ｋＰａ）作用相同时间，则不能诱导该酶的表达。结果表明，较严重的低氧条件可以直接诱导一氧化氮合成酶的表达，提示ＮＯ在低氧下大脑皮层微循环的调节中可能起重要作用。

先天性心脏病肺动脉高压患者肺组织内皮型一氧化氮合成酶的表达及肺血管重建

目的 探讨内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)在肺动脉高压的发生、发展及肺血管重建中的作用。方法 经心动超声及多普勒检查 ,确定为单纯室间隔缺损患者 10例为对照组 ;室间隔缺损合并肺动脉高压患者共 3 0例 ,为实验组。体外循环建立前取右肺中叶少许肺组织 ,福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,SP法免疫组织化学染色 ,并进行灰度扫描。以管壁厚度占血管外径的百分比 (WT % )、管壁面积占血管总面积的百分比 (WA % )反映肺血管壁的增厚程度。方差分析进行组间差异比较。结果 先心病患者随肺动脉压力的增高 ,肺组织eNOS表达呈下降趋势 ,而肺小血管形态发生明显改变 ,WT %、WA %明显增高 (P <0 .0 1)。eNOS的表达与肺高压程度、肺血管形态学改变之间存在负相关性 (P <0 .0 1)。结论 先心病肺高压的eNOS含量低下 ,造成内源性一氧化氮(NO)生成减少 ,在肺动脉高压的发生。

子宫内膜异位症异位内膜组织中内皮型一氧化氮合成酶、血管内皮生长因子和CD34的表达

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)异位内膜组织中内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34的表达情况。方法:采用免疫组织化学方法分别测定38例EMs异位内膜与40例正常对照组子宫内膜组织中eNOS、VEGF和CD34的表达,分析异位内膜组织中eNOS、VEGF表达的相关性。结果:EMs异位内膜组织中eNOS、VEGF和CD34的表达较正常内膜组织的表达明显增高;在EMs异位子宫内膜组织中,eNOS和VEGF的表达成正相关(r=0.984,P<0.05)。结论:异位内膜组织的侵袭力增强及血管生成可能与eNOS、VEGF高表达有关。

内皮型一氧化氮合成酶与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛关系的研究进展

蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）是由于多种原因造成血液进人颅内或椎管内蛛网膜下腔所引起的综合征。脑血管痉挛（cerebralvasospasm，cvs）是蛛网膜下腔出血后最严重的并发症之一，具有较高的致死率和致残率^[1-3]，至今尚无特效药物预防或治疗。明确其发病机制.

数字减影血管造影下神经介入溶栓术联合静脉溶栓治疗对缺血性脑卒中患者认知功能及血清一氧化氮、神经导向因子-1、血管内皮生长因子的影响

目的:探讨数字减影血管造影(DSA)下神经介入溶栓术联合静脉溶栓治疗对缺血性脑卒中患者认知功能及血清一氧化氮(NO),神经导向因子-1(Netrin-1),血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:将缺血性脑卒中患者84例纳入研究,根据不同治疗方式将其分为对照组(静脉溶栓治疗41例)和观察组(DSA下神经介入溶栓术联合静脉溶栓治疗43例),观察治疗前、治疗3个月的神经功能缺损(NIHSS)、巴氏量表(BI)、简易智力筛查量表(MMSE)、功能综合评定量表(FCA)评分;采用酶联免疫吸附法测定血清NO、Netrin-1、VEGF水平;采用头颅CT血管成像评估两组血管再通情况;采用脑血管功能检测仪检测血流动力学指标。结果:治疗后,与对照组相比,观察组NIHSS评分降低,BI、MMSE、FCA评分升高(均P<0.05);观察组血清NO、Netrin-1、VEGF水平升高(均P<0.05);观察组血管再通率高于对照组(93.02%>75.61%,P<0.05);观察组各项血流动力学指标明显改善(均P<0.05);观察组TIMI血流≥2级比例高于对照组(93.02%>56.10%),血管急性再闭塞比例低于对照组(2.33%<14.63%),比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:DSA下神经介入溶栓术联合静脉溶栓治疗缺血性脑卒中患者能够显著调节血清NO、Netrin-1、VEGF水平,对于改善神经功能和认知功能效果更好,还能提高血液再通率,有助于恢复血流动力学指标及预后水平。

Caveolin-1与内皮型一氧化氮合成酶在门静脉高压症性血管病变中的表达

目的检测肝硬化门静脉高压症病人的脾血管中小凹蛋白caveolin-1、内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的mRNA及蛋白表达水平的变化,探讨caveolin-1的表达对eNOS的影响。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测27例肝硬化门静脉高压症病人脾静脉组织和20例脾外伤病人正常脾静脉血管中caveolin-1和eNOS的mRNA;Western Blot检测caveolin-1和eNOS的蛋白表达水平变化。结果肝硬化门静脉高压症组脾静脉Caveolin-1 mRNA与对照组脾静脉组织表达分别为(0.73±0.18)、(0.38±0.12),两组比较差异有显著性(p<0.05);肝硬化门静脉高压症组脾静脉eNOS mRNA为(0.23±0.11),显著低于对照组内脾静脉组织eNOS mRNA的表达(0.47±0.15)(p<0.05)。Western Blot检测caveolin-1在肝硬化门静脉高压症组脾静脉中较正常脾静脉中表达明显增强;eNOS在肝硬化门静脉高压症组脾静脉中呈低水平表达,较正常脾静脉中表达明显减少。结论肝硬化门静脉高压症组脾静脉中caveolin-1的过量表达及eNOS表达降低,导致NO合成减少,脾静脉血管阻力持续增加,及caveolin-1致静脉血管病理改变作用,共同作用致脾静脉出现对门静脉高压失代偿改变。

哮喘病人血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素的变化

目的:为探讨支气管哮喘与血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素的关系。方法:测定了轻度发作的支气管哮喘病人31例及对照组30例的全血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素。结果:哮喘组与对照组的血管内皮素分别为(44.45±25.76)pg/ml和(33.43±22.88)pg/ml(P<0.05),血一氧化氮两组分别为(37.65±17.20)μmol/ml和(42.81±19.42)μmol/ml(P>0.05),血一氧化氮合成酶活性分别为22.81±5.53和22.14±4.53(P>0.05)。结论:研究观察到血管内皮素可能在支气管哮喘气道炎症之中起重要病理生理作用,但未观察到一氧化氮及其合成酶在轻度发作的支气管哮喘病人中的变化。

内皮细胞型一氧化氮合成酶基因表达与血管紧张素转换酶抑制剂

一氧化氮合成酶-Ⅲ单体位于血管内皮细胞,与多数内皮细胞一氧化氮的产生密切相关,而血管紧张素转换酶抑制剂通过上调一氧化氮合成酶基因表达及增加一氧化氮活性而改善内皮功能。本文主要综述血管紧张素转换酶抑制剂与一氧化氮合成酶基因表达的关系。

一氧化氮合成酶及其抑制剂在碱烧伤诱导的角膜新生血管中的作用

背景 研究发现一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）参与新生血管的发生、发展,但其在角膜新生血管（CNV）发生过程中的具体作用机制是眼科界值得关注的问题. 目的 研究NOS及其抑制剂NW-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）在实验性CNV发生过程中的作用,并通过体外研究验证NOS及L-NAME对人血管内皮细胞（RECs）血管管腔形成的作用,为眼科新生血管性疾病的防治提供实验依据.方法7～8周龄雄性BALB/c小鼠36只用NaOH滤纸贴附角膜中央的方法构建小鼠左眼CNV模型,然后用随机数字表法将小鼠分为L-NAME干预组和PBS对照组,L-NAME干预组小鼠于造模前1周开始腹腔内注射10 g/LL-NAME 0.5 ml,每周3次,持续3周,而PBS对照组小鼠以同样的方法注射PBS.分别于造模后2、4、7、14 d在裂隙灯显微镜下观察CNV形成情况,用全角膜铺片法检测CD31在CNV中的表达以鉴定CNV面积；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测2个组小鼠角膜组织中NOSmRNA的表达；采用Western blot法检测人RECs中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达；利用体外实验,观察人RECs的管腔形成能力.采用独立样本t检验对2个组小鼠上述各检测指标的结果进行差异比较,分类资料采用X2检验. 结果裂隙灯显微镜下可见小鼠造模后2周CNV生长达高峰,而L-NAME干预组小鼠CNV明显少于PBS对照组.造模后2、4、7 d,L-NAME干预组小鼠角膜中NOS mRNA的相对表达量均明显低于PBS对照组,差异均有统计学意义（t=19.481、22.059、10.961,P＜0.01）.全角膜铺片法检测显示,L-NAME干预组被CD31标记的RECs面积与总面积的比值为0.59 ±0.01,明显小于PBS对照组的0.78±0.10,差异有统计学意义（t=3.078,P＜0.05）.Western blot法检测表明,造模0、2、4、7d,L-NAME干预组人RECs中VEGF蛋白的相对表达量均明显降低,造模后4d、7d两组比较差异均有统计学意义（-7.696、17.953,P＜0.01）.管腔形成实验中,L-NAME干预组血管网形成数目为（46.33±1.86）个,明显少于PBS对照组的（64.00±4.51）个,差异有统计学意义（t=3.623,P＜0.05）. 结论 NOS参与CNV的形成和发展,L-NAME通过下调VEGF的表达量抑制碱烧伤诱导的CNV以及人RECs血管网的形成,进而阻断NOS活性,为治疗CNV性眼病的研究提供实验依据.

一氧化氮、一氧化氮合成酶在免疫性血管炎致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)在免疫性血管炎致动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法4周龄雄性大耳兔24只分为3组。A组:基础饲料喂养对照组8只;B组:胆固醇喂饲组8只;C组:10%牛血清清蛋白注射并喂饲胆固醇饲料8只。实验满4周,A、B、C3组分别取心脏做主动脉组织病理学检查,主动脉血管弹力纤维染色及NOS组织化学染色,测血清NO和血浆血管内皮素(ET)含量。结果B组出现轻度AS,内弹力膜不完整;C组出现严重AS,内弹力膜断裂。3组NOS均呈阳性着色反应,C组阳性着色区域较A、B组明显扩大。C组与B组比较,其脂质斑块面积(PA)增大、小动脉粥样硬化发生率(IA)增高、NOS平均光密度(A)增高,血浆ET含量升高,血清NO含量降低,均有显著差异(P<0.01)。结论免疫性血管炎为AS发病的危险因素,NO/ET平衡失调,NOS活性异常可能参与免疫性血管炎致AS形成的病理过程。

内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的表达

用免疫组织化学和原位杂交等方法观察了内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的合成和表达。结果是，在动脉粥样硬化斑块内增生的平滑肌细胞和巨噬细胞中，内皮素合成较正常者增多，而一氧化氨合成酶的合成却明显减少；内皮素ｍＲＮＡ转录显著增加，而一氧化氮合成酶ｍＲＮＡ转录明显减少或消失。提示在动脉血管平滑肌细胞中，二者的平衡失调可能参与了动脉粥样硬化的发生和发展过程。

黄芪丹参复方提取物对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘血管内皮细胞及滋养细胞血管内皮生长因子mRNA表达影响

目的研究黄芪丹参复方提取物提高胎盘供血的分子机制,为临床有效防治胎盘供血不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离中药黄芪、丹参复方成分,运用一氧化氮合酶(NOS)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)建立一氧化氮合成阻滞大鼠模型,核酸原位杂交技术检测妊娠12日胎盘滋养细胞、始基微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达变化。结果一氧化氮合成阻滞模型VEGFmRNA表达较空白组、中药治疗组及硝酸甘油治疗对照组均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分可能对妊娠早期胎盘滋养细胞及血管内皮细胞VEGFmRNA表达具有促进作用,从而有利于胎盘血管网络形成及滋养细胞侵入及母胎循环构建,提高胎盘血液供应,达到防治妊娠高血压综合征等胎盘供血不足疾病的目的。

基因治疗原发性高血压的新途径:内皮型一氧化氮合成酶CDNA腺病毒载体在人胎肾293细胞的表达

研究内皮型一氧化氮合成酶（endothelialnitric oxide synthase,eNOS)CDNA 腺病毒载体 PadRSVeNOSCDNA 导入在人胎肾 293细胞 ( )中的表达。方法:大量制备及纯化质粒 eNOSCDNA ,将纯化eNOSCDNA 载体通过脂质体转染 293细胞48h 后,应用化学比色法测定293细胞提取物NOS 活性。结果:被转染 293细胞 NOS活性显著提高于未转染293细胞 NOS 活性犤( 0.62±0.03),(0.093±0.01)kU /L,P <0.001犦。结论:PA dRSVeNOSCDNA 导入人胎肾 293细胞是一种能使 NOS 活性显著升高的方法,为基因治疗原发性高血压及肾脏血管性疾病研究提供一条新的途径。

高糖对内皮型一氧化氮合成酶的表达及功能的影响

目的 :研究高糖对内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达及其功能的影响。方法 :将分离的小牛主动脉内皮细胞在含有不同浓度右旋葡萄糖的DMEM中培养 2 4小时。内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达分别以RT -PCR和WesternBlotting方法进行分析 ,其产物一氧化氮以高效液相层析法 (HPLC)测定。结果 :与低糖(5 6mM)相比高糖 (12 5mM ,2 5mM)可以刺激内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达 ,并伴有一氧化氮的浓度降低。结论 :高糖可致内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达增加 ,并可能导致其功能障碍。