血管内皮生长因子及其受体抑制剂相关性高血压病理生理机制及临床诊疗的研究进展

肿瘤治疗相关心血管毒性(CTR-CVT)逐渐成为影响肿瘤幸存者预后的关键因素。以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点研发的VEGF及其受体抑制剂(VEGFIs)作为新型抗肿瘤药物现已广泛应用于临床,可延长肿瘤患者的生存周期,改善患者预后,但VEGFIs诱导的高血压作为其最常见的CTR-CVT,可能会限制和影响其应用并引起严重心血管疾病(CVD)。对应用VEGFIs治疗的肿瘤患者应密切监测血压,早期评估,优化管理,使患者获得最佳的抗肿瘤疗效和最低的CTRCVT风险。现就VEGFIs相关性高血压的临床表现、发病机制、诊断和治疗策略进行综述,旨在为临床医生更好地管理和应对VEGFIs相关性高血压提供参考。

血管内皮生长抑制因子在糖尿病视网膜病变患者血清及玻璃体中的变化

背景糖尿病视网膜病变（DR）患者因视网膜缺血导致新生血管的形成，从而严重威胁患者视力。血管内皮生长抑制因子（VEGI／TLlA）作为一种血管生成抑制剂，具有强大的抗血管生成作用。目的检测VEGI／TLlA及其相关因子在DR患者血清及玻璃体中的变化。方法采用非随机对照研究方法，收集2012年11月至2013年3月在天津医科大学总医院眼科确诊为DR的患者55例，按照中国眼底病学组制定的DR分期标准分为非增生性糖尿病视网膜病变（NPDR）组20例，PDR组35例；另纳入无全身疾病的白内障患者11例作为正常对照组，取单纯糖尿病（DM）患者15例作为DM组，各组患者人口基线特征相匹配，但PDR组和DM组患者的病程值及血糖水平值明显高于DR组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。收集4个组所有受试者静脉血清以备ELISA检测。另收集2012年11月至2013年3月在天津医科大学总医院眼科确诊为PDR的患者23例25眼作为PDR组，健康成人尸体供眼7例7眼作为对照组，并根据PDR组患者的治疗方法分为视网膜光凝组、手术治疗组和视网膜光凝＋手术组，在手术过程中收集玻璃体待检。采用ELISA法检测血清及玻璃体中肿瘤坏死因子样配体1／血管内皮生长抑制因子251（TLlA／VEGI251）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和核因子-KBp65（NF—KBp65）的质量浓度。应用单因素方差分析和独立样本t检验比较并分析各组血清及玻璃体中TLlA／VEGI251、VEGF、TNF-α、IL-1β和NF—KBp65的差异，应用Pearson积矩线性相关分析法分析TLlA／VEGI251与VEGF、TNF-α、IL-1β和NF—KBp65的相关性。结果DM组、NPDR组、PDR组患者血清中TLlA／VEGI251质量浓度均明显高于正常对照组，4个组间总体差异有统计学意义（F=27．431，P=0．009）；PDR组患者血清中TLlA／VEGI251质量浓度明显高于DM组和NPDR组（P〈0．05）；PDR组患者血清中VEGF、TNF—α、IL-1β和NF—KBp65质量浓度均明显高于DM组、NPDR组和正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05），而正常对照组、DM组和NPDR组之间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。患者血清中TLlA／VEGI251质量浓度与VEGF、TNF-α、IL-1β和NF—KBp65质量浓度间均呈明显正相关（r=0．951、0．951、0．851、0．944，均P〈0．01）。PDR组玻璃体中TLlA／VEGI251、VEGF、TNF-α、IL-1β质量浓度均明显高于正常对照组（P=0．024、0．001、0．000、0．037），但两组间玻璃体中NF—KBp65浓度比较差异无统计学意义（P=0．073）。视网膜光凝组及手术组患者玻璃体中TLlA／VEGI251质量浓度低于对照组（P〈0．05），玻璃体中TLlA／VEGI251质量浓度与VEGF和TNF-α质量浓度间均呈明显正相关（r=0．675、0．950，P〈0．01），与玻璃体中IL-1β和NF—KBp65质量浓度均无明显相关性（r=0．233、0．318，P〉0．05）。结论VEGI参与DR的发病，并通过与VEGF、TNF-α、IL-1β、NF—KB等因子的相互作用共同影响疾病的进展，为DR的进一步研究提供了新的思路。

可溶性血管内皮细胞生长抑制因子基因的克隆与表达

目的 :对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子 (vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达 ,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法 :将可溶性人 VEGI基因克隆入载体 p U C19后测序 ;再将正确的 VEGI基因亚克隆入表达载体 p PROEXHTb,IPTG诱导表达 ;初步纯化表达产物 ,检测对新生牛主动脉内皮细胞增殖抑制活性。 结果 :可溶性人 VEGI可以直接抑制新生牛主动脉内皮细胞的增殖。结论 :VEGI是一种新的内皮细胞生长抑制因子 ,通过抑制新生血管形成可用于肿瘤治疗。

内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接,插入到pCAl3腺病毒载体中,用脂质体介导包装出重组腺病毒,PCR法对重组腺病毒进行鉴定。结果:构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体,融合基因包括IL_3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因,总长度约1114bp,经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确,可包装出携带融合基因的重组腺病毒,用TCID_(50)法测定粗制重组腺病毒滴度为2×10^(11) TCID_(50)/L。结论:成功构建了hENDO-sVEGI融合基因,连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响,IL_3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外,完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定,为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对荷胃癌裸鼠的治疗

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次注射24h后处死动物,检测肿瘤体积、抑瘤率、目的基因的表达、增生细胞核抗原指数(PCNA LI)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD)。结果:注射AdCA13-hENDO-VEGI_(151)的治疗组肿瘤体积为328±156mm^3,注射AdLacZ的对照组肿瘤体积为2356±1 140 mm^3,差异显著(F=12.42,P=0.0125),抑瘤率为86.1％;重组腺病毒携带的目的基因均能在荷胃癌裸鼠肿瘤组织中表达;治疗组PCNA LI为 0.13± 0.09％,对照组为 1.40 ± 0.53％,差异显著(F=22.30,P=0.0033);治疗组AI为5.09 ± 0.25％,对照组AI为0.61±0.67％,差异显著(F=155.13,P=0.0 001);治疗组MVD为0.06±0.03％,对照组MVD为 1.09 ± 0.76％,差异明显(F=7.38,P=0.0348)。结论:重组腺病毒携带的融合基因能在荷胃癌裸鼠体内表达出有生物学活性的融合蛋白,并表现出一定的抑瘤效果。

血管内皮细胞生长抑制因子VEGI_(151)重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用

目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用。方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,WesternBlot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测AdVEGI151对ECV304细胞的抑制作用,缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗。结果VEGI151重组腺病毒在病变细胞内能成功表达相对分子质量为17300的蛋白,体外实验表明,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长,体内实验表明,重组腺病毒对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用。结论以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞抑制因子VEGI151基因治疗角膜新生血管效果显著,为角膜新生血管的基因治疗提供了新的思路。

血管内皮生长因子抑制剂治疗早产儿视网膜病变有效性和安全性的Meta分析

目的:系统评价血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂治疗早产儿视网膜病变(ROP)的有效性和安全性,为临床提供循证参考。方法:计算机检索Pub Med、EMBase、Cochrane图书馆、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、中国生物医学文献数据库和万方数据库,收集VEGF抑制剂(试验组)对比激光光凝治疗(对照组)治疗ROP的随机对照试验(RCT),对符合标准的研究进行资料提取,并用Cochrane系统评价员手册5.1.0进行质量评价后,采用Rev Man 5.1统计软件进行Meta分析。结果:共纳入5项RCT,合计381例患儿,754只眼睛。Meta分析结果显示,试验组患儿ROP复发率[RR=0.23,95%CI(0.13,0.42),P<0.001]、视网膜脱离率[RR=0.27,95%CI(0.14,0.51),P<0.001]、附加病变消退时间[MD=-1.31,95%CI(-1.47,-1.14),P<0.001]均显著低于对照组,差异均有统计学意义;两组患儿屈光不正、不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:玻璃体腔注射VEGF抑制剂治疗ROP疗效优于激光光凝治疗,但其最佳给药剂量、安全性尚待大样本、设计良好的RCT进一步验证。

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对同型半胱氨酸致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用

目的探讨内皮抑素（ENDO）-血管内皮细胞抑制因子（VEGI）重组腺病毒对同型半胱氨酸（Hcy）致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用。方法应用内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子融合蛋白重组腺病毒（Ad-hENDOVEGI151）转染Hcy损伤的人血管内皮细胞ECV304,用免疫印迹法检测受染细胞融合蛋白的表达,用自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量,用台盼蓝染色法计算细胞存活率,用ELISA检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达。结果制备的重组腺病毒具有较高的转基因效率,Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒能够在ECV304细胞中表达41 kDa大小的融合蛋白,Hcy（0.1~1.0 mmol/L）呈浓度依赖性地增加细胞LDH漏出量和降低细胞存活率,重组腺病毒能够有效地拮抗Hcy对人血管内皮细胞的损伤作用（P〈0.05）。结论内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对Hcy致人血管内皮细胞损伤有拮抗作用,为治疗高同型半胱氨酸血症等疾病提供新的思路。

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。 方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。 结果 :重组人可溶性 VEGI可以直接抑制 ECV30 4、BAEC的增殖 ,强烈抑制 S180肉瘤生长并延长 S180腹水瘤小鼠的寿命。结论 :重组人可溶性 VEGI可通过抑制新生血管形成用于肿瘤治疗。

重组人血管内皮细胞抑制因子在大鼠体内的组织分布及药代动力学

目的:研究重组人血管内皮细胞抑制因子(rhEndostatin)静脉注射后在Wistar大鼠体内的药代动力学过程,为其临床应用提供药代动力学数据。方法:应用放射性核素示踪技术结合三氯醋酸沉淀法(TCA沉淀法),对125I-rhEndostatin静脉注射大鼠后不同时间、不同组织内的核素分布量进行测定,并将血药浓度-时间数据经计算机拟合,计算出相应参数。结果:125I-rhEndostatin静脉注射大鼠后,药物的分布半衰期平均为(0.154±0.024)h,消除半衰期为(4.03±0.58)h。血药浓度-时间曲线下面积(AUC)与剂量呈正相关,相关系数为0.9940。血浆清除率(CLs)均值为(0.165±0.024)L/h,高、中、低剂量CLs基本相同。该药在大鼠肝、肺、脾、胃、甲状腺中有较高聚集,主要经肾脏排泄。结论:125I-rhEndostatin在大鼠体内的药代动学过程基本符合线性药动学特征,血药浓度-时间曲线符合二房室模型。

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000大小的融合蛋白,对血管内皮细胞增殖有明显的特异性抑制作用,对HepG2和L929细胞无抑制作用(F=13112.13,P=0.0001)。体内实验表明Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒表达的融合蛋白可以显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成;与AdLacZ对照组相比,Ad-hENDO-VEGI151对兔炎症性角膜新生血管的抑制明显(F=1413.11P=0.0001),免疫组化结果显示,融合蛋白主要在角膜上皮层表达;治疗荷肝癌裸鼠,注射Ad-hENDO-VEGI151的肿瘤体积(487.7±241.2mm3)与AdLacZ对照组(4075.9±1849.9mm3)差异显著(F=14.80P=0.0085),抑瘤率达到88.03%,免疫组化结果显示,胞膜染色阳性,Ad-hENDO-VEGI151组肿瘤的微血管密度30.75±3.31%与AdLacZ组50.25±8.65%差异明显F=17.72P=0.0056抑制率为39%。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

Y111是维持血管内皮细胞生长抑制因子生物活性的关键氨基酸

目的血管内皮细胞生长抑制因子(Vascu lar endothe-lial cell growth inh ib itor,VEG I)是近年来发现的一类TNF家族新成员,具有抑制内皮细胞增殖与新生血管生成的作用。但目前其结构功能关系研究尚为空白,该文研究VEG I空间结构上重要残基的作用极其对生物活性的影响。方法采用定点突变技术突变了四个关键氨基酸E45R,G47A,Y111F,Y111T,构建了表达载体并在大肠肝菌中表达及纯化,采用人脐静脉内皮细胞增殖和鸡胚尿囊膜血管生成实验研究了四个突变体的活性。结果E45R突变体的活性显著下降,G47A突变体的活性略低于野生型VEG I,Y111F,Y111T突变体的活性比野生型VEGI下降10倍以上。结论VEGI的第111位氨基酸Y是发挥其功能的关键氨基酸,可能与受体形成直接结合,且氨基酸Y上的苯环与酚羟基均对其活性的发挥具重要作用;第45位氨基酸E对其活性的发挥也具重要作用,而第47氨基酸对其活性的发挥可能不具重要作用。

血管内皮生长因子抑制剂治疗银屑病的研究进展

银屑病是一种常见的炎症性免疫相关性皮肤病,血管生成是银屑病致病的一个关键因素。血管内皮生长因子(VEGF)在银屑病患者的皮损和血浆中显著升高,许多病例报告表明VEGF抑制剂治疗银屑病有效。现有的VEGF抑制剂主要有3大类,包括抗VEGF单克隆抗体、VEGF受体拮抗剂和酪氨酸激酶抑制剂。本文综述了目前VEGF抑制剂治疗银屑病的临床应用现状及前景展望。

血管内皮生长因子受体抑制剂SU5416对小鼠肺间质纤维化的影响

目的 探讨血管内皮生长因子受体抑制剂SU5416在博来霉素所致小鼠肺间质纤维化炎症反应中的作用。方法 48只雄性C57BL／6小鼠随机分为对照组、模型组、SU5416早期处理组和SU5416晚期处理组。模型组和SU5416处理组予以博来霉素溶液（10mg／kg）气管内注射建立小鼠肺纤维化模型，对照组予以等体积生理盐水注射。SU5416处理组在造模后分两个阶段（早期：第1～14d；晚期：15～28d）予以SU5416溶液（50mg／kg）腹腔内注射，每周2次；对照组和模型组则予以等体积生理盐水注射。各组随机于造模后第14d和28d分两批处死，检测小鼠肺组织羟脯氨酸（HYP）、支气管肺泡灌洗液（BALF）中自细胞和乳酸脱氢酶（LDH）的变化。结果 与对照组同时间点比较，模型14d组肺组织HYP、BALF中自细胞数和LDH含量明显增高（P均〈0．01）；28d组肺组织HYP含量亦显著升高（P〈0．01），BALF中自细胞数和LDH含量无明显变化（P均〉0．05）。SU5416早期干预后增高的LDH、HYP和白细胞受到明显抑制（P均〈0．01）；晚期干预则没有明显作用。结论 早期予以SU5416可以抑制早期炎症反应，减轻肺间质纤维化。

血管内皮生长因子抑制剂——贝伐单抗

贝伐单抗(bevacizumab)是一种基因工程的单克隆抗体药物,通过抑制能够刺激新血管形成的血管内皮生长因子(VEGF),使肿瘤组织无法获得所需的血液、氧和其他营养而最终"饿死",达到抗癌的目的.

玻璃体内注射血管内皮生长因子抑制剂并发症的研究进展

玻璃体内注射血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂广泛用于年龄相关性黄斑变性(AMD)、中心性渗出性脉络膜视网膜病变及病理性近视引起的脉络膜新生血管(CNV)的治疗,也用于增生型糖尿病视网膜病变(PDR)、视网膜血管阻塞、早产儿视网膜病变及新生血管性青光眼等的治疗,已取得一定的疗效,但玻璃体内注射VEGF抑制剂也出现了很多并发症。就玻璃体内注射VEGF抑制剂对眼正常结构和生理功能的影响以及引起的眼压升高、视网膜色素上皮撕裂(RRPE)、视网膜脱离(RD)、眼内炎、注射相关损伤、全身不良反应等并发症进行综述。

多西他赛单药或联合血管内皮生长因子抑制剂治疗去势抵抗性前列腺癌疗效和安全性的Meta分析

目的系统评价多西他赛联合血管内皮生长因子抑制剂治疗去势抵抗性前列腺癌的疗效和安全性。方法计算机检索EMbase、PubMed、Cochran,查找多西他赛单独与联合血管内皮生长因子抑制剂(inhibition of VEGF Agents)比较治疗前列腺癌的随机对照试验(RCT),检索时限均从建库至2014年9月1日。按照纳入/排除标准对纳入研究进行资料提取、方法学质量评价后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析,并采用Jadad评分进行文献质量评估。结果共纳入4个RCT,2 386例患者。Meta分析结果显示,多西他赛联合血管内皮生长因子抑制剂治疗组与多西他赛单药组比较,前列腺特异性抗原(PSA)反应率[RR=0.94,95%CI(0.77,1.15),P=0.56],客观反应率[RR=0.91,95%CI(0.46,1.80),P=0.79],在中位总生存时间方面[HR=0.94,95%CI(0.85,1.04),P=0.23],和无疾病进展时间[HR=1.13,95%CI(0.53,2.38),P=0.76],两组差异无统计学意义;但治疗相关病死率[RR=2.70,95%CI(1.51,4.85),P=0.0009]联合组高于单药组,血栓发生率[RR=0.55,95%CI(0.39,0.78),P=0.0008],联合组低于单药组。结论目前有限证据显示多西他赛联合血管内皮生长因子抑制剂用于治疗去势抵抗性前列腺癌患者方面,并不能提高患者中位总生存和无疾病进展时间,且可能增加治疗相关病死率。上述结论尚需更多高质量大样本RCT加以验证。

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗新生血管形成活性研究

血管内皮细胞生长抑制因子 (VascularEndothelialGrowthInhibitor ,VEGI)是从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)cDNA文库筛选到的一个TNF超家族新成员。为研究重组可溶性人VEGI对新生血管形成抑制活性 ,检测了重组可溶性人VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV30 4)增殖抑制活性以及对兔角膜诱生血管、鸡胚尿囊膜 (CAM )血管的抑制活性。表明可溶性人VEGI可以直接抑制ECV30 4内皮细胞的增殖 ,抑制兔角膜诱生血管、CAM血管形成。VEGI是一种新的血管内皮细胞生长抑制因子 ,强烈抑制新生血管形成 ,有望应用于肿瘤的治疗。

血管内皮生长因子受体抑制剂阿柏西普治疗晚期结直肠癌的研究进展

晚期结直肠癌已进入分子靶向治疗的新时代,阿柏西普作为一种可溶性血管内皮生长因子受体抑制剂,能有效地抑制肿瘤新生血管形成、降低血管通透性、具有一定的抗肿瘤活性。目前阿柏西普已在晚期结直肠癌患者中进行了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的临床研究,结果初步显示其具有良好的耐受性和一定程度的抗肿瘤活性。该文主要对阿柏西普治疗晚期结直肠癌的各期临床研究进行总结并展望其抗血管生成治疗转移性结直肠癌的应用前景。

重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞炎症因子的异常分泌

构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作用以及阻断其活性对内皮细胞分泌功能的影响。结果发现,高糖能诱导ECV304细胞IκBα的降解和核因子κB的激活,同时上调炎症因子细胞间粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和内皮素1 mRNA表达水平,而感染AdIκBαM的ECV304/IκBαM细胞则能拮抗高糖所致的IκBα降解与核因子κB激活,同时下调这些炎症因子的异常分泌水平。结果提示,核因子κB的激活在高糖所致的内皮细胞分泌功能改变中起中轴作用,抑制核因子κB的活化,有助于改善血管内皮细胞功能。