祛腐生肌外治法对糖尿病溃疡大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其相关信号通路影响的meta分析和系统评价

目的:系统评价中药外用祛腐生肌法对糖尿足溃疡(DFU)大鼠模型血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其相关信号通路的影响并进行Meta分析。方法:在中国知网、万方、PubMed等数据库进行文献检索,检索时间自建库至2022年4月。根据SYRCLE的偏倚风险工具对每一篇纳入文献的研究质量进行评价。使用Review Manager 5.4.1软件根据Cochrane系统评价方法进行Meta分析。结果:包括508只大鼠的19项研究,纳入研究的质量分数都在3~5分。Meta分析结果显示,无论是促进糖尿病溃疡大鼠创面组织中VEGF蛋白表达、增加创面组织中VEGF mRNA水平还是提高大鼠血清中VEFG因子含量,与对照组相比,祛腐生肌治疗组都具有明显的优势[SMD=1.39,95%CI(0.67,2.10),P=0.0002;SMD=5.53,95%CI(0.58,10.11),P=0.03;SMD=1.91,95%CI(0.73,3.09),P=0.002]。亚组分析显示,当对照组为常规换药组时,中药外用促进创面组织中VEGF蛋白表达的优势明显[SMD=2.02,95%CI(1.27,2.78),P=0.0002;SMD=2.06,95%CI(0.16,3.96),P=0.03],当对照组为生长因子换药组时,尚不能证明二者在促进创面组织中VEGF蛋白表达方面有差异[SMD=0.04,95%CI(-0.52,0.61),P=0.88]。同时研究表明,中药外用可能是通过调控HIF-1/VEGF/VEGFR-2信号通路、PI3K/AKT信号通路、Wnt/β-catenin信号通路中的上下游分子的表达,从而影响尿病溃疡大鼠创面组织及血清中VEGF的表达水平,这些分子包括HIF-1α[SMD=2.35,95%CI(1.11,3.59),P=0.0002]、VEGFR-2[SMD=4.52,95%CI(0.63,8.42),P=0.02]、PI3K[SMD=-0.94,95%CI(-1.08,-0.80),P=0.00001]、AKT[SMD=0.28,95%CI(0.22,0.34),P<0.00001]、β-catenin[SMD=0.23,95%CI(0.19,0.27),P<0.00001]、GS3K-β[SMD=0.44,95%CI(0.06,0.82),P=0.02]、Cym-c[SMD=-0.47,95%CI(-0.72,-0.22),P=0.0002]。结论:中药外用祛腐生肌法治疗DFU大鼠创面与其促进VEGF在创面和血清中的表达相关,其机理可能与影响HIF-1α/VEGF/VEGFR-2、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT等信号通路的上下游分子有关,但仍需更多的大样本、高治疗、设计更合理的实验来进一步验证。

VEGF/Akt信号通路在骨折大鼠愈合中作用机制及对炎症因子IL-6、TNF-α的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路在骨折大鼠愈合中的作用机制及对炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法 选取健康清洁级SD雄性大鼠30只,按随机原则分为假手术组、模型组与对照组,每组10只。其中假手术组行假手术,模型组与对照组建立大鼠股骨骨折模型,对照组通过尾静脉注射经慢病毒转染高表达VEGF的骨髓间充质干细胞处理。4 w后通过四点断裂实验分析愈合后股骨的力学参数,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中成骨标记物骨源性碱性磷酸酶(BALP)、IL-6与TNF-α水平,通过苏木素-伊红(HE)染色观察股骨标本病理学变化,通过RT-聚合酶链反应(PCR)检测VEGF与p-Akt水平,通过Western印迹检测骨痂组织中p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、IL-6、TNF-α蛋白水平。结果 对照组骨折部位承受的最大力及韧性均显著高于模型组(P<0.05)。对照组外周血中BALP水平显著高于模型组,IL-6与TNF-α水平显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨折部位能观察到广泛的新骨生成,且骨组织中VEGF、p-Akt mRNA水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,对照组骨痂组织中eNOS与p-Akt蛋白表达显著上调,IL-6与TNF-α蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论 激活VEGF/Akt信号通路能促进骨折大鼠的愈合,且能够抑制炎症反应。

抑制糖尿病大鼠PI3K/Akt信号通路对其氧化应激水平及血管内皮生长因子的影响

目的探讨抑制糖尿病大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对其氧化应激水平及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法36只雄性SPF级SD大鼠按照随机数字表法平分为3组:正常组、模型组与LY294002组。模型组与LY294002组均建立糖尿病大鼠模型,然后分别给予5%二甲基亚砜与溶于5%二甲基亚砜中的LY2940023 mg/kg治疗,正常组不进行建模,在相同时间内给予5%二甲基亚砜溶液治疗。3组连续给药7 d。记录大鼠摄食量、饮水量、尿量、体重、血糖以及超氧化物歧化酶、丙二醛含量、VEGF表达变化情况。结果所有大鼠都未出现死亡情况。模型组与LY294002组大鼠的摄食量、饮水量、尿量均高于正常组,体重低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05),LY294002组大鼠的摄食量、饮水量、尿量均低于模型组,体重高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠的血糖高于正常组,LY294002组大鼠血糖低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与LY294002组大鼠的血清超氧化物歧化酶含量低于正常组,丙二醛含量和肝脏VEGF、PI3K蛋白相对表达水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);LY294002组大鼠的血清超氧化物歧化酶含量高于模型组,丙二醛含量和肝脏VEGF、PI3K蛋白相对表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制PI3K/Akt信号通路的激活可改善糖尿病大鼠氧化应激反应水平,并抑制VEGF的表达,从而可改善大鼠的糖尿病症状与降低血糖水平。

原花青素通过调节PI3K/Akt/VEGF信号通路对牙龈炎大鼠的作用机制研究

目的探讨原花青素通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对牙龈炎大鼠的潜在作用机制。方法通过丝线缝扎大鼠上颌双侧第1磨牙牙颈部+涂抹麦芽糖+喂食20%蔗糖溶液及软食的方法构建牙龈炎大鼠模型,将造模成功的48只大鼠随机分为模型组、原花青素组(160 mg/kg)、740Y-P组(PI3K/Akt信号通路激活剂,0.02mg/kg)、原花青素+740Y-P组(原花青素160 mg/kg+740Y-P 0.02 mg/kg),每组12只;另取12只大鼠作为对照组。各药物组大鼠灌胃或/和腹腔注射相应药液,每天1次,连续7 d。末次给药结束24 h后,测定大鼠牙龈指数,检测其龈沟液中白细胞介素18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、碱性磷酸酶(ALP)水平以及牙龈组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧(ROS)水平,观察大鼠牙龈组织的病理形态并检测其牙龈组织中PI3K/Akt/VEGF信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠牙龈组织存在局部组织扩张充血、新生毛细血管出现、胶原纤维变性丢失且排列紊乱、大量炎症细胞浸润龈沟壁等病理改变;其牙龈指数,龈沟液中IL-18、iNOS、ALP水平,牙龈组织中ROS水平,PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平以及VEGF蛋白的表达水平均显著升高,牙龈组织中SOD、CAT水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,原花青素组大鼠牙龈组织病理损伤减轻,上述各定量指标均显著改善(P<0.05),且740Y-P能逆转原花青素对各指标的改善作用(P<0.05)。结论原花青素可能通过抑制PI3K/Akt/VEGF信号通路来缓解牙龈炎大鼠的牙龈组织损伤,改善牙龈炎症和氧化应激。

芪归药对基于VEGF/PI3K/Akt信号通路干预糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化的分子机制

目的探讨黄芪配伍当归药对通过VEGF/PI3K/Akt通路干预糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)对大鼠肾小管间质纤维化水平的影响,探究黄芪当归药对对于DN的作用分子机制及疗效的影响。方法采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)30 mg/kg腹腔注射进行DN大鼠模型的构建,分为模型组、芪归药对组(黄芪∶当归=1∶1、5.40 g·kg^(-1)·d^(-1))、达格列净组(0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组各5只,以同周龄SD大鼠5只作为正常对照组。此外,给药期间分别测定各组大鼠体质量、尿量、尿糖、尿酮、空腹血糖INS,给药前和最后一次给药后进行HbA1c检查。8周后处死,各组均选择3只分离肾脏,按病理组织学资料制作肾组织石蜡切片,用于进行肾组织病理学、超微结构形态学的观察,RT-PCR法检测DN大鼠肾脏组织VEGF、PI3K及Akt的miRNA表达量,免疫组化法检测VEGF、PI3K及Akt的蛋白表达情况,以探究芪归药干预VEGF/PI3K/Akt通路对DN大鼠肾小管间质纤维化进程的影响。结果模型组的肌酐、肾脏纤维化的比例、24 h尿蛋白定量、VEGF/PI3K/Akt通路的miRNA蛋白的相对表达水平比对照组高(P<0.05)。芪归药对组的肌酐、空腹血糖、糖化血红蛋白数值、肾组织纤维化面积比例、尿素氮、24 h尿蛋白定量低于DN组(P<0.05),且芪归药对组糖化血红蛋白数值、空腹血糖、肌酐、尿素氮及VEGF/PI3K/Akt通路蛋白表达量与达格列净组基本相同。结论芪归药对通过调节VEGF/PI3K/Akt通路相关靶点miRNA蛋白的表达量起到抗肾脏组织纤维化及抗炎症的作用,以达到延缓DN病程进展的目的。

姜黄素通过AKT/HIF-1α/VEGF信号通路在体外抑制脉络膜新生血管的机制

目的:探讨姜黄素在体外抑制脉络膜新生血管(CNV)生成的作用及机制。方法:氯化钴(CoCl_(2))诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞建立化学性缺氧模型,采用CCK-8法检测姜黄素对CoCl_(2)诱导的ARPE-19细胞活性的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测姜黄素对CoCl_(2)诱导的ARPE-19缺氧模型细胞内AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达的影响。采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验及Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。结果:100μmol/L CoCl_(2)可成功建立ARPE-19细胞化学缺氧模型。CoCl_(2)在100μmol/L浓度下促进ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。姜黄素在浓度为100μmol/L时可减少ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。ARPE-19细胞姜黄素低(6.25μmol/L)、中(25μmol/L)、高剂量组(100μmol/L)条件培养液可显著抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显著抑制HUVEC细胞垂直迁移和细胞侵袭。ARPE-19细胞姜黄素中、高剂量组条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。结论:姜黄素在100μmol/L对CoCl_(2)诱导ARPE-19细胞缺氧有保护作用。姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。

SIRT1基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT信号通路的影响

目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因表达情况;HE染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝关节关节软骨退变,免疫组化染色检测膝关节软骨细胞中SIRT1、VEGF和AKT蛋白水平。结果 B组SIRT1 m RNA表达量为2.24417±1.316569,明显低于A组(P<0.01)。HE染色和番红O-固绿双染色结果显示,B组膝关节关节软骨退变明显,Mankin评分分值为9.8333±1.94079分,明显高于A组(P<0.05),B组SIRT1、VEGF和AKT免疫组化染色积分分别为3.3333±1.96638、10.0000±2.44949和1.3333±1.21106,B组SIRT1蛋白表达与A组相比差异不显著(P>0.05);B组VEGF蛋白表达明显高于A组(P<0.05);B组AKT蛋白表达明显低于A组(P<0.01)。结论 SIRT1基因敲除可能通过激活VEGF/AKT通路加重骨关节炎关节软骨的退变,因此SIRT1基因可能对骨关节炎起到保护作用。

血管内皮生长因子与磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号传导通路在早产儿视网膜病变中的作用

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可在体内诱导血管新生。磷脂酰肌醇3．激酶／蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase／protein kinase B，PDK—AKt）信号通路广泛存在细胞中，在细胞生长、增殖、分化调节、血管新生等过程中发挥着重要作用。PDK—AKt信号通路可通过缺氧诱导因子-1、胰岛素样生长因子-Ⅰ、一氧化氮合酶、环氧化酶等多种途径激活VEGF的表达。研究显示VEGF、PDK．AKt信号通路在早产儿视网膜病变的发病机制中起重要作用。

百合总皂苷经VEGF/Akt信号通路调节人前列腺癌LNCaP细胞增殖及侵袭的机制研究

目的:探讨百合总皂苷经血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路调节人前列腺癌LNCaP细胞增殖及侵袭的机制。方法:体外培养人前列腺癌LNCaP细胞,阴性对照组不进行处理,阳性对照组给予浓度为1.6μg·L^-1的顺铂,百合总皂苷高、中、低剂量组分别给予浓度为200,100,50 mg·L^-1的百合总皂苷后继续培养48 h,检测细胞增殖、凋亡及侵袭情况,同时检测VEGF受体2(VEGFR2)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达水平。结果:各组LNCaP细胞Akt蛋白变化不显著(P>0.05);与阴性对照组比较,阳性对照组LNCaP细胞增殖率、侵袭数、VEGFR2、p-Akt和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax和caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);给予百合总皂苷干预后,LNCaP细胞增殖率、侵袭数、VEGFR2、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均较阴性对照组降低(P<0.05),凋亡率、Bax和caspase-3蛋白表达均较阴性对照组升高(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),但效果不如阳性对照组(P<0.05)。结论:百合总皂苷通过抑制VEGF/Akt信号通路,抑制人前列腺癌LNCaP细胞增殖和侵袭,可能是前列腺癌治疗的一种新选择。

水蛭提取液通过VEGF/PI3K/AKT通路抑制WERI-RB-1细胞表达VEGF

目的:研究水蛭提取液对视网膜母细胞瘤细胞(WERI-RB-1细胞)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响及相关分子机制。方法:将体外培养的WERI-RB-1细胞分为对照组、0.04U/mL水蛭提取液组、0.08U/mL水蛭提取液组,对照组采用完全培养基培养48h,水蛭提取液组分别采用含0.04、0.08U/mL含药培养基培养48h。采用ELISA法检测各组细胞培养基上清液中VEGF表达水平;采用RT-PCR法检测各组细胞缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA相对表达水平;采用Western Blot法检测各组细胞HIF-1a、MMP-9、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、人磷酸化蛋白激酶(p-AKT)相对表达水平。结果:与对照组比较,水蛭提取液组细胞培养基上清液中VEGF表达均降低(P<0.05),0.04、0.08U/mL水蛭提取液对VEGF表达抑制率分别为32.43%、38.92%。与对照组比较,水蛭提取液组细胞HIF-1a和MMP-9 mRNA相对表达水平均明显降低(P<0.05),0.04、0.08U/mL水蛭提取液对HIF-1a mRNA表达抑制率分别为27.64%、24.75%,对MMP-9 mRNA表达抑制率分别为43.97%、51.48%。与对照组比较,水蛭提取液组细胞HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT蛋白相对表达水平均明显降低(P<0.05),0.04、0.08U/mL水蛭提取液对HIF-1a蛋白表达抑制率分别为55.81%、43.85%,对MMP-9蛋白表达抑制率分别为39.49%、47.23%,对PI3K蛋白表达抑制率分别为33.27%、29.83%,对p-AKT蛋白表达抑制率分别为52.07%、30.21%。结论:水蛭提取液可能通过VEGF/PI3K/AKT通路及HIF-1a、MMP-9因子抑制WERI-RB-1细胞VEGF的表达。

熟地黄多糖对前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡的作用及对VEGF/Akt信号通路的影响

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)信号通路研究熟地黄多糖对前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡的作用。方法取对数生长期人前列腺癌PC-3细胞分为空白组、低、中、高剂量组,分别加入0、20、40、60μmol/L熟地黄多糖培养。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测人前列腺癌PC-3细胞增殖抑制率;Transwell侵袭实验检测PC-3细胞侵袭能力;流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内VEGF/Akt信号通路相关蛋白表达。结果随着熟地黄多糖处理浓度增加,PC-3细胞增殖抑制率逐渐升高,且呈时间梯度升高(P<0.05),PC-3细胞的穿膜细胞数逐渐减少,细胞凋亡率逐渐升高,血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化p-Akt蛋白表达逐渐下调,均有明显浓度依赖性(P<0.05)。结论熟地黄多糖对前列腺癌PC-3细胞具有抑制其增殖与侵袭、促进其凋亡的作用,可能是通过抑制VEGF/Akt信号通路实现的。

补肾活血方对血管性痴呆大鼠脑海马脑源性神经生长因子介导的PI3K/AKT信号通路的影响

目的:从脑源性神经生长因子(BDNF)介导的PI3K/AKT信号通路角度探讨补肾活血方对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马经元保护机制。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组14只、模型组14只、补肾活血方组(10.14g/kg、5.07g/kg)28只、尼莫地平组(0.011g/kg)14只,除假手术组外,采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,药物组分别以10.14g/kg和5.07g/kg灌服补肾活血方药液,阳性组以0.011g/kg灌服尼莫地平药液,假手术组、模型组均以10ml/kg体重灌服生理盐水,每日1次,给药30d天后,采用透射电子显微镜观察各组大鼠脑海马神经元超微结构变化;Tunel法检测细胞凋亡变化;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot检测海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)、丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)蛋白及基因表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达水平均呈显著下降,脑海马神经元超微结构明显受损,细胞凋亡平均光度值显著升高,平均灰度值显著下降;与模型组比较,补肾活血方10.14g/kg和5.07g/kg剂量组均能显著提高脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达,改善脑海马神经元超微结构,细胞凋亡平均光度值显著下降,平均灰度值显著升高。结论:补肾活血方可通过调控BDNF介导的PI3-K/AKT信号通路,发挥神经元保护作用。

基于VEGF/VEGFR2/PI3K/Akt信号通路研究健脾活骨方对酒精性股骨头坏死血管损伤的修复作用机制

目的:本研究旨在观察健脾活骨方(JPHGP)对实验性酒精性股骨头坏死(AONFH)血管损伤的修复作用,并基于血管内皮细胞生长因子(VEGF)/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探索其作用机制。方法:实验采用46%酒精度红星二锅头10 m L·kg^(-1)·d^(-1)灌胃建立AONFH大鼠模型,观察JPHGP不同剂量组(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))的干预作用,选择健骨生丸(JGS,1.5 g·kg^(-1))为阳性药物;给药8周后,Micro-CT扫描分析股骨头骨计量学,墨汁灌注观察股骨头骨髓内微血管面积,苏木素-伊红(HE)染色法观察病理学改变程度,免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测股骨头中血小板-内皮细胞黏附分子31(CD31)、VEGF、VEGFR2、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Ak)和抑癌基因(PTEN)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠股骨头骨小梁断裂变细,空骨陷窝增多,脂肪细胞数量明显增多和直径显著变大(P<0.01),Micro-CT影像学结果显示骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均明显降低(P<0.05,P<0.01),骨表面积体积比(BS/BV)和骨小梁分离度(Tb.Sp)均显著升高(P<0.01),墨汁灌注结果表明股骨头髓腔内微血管面积显著减少(P<0.01);与模型组比较,JPHGP作用后能降低AONFH大鼠股骨头的空骨陷窝率、脂肪细胞面积和直径,Micro-CT影像学结果显示JPHGP低剂量组BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV显著降低(P<0.01),BMD呈升高趋势,Tb.Sp呈下降趋势,但差异均无统计学意义,JPHGP中、高剂量组的BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV、Tb.Sp明显降低(P<0.05,P<0.01),并明显升高股骨头髓腔内微血管面积(P<0.05,P<0.01),扩大股骨头髓腔内微血管面积;与正常组比较,模型组大鼠均显著下调CD31、VEGF、VEGFR2、PI3K、p-Akt和上调PTEN的表达含量(P<0.01),与模型组比较,JPHGP作用后中、高剂量组显著升高大鼠股骨头CD31、PI3K、p-Akt表达含量(P<0.01),降低PTEN蛋白的表达水平(P<0.01),同时JPHGP作用后上调VEGF、VEGFR2表达含量(P<0.05,P<0.01)。结论:JPHGP对AONFH股骨头血管损伤具有修复作用,其机制可能与激活VEGF/VEGFR2/PI3K/Akt信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP的临床应用提供一定科学依据和参考。

基于Akt/JNK/p38 MAPK信号通路探讨健脾活骨方对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的:观察健脾活骨方(JPHGP)对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用,并基于蛋白激酶B/c-Jun氨基末端激酶/p38 MAPK(Akt/JNK/p38 MAPK)信号通路探索相关作用机制。方法:通过鸡胚尿囊膜实验、胸主动脉环实验和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的迁移、侵袭、黏附和管腔形成实验,在有或无酒精诱导条件下,观察JPHGP不同质量浓度8、16、32μg·L^(-1)对血管新生的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HUVEC中Akt、JNK、p38 MAPK等磷酸化表达水平。结果:与正常组比较,模型组动脉环周围微血管数目及长度均减少,HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力降低(P<0.05,P<0.01);JPHGP16、32μg·L^(-1)组作用后能明显升高鸡胚尿囊膜新生血管长度(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,JPHGP 8、16、32μg·L^(-1)组能浓度依赖地增加胸主动脉环周围微血管数量(P<0.05,P<0.01),JPHGP 32μg·L^(-1)组能升高胸主动脉环周围微血管长度(P<0.05);JPHGP 16、32μg·L^(-1)组均能增强HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力。Western blot检测结果表明,与正常组比较,模型组中的p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,JPHGP 8、16、32μg·L^(-1)组的p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),JPHGP 16、32μg·L^(-1)组的p-JNK/JNK的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:JPHGP对酒精致血管内皮细胞功能损伤具有保护作用,其机制可能与激活Akt/JNK/p38MAPK信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP“健脾活血”功效阐明提供一定的科学依据。

当归多糖对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的探讨当归多糖对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,以及其对血管内皮生长因子(VEGF)-蛋白激酶B(AKT)信号通路的调控机制。方法将人体血管内皮细胞(HUVEC)随机分为空白组,模型组,低、中、高剂量实验组,抑制A、B组。空白组仅给予正常培养;模型组给予200μg·mL-1 ox-LDL处理24 h;低、中、高剂量实验组分别给予10,20,40μmol·L-1当归多糖预处理12 h,然后再给予和模型组相同的处置;抑制A组给予30μmol·L-1 GSK2141795处理30 min,然后给予和中剂量实验组相同的处置;抑制B组给予20μmol·L-1贝伐珠单抗处理30 min,然后给予和中剂量实验组相同的处置。比较7组细胞的乳酸脱氧酶(LDH)的活性、一氧化氮(NO)、细胞凋亡率、VEGF和AKT的表达水平。结果低、中、高剂量实验组和抑制A组、抑制B组、模型组、空白组的LDH分别为(262.56±9.73),(126.20±7.40),(205.74±7.94),(216.99±7.95),(223.78±10.44),(287.06±5.67)和(72.25±1.59)U·L-1,NO分别为(6.30±1.46),(9.21±0.69),(7.21±1.27),(6.92±0.44),(7.42±0.52),(5.92±0.30)和(12.60±0.45)μmol·L-1,细胞凋亡率分别为(18.69±0.52)%,(12.21±1.24)%,(15.79±1.56)%,(16.45±1.34)%,(17.33±1.60)%,(19.47±1.27)%和(4.57±0.46)%,VEGF蛋白表达量分别为(0.51±0.11),(0.67±0.16),(0.58±0.13),(0.12±0.01),(0.61±0.15),(0.32±0.08)和(0.74±0.13),AKT相对表达量分别为(0.73±0.14),(0.92±0.16),(0.77±0.14),(0.12±0.03),(0.07±0.01),(0.51±0.16)和(0.98±0.15),中剂量实验组的上述指标与模型组、抑制A组、抑制B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论当归多糖对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有明显的保护作用,其作用机制与VEGF-AKT信号通路有关。

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的:观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子改善卵巢储备功能下降(DOR)大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法:运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠,将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组(0.000 9 g·kg^(-1)),补肾活血方高、中、低剂量组(33,16.5,8.25 g·kg^(-1)),同时另设正常组,每组12只;各组相应药物治疗,正常组和模型组给予等体积生理盐水,连续灌胃14 d,每天1次。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色卵巢组织,光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化;免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中PI3K,Akt,mTOR,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测卵巢组织中PI3K,Akt,mTOR mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少(P<0.05,P<0.01),卵巢组织中VEGF,Caspase-3表达升高(P<0.05),PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显(P<0.05),补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降,补肾活血方中、高剂量组PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05,P<0.01),且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论:补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能,促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关,进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,从而调节Caspase-3的含量,最后促进卵泡数量的增加。

淫羊藿苷介导PI3K/Akt信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的研究

目的探讨淫羊藿苷调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的作用机制。方法50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和淫羊藿苷10、20、40 mg/kg组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖和im甲泼尼龙制备激素性股骨头坏死大鼠模型。淫羊藿苷组大鼠分别ig 10、20、40 mg/kg的淫羊藿苷,对照组、模型组均ig等量生理盐水,每天1次,连续6周。采用Micro-CT评估造模是否成功并分析骨密度(BMD)、骨体积密度(BV/TV)、骨表面积密度(BS/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp);ELISA法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;Western blotting法检测股骨头PI3K、Akt、磷酸化Akt(pAkt)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组BMD、Tb.Th、BV/TV、Tb.N、BS/TV、VEGF和NO水平明显降低,Tb.Sp明显增高(P<0.05);与模型组比较,淫羊藿苷组的BMD、Tb.N、BV/TV、Tb.Th、BS/TV、VEGF和NO水平明显增高,Tb.Sp明显降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组PI3K和p-Akt蛋白表达均减少(P<0.05);与模型组比较,淫羊藿苷组PI3K和p-Akt蛋白表达均增加(P<0.05)。结论淫羊藿苷能够有效缓解激素性股骨头坏死的进展,其机制可能与调节血清中VEGF、NO水平和增加骨组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达有关,从而诱导血管修复与新生,促进骨形成和愈合。

银杏内酯K通过PI3K/Akt/mTOR通路促进血管生成改善缺血性卒中

目的探究银杏内酯K(Ginkgolide K,GK)通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对缺血性卒中小鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达和脑血管生成的作用.方法将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、大脑中动脉闭塞(MCAO)组、低剂量GK(GK-L)组(3.5 mg/kg)、中剂量GK(GK-M)组(7 mg/kg)和高剂量(GK-H)组(14 mg/kg),每组各8只.建立MCAO模型和氧葡萄糖剥夺发(OGD)体外模型;采用改良后的神经系统严重程度评分(mNSS)评估法检测小鼠神经功能缺损;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测小鼠脑缺血面积;免疫荧光染色检测小鼠梗死灶周围皮质血管生成和星形胶质细胞覆盖.培养hCMEC/D3细胞,分为对照组,OGD组、OGD+CK组、OGD+LY组(LY为PI3K信号通路抑制剂)和OGD+GK+LY组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测内皮细胞活性;Western blot检测内皮细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、VEGF和PI3K/Akt/mTOR通路相关基因蛋白表达;细胞划痕实验检测内皮细胞迁移能力;血管形成实验检测内皮细胞管腔形成能力.结果与MCAO组[(5.37±1.25)分、(11.99±1.72)%]比较,GK-M组和GK-H组小鼠mNSS评分[分别为(3.37±1.32)、(2.23±0.38)分]和脑缺血面积[(4.75±0.89)%、(2.42±0.42)%]均显著降低(P<0.05).与MCAO组EdU+/CD31+细胞数、EdU+/GFAP+细胞数和星形胶质细胞覆盖率[分别为(3.33±0.58)个、(4.33±1.53)个、(69.20±5.60)%]比较,GK组小鼠EdU+/CD31+细胞数[(13.67±2.08)个,t=3.576]、EdU+/GFAP+细胞数[(8.33±1.53)个,t=6.008]和星形胶质细胞覆盖率[(82.26±7.77)%]显著升高(均P<0.05).与对照组细胞活力、HIF-1α、VEGF蛋白表达、Akt和mTOR磷酸化水平[分别为(100.31±3.01)%、(0.09±0.03)、(0.13±0.03)、(0.20±0.04)、(0.18±0.03)]比较,OGD组细胞活力[(52.37±9.06)%]、HIF-1α(0.17±0.02)和VEGF蛋白表达(0.18±0.03)、Akt和mTOR磷酸化水平[(0.28±0.06),(0.38±0.05)]均显著升高(均P<0.05);与OGD组比较,OGD+GK组细胞HIF-1α(0.22±0.03)和VEGF蛋白表达(0.23±0.03)、Akt和mTOR磷酸化水平[(0.48±0.09),(0.52±0.05)]、细胞活力[(61.07±3.48)%]、迁移率[(85.26±11.03)%]和管状结构数量[(81.97±5.79)%]均显著升高(均P<0.05),OGD+LY组则表现出相反变化;PI3K信号通路抑制剂LY294002可逆转GK对OGD细胞的影响.结论GK通过PI3K/Akt/mTOR信号通路上调VEGF表达促进脑血管生成,改善小鼠缺血性卒中.

基于网络药理学和实验验证黄芪甲苷和三七总皂苷配伍调控血管生成抗脑缺血作用机制

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASTⅣ(10 mg·kg^(-1))+PNS(25 mg·kg^(-1))组,大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法建立脑缺血模型。ASTⅣ及PNS灌胃给药,每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;免疫组化测定血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的表达;免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、VEGFA、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达。体外实验:原代培养并鉴定脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs),取第3代rBMECs,设置对照组、模型组、ASTⅣ+PNS(50μmol·L^(-1)+30μmol·L^(-1))组、LY294002(PI3K/AKT信号通路抑制剂)组、740Y-P组(PI3K/AKT信号通路激动剂)、ASTⅣ+PNS+LY294002组及ASTⅣ+PNS+740Y-P组,氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)建立缺血再灌注损伤模型。CCK-8检测rBEMCs存活情况,划痕实验检测rBEMCs迁移能力;人工基底膜(matrigel)检测rBEMCs成管数;内皮细胞渗漏实验检测内皮细胞渗透率;蛋白质印迹检测rBEMCs中VEGFR2、VEGFA、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。网络药理学结果显示,ASTⅣ及PNS可调节脑梗死血管生成的21个靶点,包括VEGFA、AKT1等,大部分涉及PI3K/AKT信号通路。体内实验发现,与模型组比较,ASTⅣ+PNS配伍能降低脑缺血后神经功能缺损评分(P<0.05)及脑组织细胞损伤率(P<0.05),增加vWF及VEGFA蛋白的表达(P<0.01),促进血管新生,且显著升高PI3K/AKT通路相关蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。体外实验发现,与模型组比较,ASTⅣ+PNS、740Y-P、ASTⅣ+PNS+LY294002及ASTⅣ+PNS+740Y-P均能增加OGD/R后rBEMCs存活率,增强rBEMCs迁移率,增加rBEMCs成管数,增强PI3K/AKT通路相关蛋白表达,降低内皮细胞渗透率(P<0.05,P<0.01);与LY294002组比较,ASTⅣ+PNS+LY294002组rBEMCs存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达显著增加,内皮细胞渗透率显著减少(P<0.05,P<0.01);与ASTⅣ+PNS组和740Y-P组比较,ASTⅣ+PNS+740Y-P组rBEMCs存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达显著增加,内皮细胞渗透率显著降低(P<0.01)。该研究表明,ASTⅣ和PNS在脑缺血后能促进血管生成,机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

氟西汀对抑郁大鼠海马血管新生因子表达的影响

目的探讨氟西汀对抑郁大鼠海马血管新生因子表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠（3月龄）32只，根据随机数字表分为氟西汀组（n=8）、氟西汀＋LY294002干预组（n=8）、模型组（n=8）、对照组（n=8）。对照组不进行任何处理，自由进食及摄水5周。其余各组大鼠均采用慢性温和不可预测的多相应激方法建立抑郁建模。建模后氟西汀组给予氟西汀治疗2周，氟西汀＋LY294002干预组给予LY294002干预后，氟西汀治疗2周，模型组自由进食、饮水2周。实验第5周末所有大鼠（直接将大鼠断头处死，冰浴上取出海马）行免疫印迹实验（Western blot）。结果氟西汀组VEGF（0．98±0．13）、FLK1（1．09±0．21）、AKT1（1．05±0．05）、p-AKT1（1．01±0．13）较模型组VEGF（0．44±0．08）、FLK1（0．37±0．15）、AKT1（0．40±0．10）、p-AKT1（0．53±0．07）的蛋白表达水平明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。氟西汀组海马VEGF、FLK1、P—AKT1较氟西汀＋LY294002干预组的VEGF（0．55±0．08）、FLK1（0．55±0．14）、p-AKT1（0．60±0．05）蛋白表达明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论氟西汀可增强抑郁大鼠海马血管新生因子VEGF／FLK1、p-AKT1蛋白的表达，进而参与海马血管的新生，而氟西汀的这种作用可能与P13K／AKT信号通路有关。