血清血管内皮生长因子、抗甲状腺球蛋白抗体、促甲状腺激素水平检测在分化型甲状腺癌诊断中的应用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、促甲状腺激素(TSH)水平变化在分化型甲状腺癌患者诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2022年12月周口市疾病预防控制中心专科病医院收治的经病理学确诊的78例甲状腺疾病患者作为研究对象,其中39例确诊为分化型甲状腺癌的设为观察组、39例确诊为良性结节的设为对照组。比较观察2组血清VEGF、TgAb、TSH水平及在分化型甲状腺癌中诊断价值。结果观察组血清VEGF、TgAb、TSH水平均高于对照组(t=44.988,P<0.001;t=20.556,P<0.001;t=141.755,P<0.001)。观察组血清VEGF、TgAb、TSH阳性率均高于对照组(χ^(2)=4.994,P=0.025;χ^(2)=6.019,P=0.014;χ^(2)=4.768,P=0.029)。血清VEGF、TgAb、TSH联合检查准确性、敏感性、特异性更高。结论分化型甲状腺癌患者血清VEGF、TgAb、TSH水平显著升高,三者联合检测具有更高的诊断价值。

血管内皮生长因子中和抗体对屈肌腱粘连的影响

目的探讨拮抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对屈肌腱粘连的影响。方法制作兔屈肌腱损伤模型,局部应用 VEGF 中和抗体,分别于术后4、7、10、14、28、56 d取材,观察肌腱粘连情况、组织学变化及应用中和抗体后 VEGF 表达的变化,生物力学测试肌腱断裂时的位移情况。结果应用中和抗体后 VEGF 的表达水平降低,肉芽组织增生程度减轻,肌腱粘连程度评分和肌腱位移下降。结论局部应用 VEGF 中和抗体能够降低 VEGF 的表达水平,减轻肌腱损伤后的粘连程度,改善肌腱滑动功能。

抗人血管内皮生长因子单克隆抗体抑制人颊鳞癌生长的实验研究

目的 :研究抗人血管内皮生长因子 (VEGF)单抗E1 1 抑制移植性人颊鳞癌血管生成 ,从而抑制颊癌生长的作用效果。方法 :接种人颊鳞癌BCaCD885细胞株的BALB c裸小鼠分别通过腹腔或瘤周皮下注射抗人VEGF单抗或生理盐水。每隔 3d测量瘤体积 1次 ,接种后第 18天处死裸鼠并称取瘤重 ,计算抑瘤率。结果 :①不同给药途径的抗人VEGF单抗对颊癌的生长均有明显的抑制作用 ,与生理盐水组相比较有显著性差异 ,其抑瘤率分别为 6 0 1%、6 9 9%。②腹腔、瘤周皮下两种注射方式比较 ,瘤周皮下组的抑瘤效果更为显著。结论 :肿瘤中的VEGF是抗肿瘤血管生成的理想靶目标 ,而抗人VEGF单抗又是该抑癌新途径的理想选择 。

血管内皮细胞生长因子的表达及其单克隆抗体的制备

目的表达、纯化血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白,并制备其单克隆抗体。方法将pGEX-4T-1/VEGF165表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达GST-VEGF165融合蛋白,并采用十二烷基肌氨酸钠溶解,亲和层析纯化。用获得的GST-VEGF165蛋白免疫小鼠,制备抗GST-VEGF165单克隆抗体,并进行鉴定及初步应用。结果表达的GST-VEGF165融合蛋白相对分子质量约为45000,表达量约占菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度大于90%,并具有与其受体结合的活性,亲和力约为109L/mol。免疫小鼠后,获得1株抗GST-VEGF165的单克隆抗体,反应原性良好,亚类为IgG2a,解离常数为2×10-9mol/L。以此单抗为包被抗体,建立了双抗体夹心ELISA法,VEGF165的最佳检测范围为1.5625～25ng/ml。结论成功表达、纯化了VEGF165蛋白,并制备出VEGF165单克隆抗体,为VEGF检测试剂盒的研制奠定了基础。

抗血管内皮生长因子抗体对实验性肝癌的生长抑制作用

目的 了解抗血管内皮生长因子 (VEGF)抗体对人肝癌的生长抑制作用。方法 在已建立的人肝癌裸鼠皮下种植瘤的瘤灶旁 ,注射抗VEGF抗体 ,观察肿瘤生长情况 ,用CD3 1的免疫组化方法检测肿瘤内部的微血管密度(iMVD) ,用原位末端转移酶标记技术检测凋亡的肿瘤细胞。结果 实验结束后 1周 ,实验组和对照组肿瘤大小 (长×宽 )是 (2 6.46± 19.81)mm2 和 (10 5 .77± 17.40 )mm2 (P<0 .0 0 1) ,2周后是 (4 5 .2 0± 2 3 .0 2 )mm2 和 (15 0 .77± 77.41)mm2 (P<0 .0 5 ) ,而此时肿瘤的iMVD是 (2 3 11± 12 0 )个 /mm2 和 (3 90 0± 3 2 8)个 /mm2 (P<0 .0 0 1) ;肿瘤细胞凋亡指数是 15 .3 1%和 6.83 % (P<0 .0 0 5 )。结论 抗VEGF抗体能通过抑制肿瘤微血管的生长 ,抑制实验性人肝癌的生长 ,其实质是增加了肿瘤细胞凋亡。

抗人血管内皮生长因子嵌合抗体在真核细胞中的高效表达

目的：在中国仓鼠卵巢（ Chinese hamster ovary, CHO）细胞中高效表达有活性的抗人血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）嵌合抗体，并探索获得最佳表达的途径。方法：采用一种新型的基因工程抗体真核高效表达载体系统，将抗 VEGF嵌合抗体轻、重链基因导入二氢叶酸还原酶缺陷型 CHO细胞，筛选表达抗 VEGF嵌合抗体的克隆，再进行递增浓度的氨甲喋呤 (methotrexate, MTX)加压扩增表达。采用 ELISA检测所表达的嵌合抗体的生物学特性和产量。结果：采用三种不同的筛选加压扩增表达方法获得的结果有差异，其中采用每轮加压扩增表达后进行亚克隆的方法获得了高表达产量的克隆，产量可达 28μ g/ml。 ELISA结果证实所表达的抗体为特异地与 VEGF结合的、含人抗体恒定区的抗 VEGF嵌合抗体。结论：成功地在真核细胞中高效表达了有活性的抗 VEGF嵌合抗体，为下一步该嵌合抗体的临床试用奠定了重要的基础，并探索出该表达系统最佳的筛选加压扩增表达方法。

子宫内膜异位症患者血清血管内皮生长因子和抗子宫内膜抗体的表达及其临床意义

目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)和抗子宫内膜抗体(EMAb)的检测在子宫内膜异位症(EMS)诊断和疗效评价中的价值。方法选择2006年1月～2009年12月复旦大学附属上海市第五人民医院收治的EMS患者50例为观察组,同期体检健康者45为对照组。于治疗前和治疗后检测VEGF和EMAb水平并进行比较。结果①观察组治疗前血VEGF[(182.5±14.7)ng/L]和EMAb[(0.37±0.09)ng/L]水平及EMAb阳性率[62.0%(31/50)]明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②VEGF和EMAb联合检测的敏感度和特异度均高于单项检测。③观察组治疗后血VEGF含量[(120.1±18.4)ng/L]及EMAb阳性比例[28.0%(14/50)]较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血VEGF和EMAb的检测在EMS的诊断与疗效评价中有一定价值。

抗人血管内皮生长因子单克隆抗体对荷人颊癌裸鼠血清中血管内皮生长因子水平的影响

目的 定量测定抗人血管内皮生长因子 (VEGF)单抗E1 1 组、生理盐水组荷人颊癌裸鼠血清中VEGF含量并进行比较 ,以观察E1 1 对体内可溶性VEGF水平的影响。方法 接种人颊鳞癌的BALB c裸小鼠分别通过腹腔或瘤周皮下注射E1 1 或生理盐水。接种后第 18天处死 ,收集裸鼠血清 ,采用改进的间接ELISA法定量测定VEGF含量。结果 E1 1 组裸鼠血清中VEGF含量均显著低于生理盐水组 ,其中E1 1 瘤周皮下组VEGF水平最低 ,仅 (1 17±0 13) μg L。结论 抗人VEGF单抗是通过中和VEGF而阻断其发挥促肿瘤血管生成的作用 ,从而产生抑瘤效应。荷人颊癌裸鼠血清中VEGF的水平与其荷瘤的瘤重呈正相关关系 ,提示恶性肿瘤患者血清中的VEGF是新的肿瘤标志物。

血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以重组His-Trx-VEGF1-165蛋白为抗原,通过免疫、融合、克隆和筛选等方法制备VEGF mAb,制备小鼠腹水并测定其效价、染色体数目及免疫球蛋白亚类,用Western blot方法分析其特异性。结果:成功筛选出能稳定分泌的VEGF mAb杂交瘤细胞株4E4-H5,制备腹水的ELISA效价为1∶106;染色体数目为105条;抗体分型为IgG1亚型,κ轻链;Western blot证实所获得的mAb可与VEGF全长蛋白发生特异性反应,但是与融合蛋白的标签蛋白His-Trx不发生反应。结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌高滴度和高特异性的VEGF mAb,为建立能够用于肝癌诊断的血清VEGF检测技术提供了参考。

抗人血管内皮生长因子单克隆抗体抑癌作用的形态学观察及作用机制探讨

目的 :研究抗人血管内皮生长因子 (VEGF)单抗E1 1 抑制颊癌组织的形态学改变 ,并探讨E1 1 抑癌效应的机制。方法 :接种人颊鳞癌的BALB c裸小鼠分别通过腹腔或瘤周皮下注射抗人VEGF单抗或生理盐水。接种后第 18天处死 ,取颊癌组织进行光镜及透射电镜观察。结果 :E1 1 组颊癌组织中血管分布稀少、存在囊性变坏死区及癌细胞坏死、凋亡等。此外还有血管内皮细胞变性、凋亡及血管壁受破坏、管腔变窄和堵塞等血管系统的异常改变。而生理盐水组癌组织血管丰富 ,颊癌组织结构完整。结论

血管内皮生长因子抗体对胶质瘤细胞凋亡的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)抗体对大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的影响及对肿瘤生长的抑制作用。方法皮下接种建立异位大鼠C6胶质瘤模型,实验组每3d局部应用VEGF抗体,对照组局部应用PBS溶液,每5d量取肿瘤的长径和宽径,15d后处死动物,称取肿瘤湿重,肿瘤组织行H-E及TUNEL法原位凋亡检测。结果实验组动物肿瘤生长速度明显减慢,光镜下观察实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶,TUNEL法原位凋亡检测发现实验组肿瘤组织内肿瘤细胞凋亡。结论应用VEGF抗体后大鼠C6胶质瘤生长速度减慢,肿瘤细胞发生凋亡。抗血管形成疗法不仅能使肿瘤坏死增加,而且可以诱导肿瘤细胞凋亡。

血管内皮生长因子抗体对卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响

目的 :探讨血管内皮生长因子抗体对卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法 :采用体外实验的方法将不同浓度的血管内皮生长因子抗体作用卵巢癌细胞系SKOV3。用RT PCR和免疫组化法测定处理前后卵巢癌细胞系SKOV3中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达。采用ELISA法测定SKOV3分泌血管内皮生长因子的含量 ,采用MTT和细胞直接计数方法测定处理前后卵巢癌细胞系SKOV3的抑制率和增殖速度。结果 :不同浓度的血管内皮生长因子抗体作用于卵巢癌细胞株SKOV3后 ,其生长抑制率和细胞增殖速度与对照相比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;不同浓度的血管内皮生长因子抗体作用于卵巢癌细胞株SKOV3后 ,其血管内皮生长因子mRNA、蛋白及其受体表达水平呈下调趋势 ;不同浓度的血管内皮生长因子抗体作用于卵巢癌细胞株SKOV3后 ,其血管内皮生长因子分泌明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :血管内皮生长因子抗体对卵巢癌细胞株SKOV3体外生长无直接影响 ,但血管内皮生长因子抗体可下调血管内皮生长因子mRNA、蛋白及其受体表达水平。

抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体轻链可变区基因的克隆和序列分析

为构建和表达抗人血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）工程抗体奠定基础，从分泌抗人ＶＥＧＦ抗体的杂交瘤细胞株中提取总ＲＮＡ，利用反转录－聚合酶链反应方法，克隆抗人ＶＥＧＦ单克隆抗体轻链可变区基因，将其重组入ｐＥＧＭＲ－ＴＶｅｃｔｏｒ测序载体测序。结果表明轻链可变区序列全长３３３ｂｐ，编码１１１个氨基酸，通过国际联机检索及Ｋａｂａｔ库扫描证实，该轻链可变区符合小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因特征，同源性高达８９．３％，归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。

抗环瓜氨酸肽抗体和血管内皮生长因子对类风湿关节炎实验诊断意义探讨

目的探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和血管内皮生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)诊断中的意义以及与类风湿因子(RF)的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测实验组和对照组抗CCP抗体和VEGF,采用速率散射光比浊法检测RF水平,并分析上述三者之间的关系。其中实验组为48例RA患者,对照组为32名健康人。结果抗CCP抗体特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为100.0%、85.4%、100.0%、82.1%;VEGF的特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为56.3%、97.9%、77.0%、94.7%;RF特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为100.0%、89.6%、100.0%、86.5%。三者之间两两具有相关性,尤以VEGF和抗CCP抗体相关性为好。结论抗CCP抗体和VEGF在RA诊断中具有其独特的应用价值。抗CCP抗体特异性与RF相同并优于VEGF,VEGF敏感性最高,而三者联合检测可进一步提高试验诊断特异性和敏感性。

血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ抗体修饰的多西他赛脂质体的制备与药效学评价

目的制备由血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ(vascular endothelial growth factor receptorⅡ,VEGFRⅡ)抗体修饰的多西他赛脂质体,并评价其对乳腺癌细胞MCF-7的体内外抗肿瘤效果。方法采用薄膜分散-挤出法制备多西他赛脂质体,再将血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(VEGFRⅡ-distearoyl phosphothanolamine-polyethyleneglycol 2000,VEGFRⅡ-mPEG2000-DSPE)连接物与脂质体共同孵化制备成VEGFRⅡ修饰的介导多西他赛脂质体,通过透射电镜观察其微观形态,粒度分析仪测定其粒径分布和zeta电位,并考察了多西他赛脂质体和VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体的体外释药特性;比较了多西他赛脂质体和VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体在体外和体内对乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤效果。结果在透射电镜下可观察到多西他赛脂质体和VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体均呈球状或类球状分布,平均粒径分别为(226.2±16.4)nm和(233.6±10.5)nm,多聚分散系数(PdI)分别为(0.186±0.012)和(0.179±0.009),zeta电位分别为(-9.7±0.6)mV和(-10.1±0.5)mV;多西他赛脂质体和VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体在pH 7.4磷酸缓冲液中释药均较为缓慢;在体外多西他赛脂质体和VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体均能够有效地抑制乳腺癌细胞MCF-7生长,而在裸鼠体内VEGFRⅡ修饰的多西他赛脂质体抑制乳腺癌细胞MCF-7生长速度显著高于多西他赛脂质体。结论本研究制备的VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体对乳腺癌细胞MCF-7具有较强的抑制活性,VEGFRⅡ抗体修饰的多西他赛脂质体具有潜在的临床应用价值,值得进一步研究。

抗血管内皮生长因子单克隆抗体Avastin的临床研究现状

Avastin(即Bevacizumab)是第一个被美国FDA批准的通过抑制血管生成发挥抗癌作用的新药。目前Avastin结直肠癌Ⅲ期临床实验已完成,正在进行非小细胞肺癌(NSCLC)、乳腺癌、胰腺癌、肾癌、多发性骨髓瘤的Ⅲ期临床实验。已完成的结果显示Avastin可延长晚期结直肠癌和NSCLC患者的生存期,提高乳腺癌和胰腺癌、肾癌、急性骨髓性白血病患者的缓解率。研究发现,Avastin的副作用有高血压、蛋白尿、出血和血栓形成,比较严重的是肠穿孔。

抗人SDF-1多克隆抗体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究抗人基质细胞衍生因子(SDF-1)多克隆抗体对糖尿病大鼠(DM)视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,为抗SDF-1多克隆抗体用于防治糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopa-thy,DR)提供实验依据。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射,建立DM动物模型。治疗组,用抗人SDF-1多克隆抗体治疗,对照组和非治疗组只给予等量生理盐水。结果:对照组大鼠视网膜VEGF的含量为(4.25±0.81)ng/ml,未治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(13.32±1.12)ng/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(6.73±1.25)ng/ml,同未治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:抗人SDF-1多克隆抗体抑制糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子的表达。

抗人膀胱癌/抗血管内皮生长因子双功能基因抗体的动物实验研究

目的 探讨抗人膀胱癌 /抗人血管内皮生长因子 (VEGF)双功能基因抗体对膀胱癌生长的抑制作用。方法 应用双功能基因抗体作用于荷瘤动物模型观察抑瘤作用 ,应用免疫组化技术检测体内生长肿瘤中微血管密度。结果 双功能基因抗体对体内生长的肿瘤有明显的抑制作用 ,经双功能基因抗体治疗的瘤体中微血管密度明显低于对照组。结论 双功能基因抗体能够抑制肿瘤血管生成 ,从而为膀胱癌的治疗提供一种新的辅助方法。

抗血管内皮细胞生长因子抗体抑制视网膜新生血管化

目的:研究抗血管内皮细胞生长因子抗体对视网膜新生血管化的抑制作用。方法:以75%氧气和25%氮气的高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立缺血性视网膜病变模型,应用不同浓度抗血管内皮细胞生长因子抗体进行玻璃体腔内注射,在组织切片上计数和比较正常和实验条件下以及不同浓度药物注射后视网膜新生血管芽细胞核数。结果:缺血性视网膜病变小鼠模型有较多的视网膜新生血管芽细胞核数,而玻璃体内注射抗血管内皮细胞生长因子抗体的小鼠视网膜新生血管芽细胞核数明显减少(两组用药组与高氧对照组间P均<0.01),特别是大剂量用药组减少54.61%。结论:抗血管内皮细胞生长因子抗体能有效抑制视网膜的新生血管化。

复发性流产影响生命全程保健的免疫病因学研究——可能与抗层粘蛋白-1抗体、血管内皮生长因子及其可溶性受体相关

目的本研究探讨抗层粘连蛋白(anti-Laminin-1,抗LN-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体(s Flt-1)与复发性流产和女性保健的关系。方法 URSA组选择2015年1月至2016年12月在北京市友谊医院妇产科复发性流产专科门诊就诊的URSA患者30例,所有患者就诊前均连续自然流产2次以上,流产都发生于妊娠20周以前。对照组选择同期156例无不良妊娠史的健康妇女,对照组妇女均无肝、肾疾病,无自然流产史、早产史、血栓或出血史、妊娠期高血压疾病史,并且至少有1次成功的妊娠分娩史。本研究采用ELISE方法测定抗LN-1抗体、VEGF、s Flt-1。结果病例组与对照组血清中抗LN-1抗体、VEGF的滴度没有统计学差异(P=0. 407,P=0. 435),但是复发性流产组与对照组s Flt-1的血清滴度有统计学差异(P <0. 01)。结论复发性流产的发生可能与s Flt-1的表达增高密切相关,s Fl T-1与VEGF亲合,可降低妊娠妇女血清内VEGF的含量,阻碍VEGF促进孕妇胎盘血管的生成,干扰孕妇早期胎盘的生长发育,导致孕期内复发性流产。复发性流产病患血清中的血管内皮生长因子及其可溶性受体的表达增高可能是导致早期胚胎停育引发RSA的关键因素之一。RSA是严重危害女性健康及其生命全程包括老年期健康的常见病,病因学复杂,阐明其病因是女性涉及生命全程的保健医学的关键。