血管内皮生长因子反义寡核苷酸在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(antisenseoligode-oxyribonucleotide,ASODN)在人甲状腺髓样癌(MTC)裸鼠模型中的抑瘤作用。方法构建12只MTC裸鼠模型,随机分为三组。治疗结束后1周,杀死全部瘤鼠,切取瘤体,测算瘤质量和IR以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化(IHC)和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价组织病理构造、VEGF与Survivin蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示ASODN组具有明显减低的血管新生特点。此外,相对于正常组和SODN组,ASODN组具有显著的VEGF[(0.12±0.02)、(0.15±0.02)、(0.08±0.02)]和Sur-vivin[(0.17±0.03),(0.18±0.02),(0.09±0.02)]低表达、低瘤质量[(0.53±0.02)g,(0.54±0.03)g,(0.45±0.02)g]、高抑瘤率[(0±3.44)%,(-2.36±4.72)%、(15.57±3.22)%]和高凋亡[(4.91±0.67)%,(4.46±1.01)%,(24.68±1.22)%]特点(各P<0.01),而正常组与SODN组间未见上述各特点的统计学差异(各P>0.05)。结论针对人MTCVEGF基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果,此效果至少部分通过抑制肿瘤血管新生和促进肿瘤调亡而实现。这提示VEGF基因在人MTC中具有重要意义,可能成为人MTC基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一。

肿瘤基因治疗学研究:血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长的抑制

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASPODN)治疗肺癌的可能性。方法:实验于2002-12/2004-05在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组(每组10只):VEGF-ASPODN治疗组,VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射AS-PODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,2次/周,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化。结果:与对照组瘤质量犤(7.83±0.78)g犦比较,VEGF-ASPODN组犤(4.49±0.43)g犦能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01),VEGF-SPODN组犤(7.73±0.69)g犦则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组和VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%和5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN能明显抑制肿瘤细胞生长,降低增殖活性。结论:肿瘤原位注射VEGF-ASPODN能抑制小鼠肺癌生长。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸体外抑制皮肤血管瘤内皮细胞的增殖

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对皮肤血管瘤内皮细胞体外增殖及生物学特性的影响,并探讨其机制。方法体外培养皮肤血管瘤内皮细胞;脂质体介导VEGF反义寡核苷酸进行转染;MTT法观察其对内皮细胞生长的抑制;免疫细胞化学技术检测VEGF的蛋白表达;流式细胞仪分析细胞周期变化。结果VEGF反义寡核苷酸作用后的内皮细胞生长明显受到抑制,作用后48hVEGF蛋白表达明显下降,细胞周期中S期细胞数明显减少,并于72h后抑制效应逐渐减弱。结论VEGF反义寡核苷酸能显著抑制皮肤血管瘤内皮细胞的生长,其机制是抑制细胞的增殖,而不是促进其凋亡。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制大鼠脑胶质瘤生长

目的 :观察血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸对脑胶质瘤的抑制作用。方法 :所有大鼠均在立体定向导引下右尾状核区注射含 C6胶质瘤细胞 1× 10 6的 Hank液 2 0μl,其中实验 和 组在细胞接种1、2周后分别原位注射 1mm ol/ L和 2 m mol/ L的 VEGF反义寡核苷酸 ,对照组则在接种 1、2周后原位注射 2 0μl的 Hank液。接种 2、3周后给大鼠作磁共振检查 ,第 3周时处死所有的大鼠 ,观察肿瘤的生长情况 ,标本常规 H- E染色。 结果 :实验组大鼠有较好的生存状态 ,而对照组在接种后第 2周时开始出现颅内高压 ,至第 3周时大多数大鼠处于濒危状态。实验 组、 组的抑瘤率分别为 91.5 %和 10 0 %。 结论 :原位注射含 VEGF反义寡核苷酸能抑制荷瘤大鼠脑胶质瘤生长。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制大鼠子宫内膜异位种植的实验研究

目的了解血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对大鼠子宫内膜异位种植的抑制作用。方法用外科自体移植术建立SD大鼠右侧壁腹膜上子宫内膜异位症模型,在建模同时分别腹腔注射不同剂量的VEGF反义寡核苷酸(1 000μmol/L,2 000μmol/L)或生理盐水100μl,隔日1次,共4周。观察VEGF反义寡核苷酸对SD大鼠异位症建模成功率、移植物、在位内膜和卵巢的组织学变化及血清E2,P水平的影响。结果VEGF反义寡核苷酸腹腔注射使大鼠异位症模型的建模成功率明显降低,移植物体积均显著下降(P<0.01)。对照组建模成功的SD大鼠腹膜上的移植物囊肿内壁的上皮、固有膜以及固有膜的基质细胞、腺体样结构都和成熟大鼠的子宫内膜相似,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜表面都有丰富的血管形成。而用药组建模成功的SD大鼠移植物腔内面上皮不发达,固有膜较薄,固有膜的基质细胞、腺体样结构减少,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜血管稀少。各组血清E2,P水平差异无显著性(P>0.05)。结论VEGF反义寡核苷酸腹腔注射可以抑制大鼠子宫内膜的异位种植和生长,但不影响卵巢功能。

超声微泡介导血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制裸鼠膀胱肿瘤

目的探讨利用超声辐照微泡造影剂介导血管内皮生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将24只成瘤裸鼠随机分为4组:UM+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂与VEGF-ASODN混合物,并对移植瘤体用超声波进行辐照;脂质体+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射VEGF-ASODN与脂质体混合物;UM组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂并以同样的条件进行体外超声辐照;单纯对照组每只裸鼠尾静脉注射生理盐水,各组处理每隔2d进行一次,共计5次。观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化SP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数。结果UM+ASODN组裸鼠皮下肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度较对照组降低(P<0.05);与对照组相比,UM+ASODN组肿瘤细胞的凋亡增加(P<0.01),而细胞增殖减少(P<0.05)。结论超声微泡介导的VEGF-ASODN转染能有效抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系HL-60细胞作用的研究

本研究探讨VEGF ASODN抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达作用及其与白血病细胞凋亡的关系。用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGF ODN转染体外培养白血病细胞系HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR检测VEGF mRNA表达,以细胞形态学,凝胶电泳,流式细胞术观察细胞凋亡。结果显示:反义组与错义组、空白对照组相比,在细胞增殖抑制率和VEGF mRNA的表达水平方面均具有显著性差异(p<0.05);错义组与空白对照组相比无统计学差异(p>0.05)。反义组可见细胞皱缩,颗粒增多,核固缩并出现细胞碎片,而错义组、空白对照组细胞轮廓清楚,胞体透亮,生长旺盛;反义组有凋亡梯形带,错义组和空白对照组仅见1条DNA条带;反义组细胞凋亡率达19.46%,与错义组、空白对照组相比具有显著性差异(p<0.05);错义组与空白对照组相比,无统计学差异(p>0.05)。VEGF ASODN联合VP16的细胞凋亡率与等同条件单用VP16组相比有统计学差异(p<0.05);且凋亡率具有时间和剂量依赖关系。结论:VEGF ASODN能抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达,诱导白血病细胞的凋亡,抑制增殖,且增强VP16对白血病细胞诱导凋亡作用,两者联合效应具有相加作用。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法:于2001-05/2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达,强阳性为,弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达,计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果:30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量:对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7.83±0.78),(4.49±0.43)和(7.73±0.69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内,在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性,而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.1594±0.025)低于对照组[(0.4020±0.032),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.3805±0.030),P<0.01]。④血管内皮生长因子164/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.3073±0.021)低于对照组[(0.8780±0.029),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.8481±0.020),P<0.01]。结论:血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗肺癌的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸对C57BL 6小鼠肺癌的抑制作用。方法 制作C57BL 6小鼠皮下肺癌模型 30只 ,分为VEGF反义寡核苷酸 (ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸 (SODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后 2 4h内 ,用ASODN及SODN皮下注射治疗 ,对照组只注射生理盐水 ,观察小鼠肿瘤的生长情况以及组织形态学改变。标本常规石蜡切片 ,HE染色。结果 对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤重分别为 (7.83± 0 .78)g、(4 .4 9± 0 .4 3)g和 (7.73± 0 .6 9)g。VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为 4 2 .7%、5 .9%。结论 原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制Lewis肺癌的血管形成

目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制Lewis肺癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的效应。方法将人工合成的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)、正义寡核苷酸(SODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,检测Lewis肺癌细胞中VEGF蛋白的表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况。结果VEGF-ASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF蛋白的表达,而且可以通过抑制VEGF的表达抑制内皮细胞的生长。结论VEGF反义寡核苷酸抑制肺癌细胞表达VEGF,有望成为肺癌基因治疗的一种新的治疗手段。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制胆囊癌血管生成的研究

目的探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growthfactor,VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)转染对人胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠移植瘤的VEGF表达和血管形成的影响。方法裸鼠接种GBC-SD细胞建立移植瘤模型,随机分为A、B、C三组,各组裸鼠在接种1周后,分别给于200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGFSODN100μg+Oligofectamine0.5μl及VEGF ASODN100μg+Oligofectamine0.5μl,每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,各组移植瘤中VEGF表达及微血管密度(MVD)变化。结果三组裸鼠3周时的成瘤率,C组显著低于A、B两组(P<0.05),6周时各组的成瘤率无差异。各组移植瘤6周时的体积和瘤重相比C组显著低于A、B两组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B两组移植瘤VEGF表达及MVD均无显著性差异(P>0.05),而C组移植瘤VEGF的表达较A、B两组明显减弱(P<0.05),MVD明显小于A、B两组(P<0.05)。结论VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF在蛋白水平的表达,减少裸鼠移植瘤中血管的形成,降低微血管密度。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗糖尿病视网膜病变实验研究

采用血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸治疗VEGF转基因鼠和硫尿嘧啶诱导的糖尿病视网膜病变鼠模型，观察反义寡核苷酸对糖尿病视网膜病变新生血管的抑制作用．并对两者的治疗效果进行比较，以进一步探讨糖尿病视网膜病变的发病机制。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制甲状腺癌血管生成的效应

目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制甲状腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达及内皮细胞生长的效应。方法设计合成靶向VEGF的ASODN转染人髓状甲状腺癌细胞系(TT)细胞,并制备相应条件培养基作用内皮细胞ECV304,设正义寡核苷酸(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,RT PCR、免疫细胞化学法检测TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达,四氮唑蓝法检测TT和ECV304细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测ECV304细胞凋亡状态。结果ASODN组TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达显著低于SODN和对照组(P<0.01),但IR差异无统计学意义(P>0.05);各转染组ECV304细胞IR差异亦无统计学意义(P>0.05);而经各ASODN组TT细胞条件培养基作用的ECV304细胞生长明显受抑,IR(分别为0.21±0.03、0.31±0.01、0.42±0.22)显著高于SODN组(0.05±0.03,P<0.01),并伴明显细胞凋亡,上述效应呈浓度依赖性。结论ASODN可通过特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对人白血病细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN)对人白血病细胞系VEGF表达的影响。方法 将VEGFAS ODN与K5 6 2和HL 6 0细胞共孵育 ,采用RT PCR技术、免疫组化方法以及ELISA法观察VEGFAS ODN对人白血病细胞系VEGFmRNA和蛋白水平的影响。应用MTT法观察VEGFAS ODN作用后的白血病细胞培养上清对人脐静脉血管内皮细胞 (ECV30 4 )增殖的影响。结果 K5 6 2细胞和HL 6 0细胞经VEGFAS ODN(2 .5～ 15 .0 μmol L)作用 2 4h后 ,VEGFmRNA的表达量呈剂量依赖性减少 ,而其表达量不受VEGF错义ODN的影响 ;当加入 5 .0 μmol LVEGFAS ODN作用 2 4h后 ,细胞内及其培养上清液中VEGF蛋白水平显著减少 ,其培养上清对ECV30 4细胞的促增殖作用减弱 ,而错义ODN处理组白血病细胞VEGF蛋白水平及其作用未见明显改变。结论 VEGFAS ODN在体外能够抑制人白血病细胞VEGF的表达。

缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸抑制HBx诱导的血管内皮生长因子的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)诱导的人肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用。方法 用编码HBx基因全长的pHA-HBx质粒转染肝癌HepG2细胞;Western Blot方法鉴定HBx基因的整合和表达;用转染后的细胞建立表达HBx的裸鼠人肝癌模型。实验组用HIF-1α反义寡核苷酸作肿瘤组织内注射,对照组以相同体积的生理盐水作瘤体注射,观测不同时间点裸鼠肿瘤的生长状况。采用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGF表达水平和微血管密度。结果 HBx基因成功整合人肝癌HepG2细胞基因组并表达;实验组经反义寡核苷酸处理后肿瘤体积和重量均低于对照组,两组间差异有显著性意义(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α表达下调;实验组肿瘤组织中VEGF表达为(21.6±6.7)％,低于对照组的(78.6±10.2)％(P<0.01),微血管密度为19.75±7.38,低于对照组的36.64±12.25(P<0.01)。结论 HIF-1α反义寡核苷酸肿瘤组织注射可以抑制肝癌组织中HBx诱导的VEGF表达,抑制表达HBx的肿瘤生长。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制肝癌的血管形成

目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸 (ODN)是否可以抑制人肝癌细胞系VEGF的蛋白表达 ,进而抑制肝癌的血管形成 ,探讨肝癌基因治疗的新方法。方法 人肝癌细胞系 772 1能表达VEGF ,其培养上清液对牛主动脉内皮细胞 (BAEC)的生长有促进作用。采用人工合成反义、正义ODN分别加入 772 1细胞培养液 ,比较 772 1细胞VEGF的表达以及各上清液刺激内皮细胞生长的受抑情况 ,即可了解ODN通过抑制VEGF的表达抑制肝癌的血管形成情况。结果 VEGF反义ODN明显抑制了人肝癌细胞VEGF的表达 (灰度值 :反义组 12 2 6 ,正义组 10 1 3 ,对照组 10 6 3,P <0 0 1) ,且抑制率与剂量呈线性关系 (当剂量为 1、2 5、5、10 μmol/L时抑制率分别为 :6 3 2 %、82 4%、2 10 0 %、2 87 5 % )。结论 VEGF反义ODN能够抑制肝癌的血管形成 。

反义寡核苷酸抑制肝癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的 研究血管内皮生长因子 (vascular endothelialgrowth factor,VEGF)反义寡核苷酸 (ODN )抑制人肝癌细胞系 VEGF的表达 ,探讨肝癌基因治疗的新方法 .方法 人肝癌细胞系 772 1能表达 VEGF,采用人工合成反义、正义 ODN分别作用于 772 1细胞 ,免疫组化图像分析方法比较各处理组VEGF的表达情况 ,即可了解 VEGF反义 ODN抑制肝癌的血管形成情况 .结果 VEGF反义 ODN确有抑制人肝癌细胞 VEGF表达的作用 .结论 VEGF反义 ODN能够抑制肝癌血管的形成 ,其有望成为抗肝癌的新一代基因治疗药物 .

反义寡核苷酸与血管内皮生长因子对血管成形术后再狭窄的影响

目的探讨反义寡核苷酸和血管内皮生长因子联合应用对血管成形术后再狭窄的影响。资料与方法中国大耳白兔56只,分为8组,每组7只;髂总动脉球囊拉伤后,分别给予反义寡核苷酸或/和血管内皮生长因子,取病理切片对再狭窄程度进行评价;采取免疫组织化学及Western Blotting以细胞增殖抗原的表达对反义寡核苷酸和血管内皮生长因子的效果进行评价。结果反义寡核苷酸与血管内皮生长因子各组均能减轻球囊损伤后再狭窄,反义寡核苷酸与血管内皮生长因子联合应用显著减轻再狭窄且两者间无交互作用(P>0.7)。结论反义寡核苷酸与血管内皮生长因子联合应用显著减轻再狭窄且两者之间无交互作用。

存活素与血管内皮生长因子反义寡核苷酸对人甲状腺髓样癌裸鼠模型的作用

目的探讨存活素与血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人甲状腺髓样癌(MTC)裸鼠模型的作用。方法构建的28只人甲状腺髓样癌裸鼠模型,随机分配到对照组和治疗组。对照组包括未处理组,正义寡核苷酸(SODN)组(VEGFSODN组和存活素SODN组)和SODN联合组;治疗组包括ASODN组(VEGFASODN组和存活素ASODN组)和ASODN联合组。各组每日一次瘤内注射相应处理液,连续7d。治疗结束后1周末,杀死全部瘤鼠,切取瘤体,测算瘤重和抑瘤率以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价组织病理构造、VEGF与存活素蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示,治疗组血管生成明显降低。此外,相对于对照组,治疗组具有显著的VEGF和存活素低表达、高凋亡、低瘤重和高抑瘤率特点(均P<0.01),并且ASODN联合组较ASODN组更为显著(均P<0.05),而对照组间和SODN组间未见上述各特点的统计学差异。结论在裸鼠MTC模型,人甲状腺髓样癌存活素和VEGF的单或双靶向基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果,并且联合治疗更为突出。这为发展甲状腺髓样癌的基因治疗提供了实验依据。