黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 :探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :以离体培养的人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcells ,HUVEC)为模型 ,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达 ,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果 :黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长 ,增加细胞周期中S期细胞的数目 ,尤以复方作用明显 (P <0 0 5或P <0 0 0 1)。同时 ,各给药组均能上调VEGF的表达 ,而对照组VEGF仅有微弱表达 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用 ,两药配伍应用时具有协同效应 ,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。

神经生长因子对人血管内皮细胞增殖作用的研究

目的:研究神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人血管内皮细胞(Human vascular endothelial cell,HEVC)增殖作用的影响。方法:将NGF作用于体外培养的HEVC304,利用酶联免疫反应检测其增殖率,利用免疫组织化学的方法检测对增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达和标记指数。结果:NGF作用组较对照组其细胞增殖率明显增加(P<0.001),NGF中和抗体组其细胞增殖率下降明显(P<0.05)。NGF作用组较对照组能明显增加HEVC对PCNA的表达和PCNA标记指数(P<0.05),NGF中和抗体组其PCNA表达和PCNA标记指数明显减少(P<0.05)。结论:NGF能明显促进HEVC的增殖。

腺病毒介导的VEGF-B基因促血管内皮细胞增殖作用的研究

为观察腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子B(VEGF B)基因体外转染对血管内皮细胞的促增殖作用 ,构建编码人VEGF B基因的复制缺陷的重组腺病毒载体 ,体外转染鼠主动脉血管内皮细胞 (RAECs) ,应用RT PCR和Westernblot检测外源VEGF B的表达 ,应用四唑盐 (MTT)观察转染后RAECs的增殖。结果发现 ,RAECs可有效地被重组腺病毒载体感染 ,并能成功转录和表达VEGF B基因和蛋白 ,在转染后细胞培养上清中检测到VEGF B蛋白的表达 ,对RAECs有显著促增殖作用。提示重组腺病毒载体介导的人VEGF B基因有血管新生作用 ,可用于缺血性心脏病的治疗。

酸性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的 探讨不同浓度的aFGF对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞生长的影响。方法 通过组织块培养法获取主动脉内皮细胞。将浓度为 5ng/ml,10ng/ml,2 0ng/ml的aFGF分别加入内皮细胞的培养液中作为实验组(Ⅰ～Ⅲ组 ) ,不加aFGF的组作为对照组。分别在 2 4h、48h和 72h应用MTT法进行细胞计数。结果 从大鼠主动脉成功地获取了内皮细胞。 3天内 ,实验组和对照组的主动脉内皮细胞都有不同程度的增殖 :培养 2 4h ,实验各组与对照组比较P >0 .0 5 ,无统计学差异 ;48h和 72h时 ,Ⅱ、Ⅲ组与对照组以及与Ⅰ组两两比较 ,有非常显著的差异 (P <0 .0 0 1) ;各时间段内 ,Ⅰ组与对照组 ,Ⅲ组与Ⅱ组比较 ,细胞数改变未见差异 (P >0 .0 5 )。结论 一定浓度的aFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用 ,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大的帮助。

生长因子诱导的血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 研究生长因子对血管内皮细胞增殖活动的诱导和刺激作用。以进一步探讨生长因子在视网膜新生血管疾病中所起的作用。方法 采用血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）和磁性成纤维生长因子（ｂＦＧＦ）诱导高体培养的血管内皮细胞的增殖。研究ＶＥＧＦ及ｂＦＧＦ对血管内皮细胞ＤＮＡ合成、细胞生长和细胞周期的调控，以及两种因子的协同效应。结果 ＶＥＧＦ及ｂＦＧＦ均可显著刺激血管内皮细胞的增生，其刺激效应与生长因子浓度呈剂量依赖关系。共同作用时，具有协同效应。两种因子均可显著增加３Ｈ－ＴｄＲ的掺入值，其刺激作用与浓度呈剂量依赖关系，共同作用时亦具有协同效应。ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ均可显著地增加Ｓ期细胞的比例。结论 ＶＥＧＦ及ｂＦＧＦ均可显著地刺激内皮细胞的增殖，促进细胞ＤＮＡ的合成。两种因子联合应用时，具有协同效应。提示：两种生长因子在视网膜新生血管的发生和发展中可能具有一定作用，且存在因子间的协同效应。

碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的:探讨不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人眼眶内微血管内皮细胞生长的影响。方法:通过不锈钢筛网2次过滤法分离得到眼眶内微血管内皮细胞.将浓度为20,40,80,160μg/L的bFGF分别加入内皮细胞培养液中作为实验组(I-IV)。不加bFGF的作为对照组,分别在24,48,72h,应用MTT法进行细胞计数。结果:用不锈钢筛网两次过滤法成功的分离到内皮细胞。3d内,实验组和对照组的内皮细胞都有不同程度的增殖。培养24h,实验组与对照组比较,P>0.05,无统计学差异;48h,III,IV与对照组及I,II组比较,差异非常显著(P<0.01);72h时,III组与其它实验组及对照组比较,差异非常显著(P<0.01)。结论:一定浓度的bFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用,其中以80μg/L的浓度最显著,可能对早期羟基磷灰石眶内植入血管内生延迟有较大的治疗作用。

没食子酸抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖作用研究

目的探讨没食子酸对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的抑制作用。方法 MTT比色法检测没食子酸对HUVECs增殖的抑制作用;用AO/EB荧光双染色法检测细胞凋亡和坏死;激光共聚焦显微镜检测没食子酸对F-actin和细胞核的影响。结果浓度为40、60、80和100μg/mL的没食子酸明显抑制了HUVECs细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);荧光双染色法结果显示没食子酸诱导HUVECs发生凋亡和坏死,且随没食子酸浓度的增加,死亡细胞的比例显著增多;荧光染色显示细胞骨架蛋白F-actin的细丝发生断裂或重排,细胞核发生边集。结论没食子酸具有显著抑制HUVECs增殖,诱导其凋亡和坏死的作用;此外,没食子酸还能破坏细胞骨架蛋白F-actin,这与抑制细胞迁移密切相关。

不同浓度纳米银对血管内皮细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度纳米银对体外培养血管内皮细胞增殖的影响。方法:取3只5 d龄SD大鼠,分离心脏,在体外酶消化法分离血管内皮细胞并进行培养,第3代细胞用于实验。除空白对照组外,血管内皮细胞分别于含0.5,0.25,0.125,0.0625,0.03125 g/L纳米银的培养基中进行培养。24 h后倒置显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数,采用甲基噻唑基四唑比色法和流式细胞术检测血管内皮细胞的增殖情况,并采用LDH法检测急性细胞毒性。结果:与空白对照组比较,不同浓度的纳米银组血管内皮细胞细胞数减少,纳米银浓度为0.25 g/L时,对血管内皮细胞的抑制作用最明显,其他浓度彼此间无统计学差异。不同浓度纳米银对血管内皮的增殖均有一定抑制作用,但并没有急性细胞毒性。结论:纳米银对体外培养的血管内皮细胞有明显的抑制增殖作用,其作用与纳米银的剂量有关。

清营Ⅰ号药物血清促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的:观察清营Ⅰ号含药血清对培养的HUVEC细胞增殖的影响。方法:应用血清药理学方法和MTT法,分FBS(胎牛血清)组、RS(正常家兔血清)组、RDS(丹参血清)组和RQS(清营I号血清)组,每组分5%、10%和15%3种浓度进行比较研究。结果:(1)RS组、RDS组和RQS组不同浓度细胞损伤无影响。(2)RQS能够影响HUVEC代谢MTT。(3)同种浓度RQS组OD值明显高于FBS、RS、RDS各组;10%、15%浓度组明显高于5%的OD值。而10%、15%RQS浓度组与FBS、RS3种浓度组比较,均呈显著性差异(P<0.01)。结论:清营Ⅰ号药物血清可明显增强VEC分裂、增殖,且增殖程度与浓度有关。

cfa-miR-21对犬血管内皮细胞增殖、迁移的调控作用及机制

为研究犬脐带间充质干细胞外泌体(UC-MSC-Exo)中携带的cfa-miR-21促进犬血管内皮细胞(VECs)增殖及迁移的作用机制,该实验以犬VECs为模型,首先通过qRT-PCR筛选出cfa-miR-21最佳转染方案,然后使用EdU法和划痕实验,检测cfa-miR-21对细胞的增殖及迁移的调控作用;通过生物信息学分析软件预测靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统和qRTPCR进行验证,再通过Western Blot检测下游ERK信号通路蛋白的表达情况。实验结果表明,cfa-miR-21可促进犬VECs的增殖和迁移,其可通过靶向作用于SPRY1,从而激活ERK信号通路,发挥其在血管生成中的生物功能。该研究为miRNAs在血管生成中的作用提供了见解,揭示了间充质干细胞(MSCs)的功能机制,并可能有助于未来的药物开发。

越婢汤含药血清对阿霉素损伤的人脐静脉血管内皮细胞的干预作用

目的基于小窝蛋白-1(Cav-1)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路,探讨越婢汤含药血清对阿霉素(ADR)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)模型的作用机制。方法制备越婢汤含药血清及空白血清,体外培养HUVEC,采用ADR诱导建立HUVEC损伤模型,将细胞分为对照组、模型组、越婢汤组(2.5%、5%、10%、20%含药血清),给予相应药物处理24 h。细胞增殖-毒性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测Cav-1/eNOS信号通路相关蛋白表达,免疫荧光法检测细胞Cav-1表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液Cav-1的含量。结果与对照组比较,模型组细胞增殖及迁移能力降低(P<0.05),细胞内Cav-1、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)、血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)表达下降(P<0.05),细胞上清液Cav-1含量上升(P<0.05)。与对照组比较,各浓度越婢汤含药血清对HUVEC细胞活力无明显影响(P>0.05)。与模型组比较,越婢汤各组能促进细胞迁移(P<0.05);2.5%浓度的含药血清对细胞Cav-1等蛋白表达无影响(P>0.05);5%、10%、20%浓度含药血清能增加细胞内Cav-1、p-eNOS、VE-cadherin蛋白的表达(P<0.05),下调细胞上清液Cav-1的含量(P<0.05)。结论越婢汤含药血清可以降低ADR对HUVEC细胞的损伤,促进HUVEC细胞的增殖、迁移,其保护作用可能与调控Cav-1/eNOS信号通路有关。

双波长脉冲染料激光抑制血管瘤内皮细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨双波长脉冲染料激光对血管瘤内皮细胞(HemECs)的增殖和凋亡的影响。方法体外分离培养HemECs并随机分为4组:脉冲染料激光组(PDL,595 nm波长)、Nd∶YAG激光(1064 nm波长)组、双波长组(595 nm PDL+1064 nm Nd∶YAG)、对照组(不照射激光)。于照射结束后第1、3、7天,采用CCK-8法检测各组HemECs的增殖能力,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测新生血管生成相关蛋白VEGF、bFGF的表达水平。结果激光照射后HemECs细胞较对照组细胞逐渐变长、变疏。照射后第1天,与对照组相比,双波长组HemECs的增殖抑制率显著升高(P=0.015),而PDL组、Nd∶YAG组的增殖抑制率均无明显改变(均P>0.05);照射后第3、7天,与对照组相比,PDL组、Nd∶YAG组及双波长组的HemECs的增殖活性、VEGF和bFGF蛋白表达水平均显著降低(均P<0.001),增殖抑制率与凋亡率均显著升高(均P<0.001),且双波长组较PDL组、Nd∶YAG组更明显(均P<0.05)。结论双波长脉冲染料激光可显著抑制HemECs增殖、促进其凋亡,降低血管生成因子水平,其作用较595 nm PDL或1064 nm Nd∶YAG单波长激光照射更明显。

映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。

水蛭素对缺氧诱导心脏微血管内皮细胞间质转分化的作用及机制研究

目的探讨通络药物水蛭素对缺氧诱导的人心脏微血管内皮细胞(HCMECs)间质转分化(EndMT)的作用及可能机制。方法取常规培养的HCMECs细胞,随机分为对照组、缺氧组、水蛭素组(包括0、20、40、80、100μg/ml 5个浓度)。对照组常规培养不做任何处理,缺氧组置入低氧培养箱72 h,水蛭素组预加入Hirudin工作液,4 h后置入低氧培养箱72 h。MTS比色法检测HCMECs增殖能力;倒置显微镜观察HCMECs形态;免疫荧光鉴定HCMECs间质转分化情况,Western-blot检测内皮间质转分化相关蛋白:包括内皮细胞标记血小板—内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin),间质细胞标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad同源物2/3(Smad2/3)、锌指转录因子(snail)等相关信号通路的蛋白表达。结果MTS法检测显示,缺氧显著抑制细胞活性(P<0.01),水蛭素在20~100μg/ml浓度范围内可提高细胞活性,且呈现浓度依赖性,当浓度为100μg/ml时细胞活性最强(P<0.01)。各组细胞培养72 h后,倒置显微镜下观察发现:对照组细胞呈铺路石样或鹅卵石状结构,缺氧组细胞由鹅卵石状结构变为分散的长梭形,接近成纤维细胞形态,水蛭素组长梭形细胞形态明显改善,细胞恢复鹅卵石样。Western-blot与免疫荧光结果显示:与对照组比较,缺氧组CD31、VE-cadherin蛋白水平降低(P<0.01),且vWF表达减少,α-SMA、FSP-1蛋白水平升高(P<0.01),且vimentin表达增强;与缺氧组比较,水蛭素明显增加CD31、VE-cadherin蛋白表达(P<0.01),并增强vWF表达,下调α-SMA、FSP-1蛋白表达(P<0.01),并减弱vimentin表达;与对照组相比,缺氧组信号通路HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达均升高(P<0.01),与缺氧组比较,水蛭素下调HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达(P<0.01)。结论水蛭素可以改善缺氧诱导的HCMECs细胞发生EndMT,其机制可能与调控HIF-α/TGF-β1/smad/snail通路有关。

玄参提取物对糖尿病视网膜病变微血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制

目的:探讨玄参提取物抑制微小RNA-646(miR-646)改善微血管内皮细胞损伤缓解糖尿病视网膜水肿的影响及其作用机制。方法:根据简单随机化法将人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)细胞分为对照组、模型组(30 mmol/L葡萄糖)、观察组(30 mmol/L葡萄糖+100μg/mL玄参提取物组)、模型+Anti-NC(转染Anti-NC+30 mmol/L葡萄糖)、模型+Anti-miR-646(转染Anti-miR-646+30 mmol/L葡萄糖)组;将30只小鼠根据简单随机化法分为对照组、模型组(60 mg/kg的链脲佐菌素)、观察组(60 mg/kg的链脲佐菌素+100 mg/kg-的玄参提取物),每组10只。比较各组细胞增殖,迁移及miR-646、血管内皮生长因子A(VEGFA)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达;比较各组小鼠视网膜组织ICAM-1、CD31表达及视网膜组织水肿情况。结果:细胞实验结果显示,与对照组比较,模型组细胞miR-646、ICAM-1表达显著升高,VEGFA、CD31表达显著下降(均P<0.05);与模型组比较,观察组细胞miR-646、ICAM-1表达显著降低,VEGFA、CD31表达显著升高(均P<0.05);与模型+Anti-NC组比较,模型+Anti-miR-646组细胞增殖率、迁移细胞数及VEGFA表达显著增加,miR-646表达及凋亡率显著降低(均P<0.05)。动物实验结果显示,与对照组比较,模型组小鼠视网膜组织中miR-646、ICAM-1表达显著升高,VEGFA、CD31表达显著下降(均P<0.05),同时小鼠视网膜组织水肿情况加重;与模型组比较,观察组小鼠网膜组织中miR-646、ICAM-1表达显著降低,VEGFA、CD31表达显著升高(均P<0.05),同时小鼠视网膜组织水肿明显得到缓解。结论:玄参提取物可能通过miR-646/VEGFA机制调节HRMEC细胞增殖、迁移和凋亡,改善缓解糖尿病视网膜水肿。

布托啡诺调节缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨布托啡诺(Butorphanol)对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响及作用机制。方法使用0.5~80.0μg/mL的布托啡诺分别处理HeLa细胞24 h,细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖,计算IC50值。将HeLa细胞分为对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)过表达组(HIF-1α组)、布托啡诺组(Butorphanol组)、Butorphanol+HIF-1α组,平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、小管形成实验分别检测HeLa细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成,Western blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,裸鼠移植瘤实验检验布托啡诺对宫颈癌移植瘤生长的影响。结果过表达HIF-1α可显著促进HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并上调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺可有效抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成拟态形成及宫颈癌移植瘤生长,并下调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺对宫颈癌细胞的抑制作用可被HIF-1α的过表达减弱。结论布托啡诺通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成,抑制宫颈癌的生长。

参松养心胶囊对高糖高脂损伤人微血管内皮细胞的保护作用机制研究

目的探讨高糖高脂诱导的微血管内皮细胞损伤及参松养心胶囊的干预作用。方法2022年6月—2023年2月于络病理论创新转化全国重点实验室开展实验。将人微血管内皮细胞随机分为正常组、模型组和参松养心低、中、高剂量组(0.25、0.5、1.0 mg/L)。除正常组外,其余4组采用高糖高脂建立人微血管内皮细胞损伤模型,并进行相应干预。采用ELISA检测细胞活性,荧光显微镜检测细胞线粒体膜电位,Western-blot检测DRP1、MFN2、GRP78、NF-κB p65、P-selectin、E-selectin、IL-6的蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的细胞生存活性和线粒体膜电位显著降低,DRP1、GRP78、NF-κB p65、P-selectin、E-selectin、IL-6蛋白表达明显增高,MFN2蛋白表达明显降低(P<0.01或0.05)。与模型组比较,参松养心各剂量组的细胞生存活性和线粒体膜电位均显著升高(P<0.01),GRP78、NF-κB p65、E-selectin的蛋白表达显著降低(P<0.01或<0.05);参松养心低、高剂量组的MFN2蛋白表达显著升高(P<0.05),IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05);参松养心中、高剂量组的DRP1、P-selectin蛋白表达显著降低(P<0.05或<0.01)。结论参松养心胶囊可提高微血管内皮细胞的生存活性,维持线粒体稳态,减轻内质网应激,抑制炎性反应,降低黏附分子水平,从而发挥保护高糖高脂诱导损伤的微血管内皮细胞的作用。

二十烷二酸通过结合PPARδ介导ANGPTL4表达增多对人视网膜血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 研究二十烷二酸(C20DC)对人视网膜内皮细胞(HREC)增殖、迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法 寻找C20DC干预人视网膜色素上皮-19(ARPE-19)细胞与HREC的最佳工作浓度,分别为30 mg·L^(-1)与25 mg·L^(-1)。将HREC分为C20DC处理组(C20DC干预HREC)和对照组[二甲基亚砜(DMSO)干预HREC],通过细胞增殖和迁移实验观察C20DC对HREC迁移及增殖能力的影响;采用分子对接方法模拟C20DC与PPARδ的结合能力;将ARPE-19细胞设为C20DC+ARPE-19组(C20DC干预ARPE-19细胞)与DMSO+ARPE-19组(DMSO干预ARPE-19细胞),采用Western blot检测ARPE-19细胞中PPARδ和血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)蛋白,以及HREC中ANGPTL4蛋白表达水平;采用ELISA定量分析ARPE-19细胞与HREC中ANGPTL4蛋白表达水平。结果 与对照组相比,C20DC处理组细胞增殖、迁移能力均显著提高(均为P<0.05),且可与PPARδ结合稳定(结合能为-7.2 kcal·mol^(-1));Western blot检测结果提示,C20DC+ARPE-19组细胞中ANGPTL4蛋白表达量高于DMSO+ARPE-19组,差异有统计学意义(P<0.05),两组PPARδ受体蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);C20DC处理组细胞中ANGPTL4蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA定量分析检测结果显示,C20DC+ARPE-19组细胞中ANGPTL4表达量高于DMSO+ARPE-19组(P<0.001);C20DC处理组细胞中ANGPTL4的表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 C20DC可结合PPARδ促进ANGPTL4蛋白的表达,导致视网膜相关细胞(HREC与ARPE-19细胞)增殖与迁移能力增强,其作用机制可能与早产儿视网膜病变新生血管生成增多有关。

丙泊酚减弱CCL4诱导脑微血管内皮细胞促炎和细胞毒作用机制研究

目的 探讨趋化因子配体4(CCL4)诱导脑微血管内皮细胞炎症和细胞毒作用,以及丙泊酚对CCL4诱导效应的拮抗作用。方法 将体外永生化人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3分为为对照组、CCL4组、丙泊酚+CCL4组细胞。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖活力,细胞克隆形成实验分析细胞克隆形成能力,流式细胞术Annexin V/PI双染检测细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞细胞炎症基因、血栓形成相关基因的表达情况,酶活性检测试剂盒检测环氧化酶-2(COX-2)及凝血酶活性。结果 与对照组细胞比较,CCL4组细胞增殖活力显著减弱,细胞克隆形成能力减低,凋亡细胞增加,差异有统计学意义(P<0.001);与CCL4组,丙泊酚+CCL4组细胞增殖活力显著上调,细胞克隆形成能力增加,凋亡细胞减少,差异有统计学意义(P<0.001)。qPCR检测结果显示,与对照组比较,CCL4组炎症相关基因白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及COX-2基因表达上调,血栓形成基因Thrombin、Factor 8、VWF及TXA表达增加,COX-2酶及凝血酶活性增加,差异有统计学意义(P<0.001)。丙泊酚可明显抑制CCL4对hCMEC/D3的炎症相关基因及血栓形成基因的促进表达作用,以及CCL4对hCMEC/D3的COX2酶及凝血酶活性。结论 丙泊酚可减轻CCL4对脑微血管内皮细胞的细胞毒作用,并拮抗其促炎和促血栓形成基因表达。