超声造影参数与乳腺癌病理分级及组织血管内皮生长因子、人表皮生长因子受体-2表达水平的关系

目的:探究超声造影(CEUS)参数与乳腺癌(BC)病理分级及组织血管内皮生长因子(VEGF)、人表皮生长因子受体-2(Her-2)表达水平的关系。方法:回顾性分析106例BC患者的临床资料,所有患者均行CEUS检查,分析其相关参数[上升支斜率(K)、梯度(G)、峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、曲线下面积(AUC)]与病理分级、组织VEGF、Her-2表达水平的关系。结果:106例BC患者病理学及免疫组化检查结果显示,病理组织学分级:Ⅰ级39例(36.79%),Ⅱ级42例(39.62%),Ⅲ级25例(23.58%);VEGF阳性69例(65.71%),HER-2阳性81例(77.14%)。不同病理分级、组织VEGF、Her-2表达组患者CEUS参数比较,差异有统计学意义(均P<0.05);且病理分级Ⅲ级者K、PI、AUC均高于Ⅰ、Ⅱ级者,G、TTP均低于Ⅰ、Ⅱ级者(均P<0.05);组织VEGF、Her-2表达阳性者K、PI、AUC均高于阴性者,G、TTP均低于阴性者(均P<0.05);Spearman相关性分析显示,CEUS参数K、PI、AUC与病理分级、组织VEGF、Her-2表达呈明显正相关(均P<0.05),与G、TTP呈明显负相关(均P<0.05)。结论:CEUS相关定量参数水平与BC患者病理组织分级、VEGF、Her-2阳性表达均存在一定的联系,可为疾病早期的诊断、治疗及预后预测提供客观依据。

创面血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体2水平表达与Ⅱ期肛裂患者术后创面愈合时间的关系研究

目的探讨创面血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-2表达与Ⅱ期肛裂术后创面愈合时间的关系。方法选取在我院进行手术治疗的Ⅱ期肛裂患者104例为研究对象。术后1周换药时采集创缘肉芽组织检测VEGF、VEGFR-2水平。统计患者术后创面愈合时间,根据患者术后创面愈合时间三分位数分3组,对比3组临床资料及创面VEGF、VEGFR-2水平。分析VEGF、VEGFR-2与术后创面愈合时间的相关性及术后创面愈合时间的影响因素。结果3组创面VEGF及VEGFR-2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);创面VEGF、VEGFR-2水平愈低,其创面愈合时间愈长(P<0.05);VEGF、VEGFR-2与术后创面愈合时间呈负相关(P<0.05);便秘、手术时间、开放切口、创面纵径、创面横径为术后创面愈合时间的独立危险因素,VEGF、VEGFR-2均术后创面愈合时间的独立保护因素(P<0.05)。结论创面VEGF、VEGFR-2水平与Ⅱ期肛裂术后创面愈合时间呈负相关,可通过检测两指标水平判断患者创面愈合情况,为术后治疗方案的完善提供指导。

蒙药香青兰总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带区血管内皮生长因子受体2表达的影响

目的:观察蒙药香青兰总黄酮(total flavones of dracocephalum moldavica,TFDM)对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区血管内皮生长因子2(vascular endothelial growth factor 2,VEGFR2)表达的影响,探讨其对血管生成的作用。方法:SD大鼠线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型,TFDM 50 mg/kg灌胃给药,在手术后第1、3、7、14天4个时相进行取材,免疫组织化学染色观测VEGFR2阳性标记的细胞及新生血管在缺血半暗带区的分布情况,Western blot检测缺血半暗带区VEGFR2的表达情况。结果:免疫组织化学染色结果显示,再灌注术后第3~14天时,TFDM给药组阳性细胞表达数量显著高于模型组(P<0.05),且在微血管、微动脉和微静脉附近表达增多;Western blot检测结果也显示,TFDM给药组VEGFR2表达上调。结论:TFDM可能通过上调VEGFR2蛋白的表达,促进脑缺血半暗带区微血管的生成,改善微循环功能。

酸性成纤维细胞生长因子调控Ang1/Tie2信号通路抑制炎症促进血管内皮细胞功能恢复

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响,以及Ang1/Tie2通路在其中的作用。方法:培养HUVEC细胞,不同浓度脂多糖(LPS)和aFGF刺激HUVEC,CCK-8实验确定刺激浓度,并观察生长活性;细胞划痕实验检测aFGF对HUVEC迁移能力的影响;Westernblot实验检测增殖蛋白PCNA,凋亡蛋白Cleavedcaspase3、Bax,抗凋亡蛋白Bcl2,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10,血管生成相关蛋白CD31和通路相关蛋白Ang1、Tie2的表达水平;免疫荧光实验检测PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31的荧光强度。分离小鼠主动脉,离体培养后进行免疫荧光实验,观察PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31蛋白的荧光强度。结果:CCK-8实验显示LPS抑制HUVEC生长活性,5μg/mL为最适刺激浓度(P<0.01);aFGF促进HUVEC生长活性,其中100ng/mL为最适刺激浓度(P<0.01)。细胞划痕实验提示aFGF促进细胞迁移。Westernblot和免疫荧光实验结果显示,aFGF促进增殖蛋白和血管功能蛋白表达,抑制凋亡蛋白和炎症蛋白表达,上调Ang1/Tie2通路蛋白(P<0.05)。离体血管免疫荧光实验显示aFGF上调PCNA、IL-10以及CD31的荧光强度,下调Cleavedcaspase3和IL-6的荧光强度(P<0.05)。结论:aFGF增强HUVEC生长活性和迁移能力,促进其增殖,抑制其凋亡,并通过调控Ang1/Tie2通路抑制炎症反应,促进血管功能修复。

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的:探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体2(vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2)表达的影响。方法:体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方(0.4 mg/mL)组、中剂量人参三七组方(0.2 mg/mL)组、低剂量人参三七组方(0.1 mg/mL)组,另设碱性成纤维细胞生长因子(bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL)阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加(P<0.05),VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论:促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。

贝伐珠单抗引起肝癌细胞HepG2的血管内皮生长因子受体2上调表达

目的探讨贝伐珠单抗对肝癌细胞HepG2血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)相关受体的影响。方法通过不同浓度的贝伐珠单抗降低培养液中VEGF来模拟低浓度VEGF的肿瘤微环境,RT-PCR、ELISA、Western blotting检测肿瘤细胞VEGF相关受体表达水平的变化。结果细胞培养液的VEGF浓度大幅度下降(P<0.05);可溶性VEGFR2的浓度出现了上升(P<0.05);HepG2细胞VEGF和VEGFR1表达水平无明显变化(P>0.05);VEGFR2表达水平出现了明显的上调(P<0.05)。结论贝伐珠单抗导致了肝癌细胞HepG2大幅度上调了VEGFR2的表达。

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。

可溶性血管内皮生长因子受体2片段的表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨可溶性血管内皮生长因子受体2（sKDR）抑制血管内皮细胞增殖及在血管生成中的作用。方法提取脐静脉内皮细胞（HUVEC）总RNA,扩增KDR基因膜外1~4结构域,构建原核表达载体pQE40-KDR,转化E.coli M15,经IPTG诱导表达,镍离子柱亲和层析纯化后复性,用Western blot检测sKDR蛋白的表达,MTT比色法和鸡胚尿囊膜（CAM）试验分别检测其对HUVEC增殖的影响及其对血管生成的作用。结果经RT-PCR扩增得到了1150 bp左右的sKDR片段,并在pQE40原核表达系统中表达了sKDR蛋白,以包涵体形式存在。纯化后蛋白电泳呈现相对分子质量50000左右的单一条带,纯化蛋白占总蛋白的98%,蛋白含量为80μg/ml。Western blot证实其为重组sKDR蛋白。MTT检测结果显示,sKDR可抑制血管内皮生长因子（VEGF）刺激的HUVEC增殖,并阻滞VEGF诱导的CAM血管增生。结论已成功构建sKDR原核表达载体,并在大肠杆菌M15中获得表达,纯化的sKDR片段具有与VEGF结合的生物学功能,有望成为基因治疗肿瘤血管形成的理想靶点。

重组人促红细胞生成素在脑白质损伤新生鼠经细胞外信号调节激酶信号通路对血管内皮生长因子受体2的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素在脑室周围白质损伤中颅内经细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的影响。方法选取出生后4日龄SD大鼠,采用随机数余数分组法分为假手术组、缺氧缺血组和药物干预组。缺氧缺血和药物干预组幼鼠结扎右侧颈总动脉并吸入6%的氮氧混合气体2 h,假手术组幼鼠仅游离右侧颈总动脉。药物干预组脑室内给予重组人促红细胞生成素1次(0.6 IU/g体质量),假手术组和缺氧缺血组给予等量的生理盐水。用Western blot方法检测术后60、90 min脑组织中的ERK和磷酸化-ERK及术后2、4 d脑组织中的VEGFR2表达情况。结果术后60及90 min,缺氧缺血组磷酸化-ERK较假手术组显著增多(P<0.05),促红细胞生成素干预后磷酸化-ERK表达进一步上调(P<0.05)。术后2 d,缺氧缺血组和假手术组大鼠的VEGFR2表达差异无统计学意义,术后4 d缺氧缺血组VEGFR2表达增加(P<0.05),药物干预组VEGFR2的表达较缺氧缺血组显著增加(P<0.05)。结论促红细胞生成素可能通过影响颅内ERK信号通路调节VEGFR2的表达。

靶向血管内皮生长因子受体2的sKDR抑制血管内皮细胞生长和血管生成的研究

目的研究可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及血管形成的抑制作用。方法利用RT-PCR方法提取KDR胞外血管内皮生长因子(VEGF)结合区编码基因,构建真核分泌型表达质粒PQE40-KDR,即可溶性血管内皮生长因子受体sKDR,脂质体法转染HUVEC,经G418抗性压力筛选稳定转染细胞株。ELISA法检测细胞上清VEGF结合活性,筛选稳定表达sKDR的HUVEC。RT-PCR检测细胞KDR蛋白表达水平,比色法和鸡胚尿囊膜(CAM)试验分别测定sKDR对HUVEC增殖及其对CAM血管生成的影响。结果稳定表达sKDR的HUVEC KDRmRNA表达水平明显高于空质粒对照组,细胞增殖水平下降,新生血管数目减少。提示sKDR可抑制KDR刺激的HUVEC增殖,并遏制KDR诱导的CAM血管生成。结论 sKDR具有与KDR结合的生物学功能,KDR有望成为基因抗血管形成治疗恶性实体肿瘤的新靶点。

蜂毒素对内皮祖细胞微血管形成能力及血管内皮生长因子受体2磷酸化作用的影响

目的观察蜂毒素对内皮祖细胞微血管形成的影响及探讨其作用机制。方法通过MTT比色法、黏附实验、Transwell小室迁移实验、小管形成实验等分别测定蜂毒素对内皮祖细胞的增殖、黏附、迁移、小管形成能力的影响。并且通过Western blot法测定蜂毒素对内皮祖细胞VEGFR1、VEGFR2、AKT、ERK1/2磷酸化的影响。结果随着蜂毒素的作用浓度增大,其对内皮祖细胞增殖的抑制力越强,蜂毒素浓度在2μg/ml以下时,不表现出明显的细胞毒性;与0μg/ml组相比较,蜂毒素1和2μg/ml浓度组对内皮祖细胞黏附、迁移和小管形成具有明显的抑制作用(P﹤0.05);蜂毒素可抑制内皮祖细胞磷酸化作用,并且下调VEGFR2的表达,VEGFR1的表达无明显变化。结论蜂毒素能明显抑制大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的增殖、黏附、迁移、小管形成的能力,其作用机制可能与蜂毒素抑制内皮祖细胞的磷酸化信号转导通路,从而下调VEGFR2蛋白表达。

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素ανβ3表达的影响

目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制。方法实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304。将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体ανβ3表达的变化。结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P<0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体ανβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P<0.01)。结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体ανβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成。

低氧预处理激活神经元细胞JAK/STAT并促进血管内皮生长因子受体-2的表达

目的研究低氧预处理对神经元细胞Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路以及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)表达的影响。方法将培养的小鼠神经元细胞分为细胞对照组、细胞类缺血组和细胞低氧预处理组,细胞类缺血组细胞经95%NO2+5%CO2混合气体处理30min,细胞低氧预处理组细胞于89%N2、l%O2和10%CO2环境中处理8次,每次20min,2d后进行类缺血处理。定量分析各组细胞中VEGFR-2、JAK及STAT蛋白磷酸化(p-STAT)的表达变化。细胞转染JAK特异性小干扰RNA(siRNA),之后进行低氧预处理和类缺血处理,检测p-STAT和VEGFR-2的表达。另取45只BALB/c小鼠分为动物对照组(n=8)、动物对照+血管内皮生长因子(VEGF)组(n=7)、动物脑缺血组(n=8)、动物脑缺血+VEGF组(n=7)、动物低氧预处理组(n=8)和动物低氧预处理+VEGF组(n=7),分析各组海马神经元细胞pSTAT和VEGFR-2的表达,并检测细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase 3)的活化情况。结果与细胞对照组相比较,细胞类缺血组细胞中VEGFR-2mRNA表达显著下调(P<0.05);与细胞类缺血组相比,细胞低氧预处理组细胞VEGFR-2mRNA表达上调(P<0.05),并促进JAK mRNA和蛋白的表达(P<0.05)以及STAT蛋白的活化(P<0.05)。与非特异性转染组相比,JAK沉默组细胞p-STAT和VEGFR-2的表达显著降低(均P<0.05)。在小鼠体内,脑缺血降低p-STAT和VEGFR-2的表达(P<0.05),而低氧预处理则可有效逆转缺氧对p-STAT和VEGFR-2的抑制(P<0.05)。与动物脑缺血+VEGF组相比,动物低氧预处理+VEGF干预可显著抑制caspase3的活化(P<0.05)。结论低氧预处理可以激活神经元细胞JAK/STAT信号通路并诱导VEGFR-2的表达,并增强VEGF的神经保护作用。

兔正畸牙周组织血管内皮细胞生长因子及其受体2的表达

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR-2)在兔正畸牙周组织中的表达及其变化的相关性。方法:35只大耳白兔随机分成7组:正常组及实验1、3、5、7、14、21d组,每组5只。实验组动物于双侧上颌第一磨牙至切牙间拴结镍钛螺簧,0.08N力拉上颌第一磨牙向近中移动。对实验标本行HE染色、VEGF、VEGFR-2免疫组化染色,进行组织学观察和计算机图像分析,对VEGF、VEGFR-2表达的灰度积分进行统计学处理。结果:正常牙周组织中VEGF及VEGFR-2有少量表达。实验1d组～7d组压力区VEGF及VEGFR-2的表达明显高于正常牙周组织,有显著性差异,峰值均出现在5d组;实验1d组张力区VEGF及VEGFR-2表达与正常组相比无明显差别;实验3d组～14d组张力区VEGF及VEGFR-2表达均高于正常牙周组织,VEGF的表达峰值出现在14d组,VEGFR-2的表达在7d组出现峰值。无论在压力区还是在张力区,VEGF与VEGFR-2的表达均存在正相关关系。结论:在兔正畸牙齿移动过程中牙周组织VEGF及VEGFR-2的表达增强,VEGF与VEGFR-2的表达呈正相关;VEGF及VEGFR-2参与了正畸牙齿移动过程中牙周组织的改建过程。

血管内皮生长因子受体2反义寡核苷酸对人乳癌细胞生长的影响

目的探讨血管内皮生长因子受体2(KDR)反义寡核苷酸(asONs)在体外对人乳癌细胞生长的抑制作用。方法采用MTT及Western-blot方法检测4条KDR反义寡核苷酸(asON1、asON2、asON3、asON4)在体外对人乳癌细胞系MCF-7细胞增殖及KDR蛋白表达的抑制作用;asON4作用于MCF-7细胞后,Western-blot检测信号蛋白Bcl-2、Bax、P53表达的变化。结果asON1、asON2、asON3、asON4在体外以剂量依赖方式抑制了MCF-7细胞的增殖,asON1、asON2、asON3、asON4以0.8μmol/L剂量给药54h后,均显著抑制了MCF-7细胞KDR蛋白表达。asON4作用54h后,MCF-7细胞Bcl-2表达下降,Bax、P53的表达无明显改变。结论KDRasONs在体外可抑制乳癌细胞的生长。

血管内皮细胞生长因子受体2基因短发夹RNA介导基因沉默对白血病的抑制(英文)

背景:血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)在血管内皮细胞生长因子的信号转导中有主导效应,并在某些疾病包括白血病的病理性血管生成中起关键作用。另外,白血病细胞分泌的血管内皮细胞生长因子还诱导自身表达VEGFR2,从而维持自身存活、增殖。目的:观察表达VEGFR2短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体Lenti6/shVEGFR2在全身性NOD/SCID白血病模型鼠中的作用。设计:随机、平行对照、开放性实验。单位:中山大学附属第二医院儿科,中山大学生物工程研究中心。材料:实验于2004-05/2006-01在中山大学附属第二医院医学研究中心、中山大学生物工程研究中心完成。分别以HL60,EA·hy926细胞株作为实验用白血病细胞、人血管内皮细胞的来源。Block-iT Lentiviral RNAi Expression System(Invitrogen);human VEGFR2 Mcb(PE标记,R&D)。CD31组化试剂盒(武汉博士德公司),CD33-PE流式细胞荧光标记抗体(BD公司)。方法:①制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链。②构建pU6/shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞,构建表达克隆Lenti6/shVEGFR2,与ViraPowerTM Packaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带表达克隆的慢病毒载体。③pU6/shVEGFR2入门克隆转染和Lenti6/shVEGFR2转导HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制率。④建立HL60白血病模型后观察注入人血管内皮细胞后小鼠骨髓微血管的分布。⑤将NOD/SCID小鼠20只随机分为4组,每组5只:白血病模型鼠组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组及白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。检测各组小鼠的骨髓细胞CD33表达变化、骨髓微血管密度变化及外周血细胞涂片、肝、脾的肿瘤浸润情况,以了解Lenti6/shVEGFR2重组慢病毒对小鼠白血病的作用。主要观察指标:①VEGFR2siRNA鉴定结果。②pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响。③pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较。④慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGF/VEGFR2旁分泌和自分泌的影响。结果:①pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响:VEGFR2siRNAc抑制HL60细胞效率最高,利用其构建的pU6/shVEGFR2入门克隆并转染HL60,抑制细胞效率达84.9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达。②pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较:pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48h细胞抑制率相近,48h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降(P<0.01);而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96h达高峰,120h稍降,变化无显著差异。③慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGF/VEGFR2旁分泌和自分泌的影响:白血病模型组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组小鼠骨髓流式细胞仪HL60检测结果分别为(25.8%±4.9)%,(14.3%±5.1)%,(8.4±2.6)%,三组比较,差异有显著性意义(P<0.05);白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组微血管密度明显小于白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组与其他组相比HL60细胞数最低。结论:①pLenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后持续高水平抑制细胞。重组慢病毒Lenti6/shVEGFR2具有抑制白血病小鼠骨髓血管生成的作用。②VEGFR2 siRNA可阻断白血病HL60细胞VEGF/VEGFR2自分泌的内环路,在体外、动物体内均得到验证。③VEGF/VEGFR2自分泌链和旁分泌链的联合阻断加强了抗白血病效果。

缺氧条件下血管内皮生长因子受体2对视锥细胞的保护作用

目的探讨缺氧条件下血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)对视网膜视锥细胞的作用。方法 8周龄视锥细胞特异性敲除VEGFR2(cone-specific VEGFR2 knockout)小鼠(简称KO小鼠)和野生型C57BL/6小鼠(简称WT小鼠)各6只,右眼均予以玻璃体腔内一次注射8 mmol/L氯化钴(CoCl2)制作缺氧模型,左眼注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照。次日行视网膜电图(ERG)检查光感受器功能,免疫荧光共定位法检测视锥细胞密度,并观察其形态。结果 KO和WT小鼠缺氧侧眼的暗适应ERG a波振幅和b波振幅均下降,与PBS对照侧相比差异有统计学意义(P<0.01),但KO小鼠与WT小鼠之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的明适应ERG a波振幅和b波振幅较对照侧均下降,差异有统计学意义(P<0.01),且KO小鼠较WT小鼠下降更明显(P<0.05,P<0.01),说明视锥细胞功能下降。形态学观察发现KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的视锥细胞均出现变化,表现为密度下降,形态短小,排列疏松、紊乱,且KO小鼠的改变更为显著。结论 VEGFR2在缺氧条件下对视锥细胞具有保护作用。

RNA干扰血管内皮生长因子受体2基因表达提高结肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的研究

目的研究RNA干扰血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因表达对人结肠癌细胞生长的抑制作用和对奥沙利铂的化疗增敏作用。方法构建靶向VEGFR-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染人结肠癌细胞株SW480;通过RT-PCR和Western blot方法检测VEGFR-2 siRNA对人结肠癌细胞株SW480 VEGFR-2mRNA和蛋白表达的影响;采用MTT实验和流式细胞术检测该siRNA及协同奥沙利铂对细胞增殖及凋亡的影响。结果 VEGFR-2 siRNA显著下调结肠癌细胞VEGFR-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。VEGFR-2 siRNA协同奥沙利铂使结肠癌细胞的生长变得更加缓慢,增殖受到明显抑制,细胞抑制及凋亡明显增强(P<0.05)。结论RNA干扰VEGFR-2基因表达可以抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,促进其凋亡,并能提高结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性。

具有血管内皮细胞生长因子受体-2酪氨酸激酶抑制作用的链霉菌次生代谢产物2754R的研究

目的分离鉴定链霉菌I06A-02754发酵液中具血管内皮生长因子受体-2酪氨酸激酶(VEGFR2-CD)抑制活性的强极性次生代谢产物。方法采用大孔吸附树脂、阴离子交换树脂、MPLC、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化;通过UV、IR、HR-ESI质谱、1D-NMR和2D-NMR对其结构进行鉴定,以ELISA法检测其次生代谢产物对VEGFR2-CD的抑制活性;以MTT法检测化合物对肿瘤细胞的抑制活性。结果从发酵液的水溶性部分分离得到一个极性较大的胡桃霉素类次生代谢产物——2754R;其化学结构与胡桃霉素D一致,对VEGFR2-CD表现出一定的抑制活性;MTT实验显示化合物2754R对HepG2细胞、MCF-7细胞和BEL-7402细胞没有明显的抑制活性(IC50>10μmol/L)。结论化合物2754R是具有VEGFR2-CD活性的胡桃霉素类次生代谢产物。

非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子受体2和内皮抑素与临床特征的相关性研究

目的:探究非小细胞肺癌患者外周血血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)和内皮抑素(endostatin,ES)与临床特征的相关性及其意义。方法:选取2009年在上海市第六人民医院心胸外科接受手术治疗的38例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者,用ELISA法检测其术前血清VEGFR-2、ES水平,分析二者相关性,并分析它们与年龄、性别、病理类型、肿瘤最大直径、肿瘤内血管密度(microvessel density,MVD)、临床分期相关性及意义。结果:患者血清ES水平为(20.29±6.10)μg/L,VEGFR-2水平为(7.42±4.28)μg/L,ES表达水平与VEGFR-2表达水平无明显相关性(P>0.05),ES与肺癌病灶内MVD呈直线负相关关系(r=-0.867,r2=0.752),直线回归方程为Y=32.002-0.499X(μg/L)(P<0.001);ES、VEGFR-2表达水平与其他临床特征无明显相关性(P>0.05)。结论:胸外科NSCLC患者外周血ES水平可能影响肺癌病灶内肿瘤内血管密度,从而影响肿瘤的生长,VEGFR-2、ES可能无法单独作为接受手术治疗NSCLC患者分期及预后判断的有效指标。