低氧诱导内皮-间充质转化致肺血管重构及药物干预研究进展

肺动脉高压(PH)是由于内皮功能障碍以及其他因素导致的肺血管重构,进而引起肺动脉压力升高,最终导致右心衰竭甚至死亡。目前临床药物治疗虽可显著改善PH症状,但不能从根本上解决血管重构和右心衰竭问题,故亟待寻找新的治疗手段。内皮细胞在低氧刺激后可获得间充质表型,即内皮-间充质转化(EndMT)。越来越多的研究表明,EndMT在PH肺血管重构中发挥重要作用。低氧条件下诱导End MT的信号通路有:(1)转化生长因子β/骨形态发生蛋白(TGF-β/BMP)信号通路,该通路是由Smad介导,低氧通过抑制或诱导下游介质Smad的磷酸化水平,从而调节EndMT相关基因的表达;(2) Notch信号通路,低氧可增强Jagged/Notch信号通路促进EndMT过程;(3) Wnt/β联蛋白信号通路,低氧增加β联蛋白表达,激活Wnt信号通路,调节EndMT调控基因的表达。低氧诱导的EndMT作为重要致病因素在PH发病中具有重要意义。本综述以期为肺血管重构的改善提供新研究方向,并为PH的防治提供新有效策略。

芪参六味方抑制内皮-间质转化改善自发性高血压大鼠心肌纤维化的作用机制

目的:研究芪参六味方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的作用及机制。方法:构建SHR模型,将大鼠分为模型组、中药低浓度组、中药高浓度组、西药组,另以同龄Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为对照组,每组6只,干预12周。干预12周后进行心功能检测,计算心脏收缩功能指标左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)及心脏舒张功能指标舒张早期跨二尖瓣血流速度(E)与舒张早期二尖瓣环运动幅度(E′)的比值E/E′;干预12周后处死大鼠,取左心室心肌组织,进行苦味酸-天狼猩红染色后观察心肌间质中胶原纤维总面积及Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原面积,计算两种胶原面积比值;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织中心肌纤维化相关指标Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与内皮-间质转化(EndMT)相关血小板-血管内皮黏附分子(CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、人成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测EndMT相关指标CD31、VE-Cadherin、α-SMA、FSP1 mRNA的表达水平。结果:干预12周后,与模型组相比,中药高剂量组降低心肌组织MMP-9蛋白表达(P<0.05),中药高剂量组与西药组均可降低心肌间质Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达水平(P<0.01),改善大鼠心脏舒张功能E/E′(P<0.01),降低EndMT相关蛋白α-SMA、FSP1蛋白表达及VE-Cadherin、α-SMA mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:芪参六味方可以减轻SHR大鼠心肌纤维化程度,改善心脏舒张功能,其作用机制可能与抑制EndMT有关。

SOX9通过转化生长因子β信号通路调节角膜内皮损伤后内皮-间质转化过程

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中SNAIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

可诱导共刺激分子参与自发性高血压大鼠肠系膜血管内皮-间质转化及硬化

目的 探究可诱导共刺激分子(ICOS)与自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜血管内皮-间质转化(EndMT)及硬化的相关性。方法4周龄SHR大鼠(观察组)及同品系WKY大鼠(对照组)各20只,各组再随机分为4组,5只/组。无创血压测量仪动态监测各组大鼠血压情况,并于4、6、10、30周龄进行实验。采用流式细胞术检测大鼠脾脏CD4+T细胞的ICOS表达频数;RT-PCR法检测大鼠肠系膜中ICOS、VE-cad、α-SMA、Col3 m RNA表达;免疫组化技术检测大鼠肠系膜血管VE-cad、α-SMA、Col3及淋巴组织中ICOS、IL-17A、TGF-β的分布情况;ELISA法检测大鼠血浆中IL-17A、TGF-β含量水平;Masson染色观察大鼠肠系膜血管形态变化;Spearman和Pearson相关分析评价ICOS与VE-cad、α-SMA、Col3及胶原容积分数的相关性。结果 SHR大鼠自6周龄开始,与对照组相比收缩压增高(P<0.05);CD4+T细胞ICOS的表达频数高于同期对照组(P<0.05);肠系膜组织中ICOS、α-SMA、Col3、IL-17A和TGF-β的mRNA及蛋白表达相较于对照组均升高(P<0.05),VE-cad mRNA及蛋白则在10周龄时表达下降(P<0.05);自6周龄始SHR大鼠血浆中IL-17A、TGF-β含量水平提升(P<0.05);肠系膜血管硬化程度不断加剧(P<0.05);肠系膜组织中ICOS mRNA及蛋白表达水平与α-SMA、Col3表达水平和血管硬化程度自6周龄始均呈正相关(P<0.05),与VE-cad表达水平自10周龄始呈负相关(P<0.05)。结论 ICOS可能通过介导相关免疫反应在高血压肠系膜血管EndMT及硬化过程中发挥重要作用。

非编码RNA调控内皮间质转化在疾病中的研究进展

内皮间质转化(endothelial to mesenchymal transition,EndMT)是内皮细胞失去其内皮细胞表型和功能而获得间充质细胞表型和功能的过程。在胚胎时期,EndMT是心脏瓣膜、肺动脉和主动脉发育的必须途径。近年来大量研究表明,EndMT也参与如动脉粥样硬化、心肌纤维化、肺动脉高压、脑血管畸形等心血管疾病,以及器官纤维化和肿瘤等疾病的发生发展。非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)是指由基因组转录而成的不编码蛋白质的RNA分子。研究表明,ncRNAs异常表达可以通过调控EndMT参与多种疾病的发生发展,此类具有调控功能的ncRNAs主要包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)。该综述总结了ncRNAs在多种疾病中调控EndMT的分子机制,讨论了其在疾病治疗中的应用前景,为临床EndMT相关疾病治疗提供了新思路。

血府逐瘀汤对肺动脉内皮细胞间质转化的影响及机制

目的 研究血府逐瘀汤对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVECs)内皮间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition, EndMT)的影响,并从TGF-β1/Smad信号通路进一步分析其作用机制。方法 采用TGF-β1(5μg·L^(-1))建立EndMT细胞模型。实验分组为正常组,模型组(TGF-β1,5μg·L^(-1)),血府逐瘀汤低、中、高浓度组(3、10、30 mg·L^(-1)XFZYD+5μg·L^(-1)TGF-β1),SB 431542阳性药组(5μmol·L^(-1)SB 431542+5μg·L^(-1)TGF-β1)。观察细胞形态,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,免疫荧光法观察内皮细胞标志物-血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。蛋白免疫印迹法检测血府逐瘀汤对CD31、α-SMA、Snail、p-Smad2、p-Smad1/5蛋白表达的影响。结果 TGF-β1刺激后,细胞形态由鹅卵石形向梭形转变。CD31、p-Smad1/5表达明显减少,α-SMA、p-Smad2、Snail表达则显著升高。血府逐瘀汤干预后,与模型组相比,细胞形态不同程度的接近于正常组,CD31和p-Smad1/5表达呈上升趋势,α-SMA、p-Smad2、Snail表达呈下降趋势。结论 血府逐瘀汤可以减轻大鼠肺微血管内皮细胞发生内皮间质转化,其作用可能是通过影响TGF-β1/Smad信号通路实现的。

MicroRNA-21对内皮-间充质转化的影响及其在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用

目的:慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以持续气流受限为特征的疾病。本研究旨在探讨COPD小鼠模型是否存在内皮-间充质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT),并初步探讨微RNA(microRNA,miR)-21与EndMT的关系。方法:建立小鼠COPD模型及miR-21基因敲除COPD动物模型(均为香烟烟雾诱导),将小鼠分为3组(n=4):对照组、COPD组和miR-21基因敲除COPD组(miR-21^(−/−)-COPD组)。采用Masson三色染色法观察血管周围胶原纤维沉积的情况,免疫组织化学染色观察肺组织切片中内皮细胞标志物血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)、内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)和间皮细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、神经钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)的表达情况。结果:与对照组相比,COPD组的胶原纤维沉积面积增加(P<0.05),VE-cadherin、eNOS、CD31的表达水平降低(均P<0.05),α-SMA、N-cadherin表达水平均升高(均P<0.05)。与COPD组相比,miR-21^(−/−)-COPD组胶原纤维沉积面积减小(P<0.05),VEcadherin、eNOS、CD31的表达水平均升高(均P<0.05),α-SMA、N-cadherin表达水平均降低(均P<0.05)。结论:香烟烟雾诱导的COPD动物模型存在EndMT过程,miR-21基因敲除可减少COPD小鼠血管周围胶原纤维沉积面积和延缓EndMT过程。

基于内皮/上皮-间质转化探讨瓜蒌薤白汤治疗Ⅱ型心肾综合征的作用机制

目的观察不同剂量瓜蒌薤白汤(Gualou Xiebai Decoction,GXD)对Ⅱ型心肾综合征(typeⅡcardiorenal syndrome,typeⅡCRS)的保护作用,并探讨其初步作用机制。方法通过结扎左冠状动脉前降支复制Ⅱ型心肾综合征大鼠模型,灌胃给药10周后,超声心动图评估各组大鼠的心脏功能;检测血清中生化指标;HE、Masson染色分别观察心肾组织病理改变;碱水解法测定心、肾组织中的羟脯氨酸含量;免疫荧光法、Western blot法检测心脏、肾脏组织中内皮/上皮-间质转化相关蛋白的表达情况。结果GXD低、高剂量组动物心、肾组织脏器指数明显降低(P<0.05,P<0.01),心脏舒张收缩功能指标均有明显提升(P<0.05,P<0.01);血清生化指标AST、LDH、CK-MB、UA、Cr和BUN均有明显改善(P<0.01);心、肾组织的病变程度明显改善,羟脯氨酸含量明显减少(P<0.01);心、肾组织CD31、E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01),Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白的表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论GXD对结扎左冠状动脉前降支所致Ⅱ型心肾综合征大鼠的心肾功能有明显的改善作用,延缓心、肾纤维化的进程,其机制可能与抑制内皮/上皮-间质转化有关。

马里苷对db/db小鼠肾脏组织内皮-间质转化和纤维化的改善作用及机制

目的 探讨马里苷对糖尿病瘦素受体基因缺陷(db/db)小鼠肾脏组织内皮-间质转化(EndMT)和纤维化的改善作用及机制。方法 将10只野生型瘦素受体基因缺陷杂合(db/m)正常雄性小鼠作为正常对照组,将30只db/db小鼠随机分为糖尿病模型组10只、二甲双胍组10只、马里苷组10只。二甲双胍组给予二甲双胍280 mg/kg灌胃、马里苷组给予50 mg/kg马里苷组灌胃,正常对照组、糖尿病模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,体积均为0.2 mL/10 g,每日1次,共持续8周。第8周末次给药后24 h,检测小鼠空腹血糖;用Western blotting法检测肾组织中EndMT标志物[纤维连接蛋白(Fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)]、纤维化指标[转化生长因子β(TGF-β)]、成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)蛋白表达;用RT-PCR法检测肾组织中Fibronectin、CD31、FGFR1 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,糖尿病模型组空腹血糖水平高(P<0.05);与糖尿病模型组比较,二甲双胍组、马里苷组空腹血糖水平低(P均<0.05);二甲双胍组空腹血糖水平与马里苷组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,糖尿病模型组Fibronectin、Vimentin、TGF-β、FGFR1蛋白表达高,CD31蛋白表达低,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与糖尿病模型组比较,二甲双胍组、马里苷组Fibronectin、Vimentin、TGF-β、FGFR1蛋白表达低,CD31蛋白表达高,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与二甲双胍组比较,马里苷组Vimentin、FGFR1蛋白表达低(P均<0.05),其他蛋白表达比较差异无统计学意义(P均<0.05)。与正常对照组比较,糖尿病模型组Fibronectin、FGFR1 mRNA表达高,CD31 mRNA表达低,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与糖尿病模型组比较,二甲双胍组、马里苷组Fibronectin、FGFR1 mRNA表达低,CD31 mRNA表达高,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与二甲双胍组比较,马里苷组Fibronectin、CD31 mRNA表达低(P均<0.05),FGFR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P均<0.05)。结论 马里苷可改善db/db小鼠EndMT和纤维化,其机制可能与降低FGFR1表达有关。

藏药二十五味松石丸抑制血管生成和上皮间充质转化改善四氯化碳-酒精诱导的大鼠肝纤维化研究

目的研究二十五味松石丸是否通过抑制血管生成和上皮间充质转化改善四氯化碳(CCl_(4))-酒精诱导的大鼠肝纤维化模型。方法SPF级健康雄性SD大鼠30只,随机分为正常组,模型组,二十五味松石丸低、中和高[88、176、352 mg/(kg·d)]剂量组,每组6只。采用50%CCl_(4)橄榄油腹部皮下左右交替注射,同时以5%酒精饮料喂养建立肝纤维化模型;正常组皮下注射同体积橄榄油以蒸馏水喂养,持续8周,造模的同时按照分组灌胃相应的药物和0.4%羧甲基纤维素钠治疗。HE和Masson染色检测大鼠肝脏组织病理变化和胶原纤维增生;生化试剂盒测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),酶联免疫分析测定肿瘤坏死因子(TNF-α)、透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LA)水平;免疫组化检测血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达;免疫印迹法检测α-SMA、TGF-β1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠肝组织病理损伤严重,胶原纤维明显增生;模型组中大鼠血清中ALT、AST活性明显升高,TNF-α含量明显增加,HA和LN含量明显升高;模型组大鼠肝组织内CD31、α-SMA、TGF-β1和Vimentin蛋白表达明显增加,E-cadherin蛋白表达明显降低。与模型组相比,二十五味松石丸各剂量组均能改善大鼠肝组织病理损伤、降低肝功能和肝纤维化指标,降低大鼠血清中TNF-α水平及肝组织内CD31、α-SMA、TGF-β1和Vimentin蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达。结论二十五味松石丸可改善CCl_(4)酒精复合因素诱导的大鼠肝纤维化,其作用可能与抑制血管新生和上皮间充质转化相关。

内皮-间质转化与心血管疾病的研究进展

内皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,End MT)属于上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的特殊类型,是内皮细胞在多种刺激因素作用下向间充质细胞转化的过程,在此过程中内皮细胞逐渐失去其形态和功能,获得增殖、迁移和合成胶原等间充质细胞表型特点.近来研究发现,内皮-间质转化在内皮功能调节,心肌、血管及瓣膜的发育和结构重塑等方面发挥着关键的作用,提示其在心血管疾病领域具有重要的研究意义.本文对内皮-间质转化的特点、功能、调节机制以及在心血管系统发育、心肌纤维化、肺动脉高压和动脉粥样硬化性血管重构等心血管疾病中的作用做一综述,以期为心血管疾病的防治提供新靶点.

缺氧诱导因子-1α和上皮间质转化相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的 探讨乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 免疫组化S-P法检测90例乳腺癌和40例乳腺纤维腺瘤组织中HIF-1α、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、微血管密度(MVD)的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 HIF-1α在乳腺癌组织中阳性率为68.9%(62/90),高于乳腺纤维腺瘤的7.5%(3/40)(χ^(2)=41.742,P<0.001)。E-cadherin在乳腺癌组织中的阳性率为70.0%(63/90),低于乳腺纤维腺瘤的95.0%(38/40)(χ^(2)=9.998,P<0.001)。Vimentin在乳腺癌组织中的阳性率为34.4%(31/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=18.091,P<0.001)。VEGF-C在乳腺癌组织中的阳性率为46.7%(42/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=27.582,P<0.001)。MVD在乳腺癌组织中的阳性率为96.7%(87/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=116.902,P<0.001)。HIF-1α表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期有关(χ^(2)=8.901,P=0.012;χ^(2)=8.711,P=0.013)。E-cadherin表达与乳腺癌肿块大小、组织学分级有关(χ^(2)=5.981,P=0.050;χ^(2)=6.051,P=0.048)。Vimentin表达与乳腺癌肿块大小、淋巴结转移、TNM分期有关(χ^(2)=6.047,P=0.049;χ^(2)=26.683,P<0.001;χ^(2)=28.651,P<0.001)。VEGF-C与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和分子分型有关(χ^(2)=12.562,P=0.000;χ^(2)=17.803,P<0.001;χ^(2)=13.485,P=0.004)。MVD与乳腺癌肿块大小有关(χ^(2)=8.595,P=0.014)。HIF-1α与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.513,P<0.001),与Vimentin、VEGF-C、MVD表达呈正相关(r=0.392,P=0.002;r=0.694,P<0.001;r=0.745,P<0.001)。结论 HIF-1α和EMT相关蛋白可能与乳腺癌的肿瘤血管生成有关,HIF-1α可能通过调控EMT在乳腺癌的侵袭、转移过程中发挥作用。

血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5ng/ml)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFR1)抗体(10μg/ml)共同作用48h后,免疫组织化学双染方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Westernblot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达。TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/FcChimera)(2μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48h后,Westernblot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况。结果TGF-β1作用后,α-SMA表达比正常对照显著增强(P<0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P<0.05)。VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P<0.05)。加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P<0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P<0.05)。TGF-β1+VEGF165+Alk6/FcChimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P<0.05),而Id2表达差异无显著性。结论VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关。Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关。

钙敏感受体在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞内皮间质转化中的作用

目的观察钙敏感受体(CaSR)在高糖(HG)诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)内皮间质转化(EndMT)中的作用和机制。方法将HRCECs分为3组:对照组(NG组,培养基中加入5.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,培养基中加入25.0 mmol·L-1 D-葡萄糖)及HG+Calhex231组(培养基中加入25.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖和3μmol·L^(-1)Calhex231)。CCK-8法检测各组HRCECs的细胞活力,Transwell实验检测各组HRCECs的迁移能力,利用细胞管腔形成实验检测各组HRCECs的管腔形成能力,Western blot检测CaSR、VE-cadherin、CD31、α-SMA及Nuclearβ-catenin蛋白的表达。结果HG组CaSR的表达较NG组增加。与NG组相比,HG组HRCECs的细胞活力、迁移能力和成管能力均增强,细胞中CaSR、α-SMA和Nuclearβ-catenin蛋白表达均明显增加,VE-cadherin和CD31蛋白表达均明显降低(均为P<0.05)。与HG组相比,HG+Calhex231组HRCECs的上述指标均明显逆转(均为P<0.05)。结论CaSR表达参与HG诱导的EndMT进展,其机制可能与促进β-catenin核易位有关。

内皮细胞特异性分子1和血管内皮细胞生长因子在宫颈鳞癌中的表达及其与上皮-间质转化的相关性

目的研究内皮细胞特异性分子1(ESM-1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达在宫颈鳞癌中的关系及其与上皮-间质转化(EMT)的相关性。方法收集2018年12月至2019年12月在南阳市中心医院接受宫颈癌根治术的180宫颈鳞癌病例术后石蜡组织标本作为研究组,另外收集同期南阳市中心医院源于子宫肌瘤切除术的正常宫颈组织石蜡组织标本60例作为正常组,免疫组化检测石蜡组织标本中ESM-1、VEGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的阳性表达率,比较正常宫颈和宫颈鳞癌组织中ESM-1、VEGF、E-Cadherin和Vimentin的阳性表达情况。比较其与宫颈鳞癌临床病理特征的关系,并分析ESM-1、VEGF与EMT相关蛋白E-Cadherin、Vimentin的相关性。结果免疫组化结果显示,ESM-1(81.7%比0.0%)、VEGF(66.7%比12.5%)、Vimentin(44.4%比0.0%)在宫颈鳞癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织,E-Cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达显著低于正常宫颈组织(45.6%比100.0%),差异有统计学意义(χ^(2)=40.00,P<0.05)。随着宫颈鳞癌FIGO分期越高,ESM-1和Vimentin阳性表达率越高,差异有统计学意义(χ^(2)=17.24,14.72,P<0.05),对VEGF和E-Cadherin阳性率的影响差异无统计学意义(χ^(2)=0.05,0.91,P>0.05);随着宫颈鳞癌分化程度越高,E-Cadherin和Vimentin阳性表达率越高,差异有统计学意义(χ^(2)=29.45,23.31,P<0.05),对ESM-1和VEGF阳性率的影响差异无统计学意义(χ^(2)=2.26,0.68,P>0.05);伴有淋巴结转移病人的ESM-1、VEGF及Vimentin阳性率高于不伴有淋巴结转移者,E-Cadherin阳性率低于不伴有淋巴结转移者,差异有统计学意义(χ^(2)=4.03,11.65,24.38,31.57,P<0.05);随着宫颈鳞癌宫颈浸润深度的增加,ESM-1和VEGF阳性表达率升高,差异有统计学意义(χ^(2)=6.87,12.92,P<0.05),对E-Cadherin和Vimentin阳性率的影响差异无统计学意义(χ^(2)=1.58,1.53,P>0.05)。宫颈组织中,ESM-1和VEGF的表达与E-Cadherin呈负相关(r=−0.46,−0.31,P<0.05);ESM-1和VEGF的表达与Vimentin的表达呈正相关(r=0.43,−0.36,P<0.05)。结论宫颈组织中ESM-1和VEGF的表达与宫颈鳞癌临床病理特征具有一定关系,可能参与了宫颈鳞癌的EMT过程。

藁本内酯通过降低VEGF的水平抑制人血管瘤内皮细胞的血管新生和上皮-间充质转化

目的:探讨藁本内酯对人血管瘤内皮细胞(HemECs)的影响,并分析其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度的藁本内酯对HemECs活力的影响;设立对照组及10、25和50μmol/L的藁本内酯处理组,EdU染色检测HemECs增殖的变化,微管形成实验检测HemECs血管新生的变化,Western blot法检测HemECs中血管内皮生长因子(VEGF)及上皮-间充质转化(EMT)相关标志物表达的变化。结果:0.1~50μmol/L的藁本内酯处理对细胞活力的影响并不明显。与对照组相比,25和50μmol/L藁本内酯处理组的Edu阳性细胞明显减少(P<0.05),微管样结构的数量明显减少(P<0.05),VEGF蛋白表达显著下调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05),vimentin和β-catenin蛋白表达显著下调(P<0.05)。与对照组相比,VEGF转染组的VEGF和vimentin蛋白表达显著上调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05);与VEGF转染组相比,50μmol/L藁本内酯处理VEGF转染细胞后,VEGF和vimentin蛋白表达显著下调(P<0.05),E-cadherin的蛋白表白显著上调(P<0.05)。结论:藁本内酯可抑制HemECs的增殖,还可通过降低VEGF的水平,抑制HemECs的血管新生与EMT过程。

NOTCH信号通路与内皮间质转化在婴幼儿血管瘤中的研究进展

婴幼儿血管瘤(Infantile hemangioma,IH)是一种发生于婴幼儿时期的良性血管肿瘤,发病机制尚未完全阐明,病程呈自限性,但部分患者会残留影响外观或功能的后遗症。NOTCH信号通路是进化上高度保守的信号通路,在细胞分化、胚胎发育、组织自我更新、肿瘤、炎症的发生及血管功能的调控等多个生理病理过程中发挥重要作用。内皮间质转化是指在多种因素作用下,内皮细胞(Endothelial cells,ECs)失去原有特征向间充质细胞(Mesenchymal cells,MSCs)转分化,其广泛参与胚胎发育、肿瘤侵袭和纤维化疾病等过程。研究发现,抑制NOTCH信号通路可加速婴幼儿血管瘤的消退,以及NOTCH信号通路可诱导内皮间质转化过程干扰疾病进展。本文就婴幼儿血管瘤的NOTCH信号通路以及内皮间质转化过程进行综述。

miR-330-5p负性调控ADAM17基因抑制人心脏微血管内皮细胞的间质转化

目的探讨人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)间质转化(EndMT)过程中miR-330-5p和ADAM17基因的表达,阐明miR-330-5p对EndMT的影响。方法培养HCMEC,应用TGF-β1诱导后,利用免疫荧光化学检测CD31和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞中的表达。运用生物信息学方法对miR-330-5p和ADAM17基因的配对关系进行预测。脂质体2000转染miR-330-5p模拟物后,Real-time PCR检测miR-330-5p、ADAM17和α-SMA mRNA的表达,Western blotting检测ADAM17和α-SMA蛋白的表达。结果光镜下可见诱导后细胞由鹅卵石形态变为长梭形,免疫荧光化学显示诱导前有强烈的CD31表达,诱导后出现α-SMA的高表达。生物信息学软件TargetScan和miRanYda显示miR-330-5p和ADAM17基因二者靶向配对良好。Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-330-5p能够降低ADAM17和α-SMA mRNA及蛋白的表达。结论 miR-330-5p通过下调人心脏微血管内皮细胞中ADAM17基因的表达,进而抑制TGF-β1诱导的EndMT。

复方丹参滴丸减少心肌微血管内皮-间质转化保护缺血-再灌注大鼠的心功能

【目的】本研究旨在探讨不同剂量复方丹参滴丸对缺血-再灌注大鼠心功能的作用及可能机制。【方法】32只雄性SD大鼠经结扎左冠状动脉前降支,45min后进行再灌注以构建大鼠心肌缺血-再灌注模型,之后随机分为以下4组(每组8只):不同剂量复方丹参滴丸组(以40、80、120 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量灌胃给药)及空白对照组(给予等量生理盐水)。另8只大鼠进行相似的操作但不结扎左前降支为假手术组(给予等量生理盐水灌胃)。灌胃给药持续4周。以超声心动图检查评估心功能,HE和Masson三色染色以观察组织形态学变化,CD31/α-SMA免疫荧光以分析鼠心微血管的内皮-间质转化情况,Western blot以检测梗死周边心室组织CD31/α-SMA的表达。用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H非参数检验比较各组实验结果。【结果】与空白对照组比,不同剂量复方丹参滴丸治疗可显著增加左室射血分数和左室短轴缩短率(P<0.05),降低左室舒张末期容积和E/A比值(P<0.05),减少心肌胶原容积分数(均P<0.05),抑制鼠心微血管间质标记物α-SMA的表达(P<0.05),降低梗死周边心室组织α-SMA的表达并增加CD31的表达。【结论】复方丹参滴丸40/80/120 mg·kg^(-1)·d^(-1)治疗可改善大鼠心肌缺血再灌注后的心功能,机制之一可能是通过抑制心肌内血管内皮-间质过度转化,减少缺血再灌注后心肌纤维化。

内皮-间质转化与心血管疾病的研究进展

内皮-间质转化(EndMT)参与了多种心血管疾病的病理生理过程。近来研究发现,EndMT在动脉粥样硬化、肺动脉高压、静脉移植重建、静脉血管重构等多个病理阶段均起到重要作用,提示其在心血管疾病的防治方面具有重要意义。本文主要对EndMT与心血管疾病的研究进展作一综述,旨在探讨一些可行的治疗方案。