IgA肾病扁桃体归巢受体L-选择素、VLA-4α、LFA-1和血管地址素ICAM-1、VCAM-1表达及意义

目的:探讨L-选择素、VLA-4α、LFA-1、ICAM-1、VCAM-1在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者与非肾炎慢性扁桃体炎患者扁桃体的表达及意义。方法:收集10例伴有慢性扁桃体炎的IgAN患者扁桃体(IgAN组),这些患者经肾活检诊断为IgAN,10例不伴IgAN慢性扁桃体炎(Chronic tonsillitis,CT组)作为对照。应用Western blot技术定量分析两组扁桃体组织L-选择素,VLA-4α、LFA-1、ICAM-1、VCAM-1的表达,同时采用免疫组织化学技术检测扁桃体L-选择素、VLA-4α、LFA-1表达,观察ICAM-1,VCAM-1在生发中心和滤泡间区高内皮小静脉(High endothelial venules HEV)分布。结果:Western blot技术显示IgAN组及CT组扁桃体L-选择素、VLA-4α、LFA-1、ICAM-1、VCAM-1的表达分别为〔(1.10±0.09;0.80±0.14)、(0.39±0.05;0.24±0.04)、(0.41±0.06;0.29±0.06)、(1.36±0.04;1.18±0.09)、(2.56±0.63;1.60±0.32)]。免疫组织化学检测两组各归巢受体表达差别有显著统计学意义,IgAN扁桃体生发中心和滤泡外区HEV内血管地址素表达增强。结论:扁桃体淋巴细胞归巢异常是伴有慢性扁桃体炎的IgAN患者的重要特征,IgAN的发病机制与之有密切关联。

人MAdCAM-1真核表达载体的构建及其表达细胞株的建立

目的:建立表达人MAdCAM-1的细胞模型。方法:从pUC21/hMAdCAM-1质粒酶切下hMAdCAM-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克隆。结果:筛选出的阳性克隆细胞以免疫荧光和免疫酶标染色法检测,表明有人MAdCAM-1分子表达;其细胞裂解物经免疫印迹分析,证实约63 kD的新增蛋白带与抗 hMAdCAM-1抗体有特异性结合反应;淋巴细胞粘附实验结果提示表达产物具有一定的功能活性。结论:成功地获得了表达人MAdCAM-1分子的细胞株,为进一步研究其生物学功能及其作用机制奠定了基础。

黑炭与铅联合暴露致Z310细胞黏附分子表达变化

目的探讨黑炭与铅联合暴露对大鼠脉络丛上皮细胞系Z310细胞中细胞黏附分子表达和调控细胞黏附分子的微小RNA(miRNA)影响。方法(1)将Z310细胞随机分为对照组、黑炭暴露组、铅暴露组和联合暴露组,铅暴露组、黑炭暴露组细胞分别予剂量为10μmol/L的乙酸铅和10 mg/L的黑炭染毒,联合暴露组予上述剂量的黑炭与乙酸铅染毒;12.0 h后,采用蛋白印迹法检测Z310细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、黏膜血管地址素细胞黏附分子-1(MAdCAM-1)的蛋白表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测调控ICAM-1基因的miR-326、miR-328-3p和miR-542-3p的表达。(2)将Z310细胞或miRNA-326 mimic转染成功的Z310细胞随机分为对照组、miRNA-326转染对照组、联合暴露组和miRNA-326转染联合暴露组,2个对照组细胞均不予染毒处理,2个联合暴露组均予剂量为10 mg/L的黑炭染毒和10μmol/L的乙酸铅染毒12.0 h,采用蛋白印迹法检测ICAM-1的蛋白表达。结果(1)黑炭暴露组细胞中的ICAM-1、VCAM-1、MAdCAM-1和铅暴露组细胞中ICAM-1蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05);联合暴露组细胞中ICAM-1和MAdCAM-1蛋白相对表达水平分别高于其余3组(P值均<0.05),VCAM-1蛋白相对表达水平均高于对照组和铅暴露组(P值均<0.05)。黑炭暴露组和铅暴露组细胞中miR-326相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05),联合暴露组细胞中miR-326相对表达水平分别低于其余3组(P值均<0.05);4组细胞中miR-328-3p和miR-542-3p相对表达水平比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)ICAM-1蛋白相对表达水平在miR-326转染对照组细胞中低于对照组(P<0.05),在联合暴露组、miR-326转染联合暴露组细胞中均高于对照组和miR-326转染对照组(P值均<0.05),在miR-326转染联合暴露组细胞中低于联合暴露组(P<0.05)。结论黑炭与铅单独暴露均可导致Z310细胞中ICAM-1、VCAM-1、MAdCAM-1表达不同程度的上调;黑炭与铅联合暴露对ICAM-1和MadCAM-1表达上调具有协同作用,以ICAM-1变化最为显著。黑炭与铅联合暴露可能通过下调miR-326表达进而上调ICAM-1蛋白的表达。