氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞磷酸酶PTEN活性的影响

为探讨氧化型低密度脂蛋白促血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号转导机制 ,将兔血管平滑肌细胞分为对照组、低密度脂蛋白组和氧化型低密度脂蛋白组。以细胞计数和噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力 ,Westernblot定量与细胞骨架蛋白同源在 10号染色体有缺失的磷酸酶 (PTEN)表达水平 ,免疫沉淀和特异底物diC1 6 PIP3脱磷酸绿色试剂法检测该磷酸酶活性。实验发现氧化型低密度脂蛋白 (5 0mg L)可使细胞计数及噻唑蓝比色吸光值分别增加 1.78和 3.2 1倍 ,而低密度脂蛋白 (5 0mg L)无明显作用。各浓度低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白对该磷酸酶蛋白表达水平均无显著影响。氧化型低密度脂蛋白对PTEN活性的抑制在 2 0～ 5 0mg L范围内呈浓度依赖性。时间曲线表现为 10min作用最强 ,并可持续达 2 4h(与对照组比较 ,均P <0 .0 1)。结果提示 ,氧化型低密度脂蛋白可能通过对负性调节蛋白PTEN磷酸酶的抑制而发挥促进血管平滑肌细胞增殖功能。

血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路的交互调节

目的探讨血管平滑肌细胞增殖过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用。方法植块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞。Western blot测定钙调磷酸酶和蛋白激酶G Iα蛋白的表达。定磷法测定钙调磷酸酶活性,MTT法测定血管平滑肌细胞的增殖。结果苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞钙调磷酸酶的表达和活性可被一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMP增强。应用环孢素A干预增殖细胞后蛋白激酶G Iα蛋白表达量较对照组明显提高(P<0.01),而加入苯肾上腺素刺激后蛋白激酶G Iα蛋白的表达较对照组也有明显提高(P<0.05),但较5 mg/L环孢素A干预组减少了36.7%,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。经0.5 mg/L环孢素A预处理后,苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞吸光度降低36.67%,S-亚硝基-N-乙酰青霉胺、Sp-8-pCPT-cGMP或Rp-8-pCPT-cGMP并不能进一步抑制或升高已升高的吸光度。结论蛋白激酶G介导钙调磷酸酶信号抑制血管平滑肌细胞增殖,并且蛋白激酶G与钙调磷酸酶能够交互调节影响血管平滑肌细胞增殖进程。

年龄作为高血压危险因素的分子基础

目的 研究高血压的发病基础和年龄与高血压的关系。方法 我们应用酶学测定方法 ,测定了幼年期、童年期、青春期、青年期和壮年期Wistar大鼠主动脉 (A)、尾动脉 (CA)和肠系膜动脉 (MA)平滑肌的钙 /钙调素依赖性蛋白磷酸酶 (Ca2 +/CaM -PP)的活性。结果 幼年期和童年期各血管间和组间Ca2 +/CaM -PP活性无显著差异 (P >0 0 5 ) ;青春期三种血管间Ca2 +/CaM -PP活性无显著差异 ,但活性均明显高于幼年期和童年期组 (P <0 0 1) ;青年期三种血管间的Ca2 +/CaM -PP活性无显著差异 ,但活性均明显高于青春期 (P <0 0 1) ;壮年期组A和CA血管Ca2 +/CaM -PP活性与青年期组无显著差异 ,但MACa2 +/CaM -PP活性明显低于青年期(P <0 0 1)。结论 不同血管的舒张功能随年龄增长逐渐增加 ,但到壮年期首先出现阻力血管舒张功能的下降 ;血管舒张功能可能与动脉中Ca2 +/CaM -PP活性有关 ;