孕期运动调节高血压大鼠子代血管平滑肌表型的Ppargc1α去甲基化机制

目的:探讨孕期运动是否抑制高血压大鼠子代血管重构及其可能的表观遗传机制。方法:选用自发性高血压大鼠(SHR)及其正常血压对照大鼠(WKY),同品系进行配种,见栓且阴道涂片见精子确定为配种成功,记为妊娠第1天。孕鼠随机分为安静(p-WKY-SED和p-SHR-SED)组和运动(p-WKY-EX和p-SHR-EX)组,每组25只。运动组进行无负重游泳运动(每天60 min,每周6 d,至妊娠第19天)。每天监测孕鼠进食量和体重;妊娠第21天,一部分孕鼠剖腹取胎鼠监测胎鼠体重和胎盘效率,另一部分孕鼠待自然分娩;雄性子代3月龄时,进行尾动脉无创血压监测,采用HE染色观察肠系膜动脉形态,采用RT-qPCR和Western blot检测肠系膜动脉过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC1α)的mRNA和蛋白水平及TET2蛋白水平,亚硫酸氢盐测序和ELISA分别检测肠系膜动脉Ppargc1α基因(编码PGC1α)甲基化水平和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平。结果:孕期运动抑制SHR子代胎盘效率下降(P<0.05),显著降低SHR子代的舒张压和平均动脉压(P<0.05),显著减小SHR子代的血管中膜厚度/内径比值(P<0.01),抑制血管平滑肌收缩表型向合成表型转换(P<0.05),显著上调SHR子代肠系膜动脉减少的PGC1αmRNA和蛋白表达,抑制Ppargc1α基因甲基化(P<0.05);与去甲基化密切相关的TET2蛋白(P<0.05)和5hmC(P<0.01)在SHR子代肠系膜动脉中显著降低,孕期运动显著增加二者水平(P<0.05)。结论:孕期运动可通过增加TET2介导的Ppargc1α基因启动子区去甲基化,抑制高血压大鼠子代成年后血管平滑肌由收缩表型向合成表型转换,缓解其血管重构。

田蓟苷对大鼠A7R5血管平滑肌细胞增殖、迁移、表型转化及Notch1信号通路调控的影响

目的 研究田蓟苷对A7R5血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法 采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1通路抑制剂组(DAPT组)和辛伐他汀组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量PCR法检测细胞SM22α、α-SMA、Notch1、Hes1、Hes5、Jagged-1 mRNA表达,Western blot法检测细胞Notch1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达。结果 与模型组比较,各给药组均可抑制A7R5细胞的异常增殖和迁移(P<0.05,P<0.01),上调α-SMA mRNA表达(P<0.01);田蓟苷组和DAPT组下调Notch1通路相关基因Notch1、Hes-1、Hes-5和Jagged-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);田蓟苷组下调Notch1、Hes-1、RBP-Jκ蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 田蓟苷通过抑制VSMCs的异常增殖、迁移、表型转化及调控Notch1信号通路,从而保护ox-LDL诱导的A7R5细胞损伤。

血管平滑肌细胞表型对动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

血管平滑肌细胞(SMCs)是血管管壁的主要组成部分。SMCs表型与动脉粥样硬化斑块的稳定性密切相关,SMCs是构成斑块纤维帽的主要成分,较厚的纤维帽有利于增加斑块稳定性;相反,SMCs表型若转换为巨噬细胞样表型,可诱导纤维帽变薄,核心坏死增大,从而增加斑块不稳定性。SMCs表型转换机制与衰老、DNA损伤和凋亡有关。综述SMCs表型转化机制,通过调控SMCs表型以增加斑块稳定性,减少斑块破裂风险,降低不良心血管事件发生率。

基于平滑肌细胞表型转化角度探讨中医药治疗动脉粥样硬化进展

动脉粥样硬化是一种以纤维斑块和粥样斑块为主要病理特征的血管系统疾病。当纤维斑块或粥样斑块形成后,使动脉壁增厚、变硬,导致动脉管腔狭窄、弹性下降,甚至可导致急性冠状动脉综合征、缺血性脑卒中等并发症的发生,是多种心脑血管疾病的病理基础。血管平滑肌细胞主要环形分布于血管壁的中膜内,与血管的顺应性及弹性回缩密切相关,在生理情况下,血管平滑肌细胞具有收缩力强的特性,保持着低增殖、低迁移功能,在不同的环境条件影响下,血管平滑肌细胞会发生表型转化,从收缩表型向合成表型转化,促使平滑肌细胞由中膜迁移至内膜,随后在内膜中大量积聚并刺激结缔组织的形成,进而导致斑块失稳、管腔狭窄甚至斑块破裂等病理过程的发生。该文阐述了血管平滑肌与动脉粥样硬化发生发展的关系,并总结近十年中医药通过调控血管平滑肌细胞防治动脉粥样硬化的进展,旨在为中医药防治动脉粥样硬化提供更为可靠的理论依据。

血管平滑肌细胞表型改变与肿瘤抑制基因p21^(WAF1)和p53的关系

目的:增殖表型血管平滑肌细胞中肿瘤抑制基因p21WAF1基因和p53基因表达可能具有对抗血管平滑肌细胞的增殖能力,观察血管平滑肌细胞表型变化与肿瘤抑制基因p21WAF1和p53的关系。方法:实验于2003-09/10哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。应用胶原酶消化法建立大鼠原代培养血管平滑肌细胞,去血清诱导体外培养血管平滑肌细胞分化。流式细胞分析检测不同表型血管平滑肌细胞增殖能力,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹分析方法检测血管平滑肌细胞分化相关基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin表达变化,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹杂交方法检测p21WAF1和p53基因表达变化。结果:去血清培养后,原代培养大鼠血管平滑肌细胞增殖能力下降,DNA合成前期细胞明显增加(48.38±2.35)%,细胞分化基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin明显表达。肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达下降。在200g/L血清培养后,大鼠血管平滑肌细胞增殖旺盛,DNA合成前期细胞相对较少(28.80±1.58)%,细胞分化相关基因平滑肌特异性肌动蛋白和calponin表达明显下调,肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达显著增加。结论:肿瘤抑制基因表达与血管平滑肌细胞表型状态密切相关。

香青兰总黄酮调控Notch1信号通路对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的研究香青兰总黄酮(TFDM)对大鼠血管平滑肌A7R5细胞表型转化的影响,探讨其用于动脉粥样硬化治疗的可能机制。方法实验分为6组,分组如下:ox-LDL刺激A7R5细胞表型转化作为模型组;用浓度分别为25、50、100μg·mL^(-1)TFDM处理表型转化的细胞作为低、中、高剂量组;10-5 mol·L^(-1)辛伐他汀处理表型转化的细胞,作为阳性对照组;未经处理的细胞作为正常对照组。采用CCK-8法测定细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。蛋白免疫印迹测定SM22α,α-SMA和Notch1通路相关蛋白Notch1、actived-Notch1、RBP-Jκ、Hes-1及Hes-5蛋白的表达。结果与ox-LDL刺激的模型组比较,高剂量的TFDM刺激细胞后显著降低其增殖、迁移能力(P<0.001或P<0.05),上调SM22α,α-SMA表达(P<0.05),下调Notch1、actived-Notch1、RBP-Jκ、Hes-1及Hes-5的表达(P<0.001,P<0.01或P<0.05);中、低剂量的TFDM对细胞增殖、迁移及相关蛋白表达也有相应的调节,但作用不如高剂量显著。结论TFDM能显著抑制ox-LDL诱导A7R5细胞的过度增殖、迁移及表型转化,这种作用可能与调节了Notch1信号通路有关。

血管平滑肌细胞表型与出血的关系

各种急慢性出血是导致患者生活质量下降甚至死亡的重要原因之一,近年来随着对血管微观结构研究的日益加深,发现血管重构在出血性疾病中起着重要作用,而血管平滑肌细胞（VSMC）改变是其起始环节。前期研究发现节育器出血不良反应患者发病与血管形态和功能异常紧密相关,就此综述,进而讨论血管平滑肌细胞表型与放置宫环节育器出血的关系,从而为宫环出血机制和治疗方案的研究提供新的思路。

血管过氧化物酶1在Ang-Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表型转化中的作用及机制

血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化在动脉粥样硬化等血管增生性疾病中起重要作用,但具体调节机制仍不明确。为探讨血管过氧化物酶1(VPO1)在血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导VSMCs表型转化中的作用及机制,予以Ang-Ⅱ培养VSMCs,结果发现Ang-Ⅱ升高VSMCs内VPO1的表达,伴随着SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高。VPO1基因沉默后可明显抑制Ang-Ⅱ诱导的SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高,同时抑制HOCl的生成。HOCl培养VSMCs使SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高。研究结果表明VPO1通过调节KLF4的表达在Ang-Ⅱ诱导VSMCs表型转化中起重要作用。

E1A激活基因阻遏子过表达诱导体外培养大鼠平滑肌细胞分化

为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞分化标志蛋白SMα actin表达显著增加 .免疫共沉淀分析发现 ,CREG与血清反应因子 (SRF)发生相互作用形成复合体 ,在CREG基因过表达时 ,与CREG结合的SRF蛋白增加 .凝胶迁移阻滞分析 (GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析 (supershift)显示 ,过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到SMα actin基因启动子区CArG位点上 ,可能参与SMα actin表达的调控 .构建SMα actinpromoter pCAT 3报告基因载体并与pRC/CMV hCREG质粒共转染VSMCs也证实 ,CREG蛋白过表达可增强SMα actin基因表达 .上述研究提示 。

硅胶微导管套管缩窄术建立小鼠颈总动脉血管重塑模型

目的通过硅胶微导管套管缩窄术建立一种新的小鼠颈总动脉血管重塑模型,分析血管缩窄时间与血管重塑之间的关系。方法12只C57BL/6小鼠经异氟烷麻醉后,取颈正中切口,分离左、右侧颈总动脉。左侧颈总动脉行缩窄术,将长1 cm、内径0.3 mm的硅胶微导管纵向剖开后套入颈总动脉,固定并扎紧;右侧颈总动脉仅行假手术,不放置硅胶微导管,不进行缩窄术。在术后2周和4周时分别处死6只小鼠,3只用于组织病理学观察,3只用于RNA和蛋白提取。取小鼠两侧颈总动脉制作病理切片,采用H-E染色观察颈总动脉血管的显微结构,免疫组织化学染色检测颈总动脉组织中血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;取两侧颈总动脉RNA和蛋白样品,采用qRT-PCR检测血管平滑肌表型转化标志分子钙调理蛋白1(CNN1)、平滑肌肌动蛋白α2(ACTA2)的表达,蛋白质印迹法检测细胞增殖相关分子周期蛋白A2、周期蛋白D1和PCNA的表达。结果12只小鼠左侧颈总动脉套管缩窄手术均获得成功,套管扎紧后即刻可见血管管腔狭窄但血流未被阻断,术后2周和4周取材时小鼠均无明显异常表现。H-E染色结果显示,术后2周时小鼠左侧颈总动脉血管外膜组织明显增生,4周时小鼠左侧颈总动脉血管中膜和内膜明显增生。免疫组织化学染色结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉出现大量PCNA表达,提示平滑肌细胞异常增殖。qRT-PCR检测结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉收缩型平滑肌细胞标志分子CNN1、ACTA2的表达水平均降低。蛋白质印迹法检测结果显示,术后2周和4周时小鼠左侧颈总动脉细胞周期蛋白A2、周期蛋白D1和PCNA的表达水平均升高。结论硅胶微导管套管致小鼠颈总动脉缩窄是一种简单、高效的血管重塑模型。

受体相互作用蛋白激酶1在血管平滑肌细胞表型转换中的作用研究

血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换在多种血管疾病中起着重要作用,因此本研究旨在探索受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)在血管平滑肌细胞表型转换中的表达变化及其可能起到的作用。通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激建立VSMCs表型转换模型,分别采用定量PCR、Western blot检测VSMCs表型转换及分泌标志物、RIPK1的表达和核因子-κB(NF-κB)的P65亚基磷酸化水平的变化,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)掺入法检测细胞增殖变化,并用划痕实验检测细胞迁移情况。同时,应用RIPK1特异性小分子抑制剂Necrostatin-1(Nec-1),以及特异性RIPK1-siRNA抑制RIPK1的表达,观察RIPK1在VSMCs表型转换中的作用。结果显示,AngⅡ诱导VSMCs发生表型转换后,RIPK1表达及P65磷酸化的水平明显增加。给予Nec-1预处理或是利用RIPK1-siRNA沉默RIPK1基因后,P65的磷酸化水平呈现下调,同时能部分逆转VSMCs的表型转换并抑制其分泌、增殖和迁移能力。实验表明,AngⅡ能诱导RIPK1表达上调,同时RIPK1可能通过促进NF-κB的P65亚基磷酸化参与了VSMCs的表型转换过程。

血管平滑肌细胞表型调控在颅内动脉瘤发生、发展过程中作用的研究进展

颅内动脉瘤是一种病因未明的常见脑血管病，表现为动脉的局限性扩张，是造成蛛网膜下腔出血的主要原因之一。目前认为遗传因素、血流动力学异常以及血管危险因素共同参与了颅内动脉瘤的形成过程。其病理变化主要有内弹力层缺失、细胞外基质（extracellula rmatrix，ECM）降解、平滑肌细胞异位等^[1]。

内皮唾液酸蛋白通过调节血管平滑肌细胞表型重建,促进动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是全球主要的致死原因,血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）在动脉粥样硬化的发病中起关键作用。内皮唾液酸蛋白（CD248）已被认为是间质细胞系细胞（包括肿瘤相关周细胞、肌成纤维细胞间质和活化的VSMC）的激活标记物。因此,研究人员假设VSMC表达的内皮唾液酸蛋白可以功能性地参与动脉粥样硬化的发病。方法与结果：

SM22α在血管平滑肌细胞中的作用

平滑肌22α(SM22α)是平滑肌细胞(VSMC)骨架相关蛋白,通过与肌动蛋白的作用参与VSMC骨架重构,是近年发现的一种VSMC分化标志物,其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性。血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化是动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病的共同病理生理过程。VSMC表型转化过程中平滑肌特异基因的表达变化和细胞骨架的重构是当前研究的热点问题之一。本文就SM22α的结构特征及其在VSMC中的作用机制进行综述。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉平滑肌表型转换的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉平滑肌表型转换的影响,探讨隔药饼灸稳定易损斑块的可能效应机制。方法将58只新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组。除空白组外各组高脂饲料喂养、腹主动脉球囊损伤术、基因转染及药物触发方法建立腹主动脉粥样硬化易损斑块模型。各组采取相应干预措施。采用ELISA法检测兔血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;HE染色观察兔腹主动脉血管结构;免疫组化法检测兔腹主动脉细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的阳性表达。结果与空白组比较,模型组血清TC、TG升高(P<0.01);与模型组比较,三组血清TC、TG降低(P<0.05或P<0.01);三组间无差异。与空白组比较,模型组ERK1/2平均光密度值升高(P<0.01);与模型组比较,三组ERK1/2平均光密度值降低(P<0.05);三组间无差异。与空白组比较,模型组α-SMA平均光密度值降低(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组及西药组α-SMA平均光密度值升高(P<0.05);三组间无差异。结论隔药饼灸可稳定动脉粥样硬化易损斑块模型兔易损斑块,其机制可能与抑制血管平滑肌表型转换有关。

MRTF-A在动脉粥样硬化病变中的研究进展

动脉粥样硬化是心血管事件发生的重要因素。相关流行病学调查显示,近几年中国动脉粥样硬化性心血管疾病负担快速而显著增加,给国家公共卫生问题带来重大挑战。心肌素相关转录因子A(MRTF-A)在动脉粥样硬化发展进程中发挥着重要作用,包括参与炎症反应、促进粥样硬化进程中脂质积聚及促进血管平滑肌细胞表型转化等,探索MRTF-A在动脉粥样硬化病变中的研究进展对于寻找新的治疗靶点具有重要意义。文章就MRTF-A在动脉粥样硬化病变过程中的作用进行综述,可为冠状动脉粥样硬化的靶向治疗提供参考。

麝香保心丸的心血管系统药理作用研究进展

目的:了解麝香保心丸在心血管系统方面的药理作用,探讨其保护心血管系统的可能机制。方法:查阅近年文献,从对血管和心脏功能的改善方面对麝香保心丸的心血管系统药理作用进行总结和分析。结果与结论:麝香保心丸可能从保护血管内皮、抑制血管炎症反应、促进血管新生、促进血管平滑肌细胞表型的转换、抑制心肌纤维化、减轻心脏炎症反应、改变心力衰竭大鼠心脏血管紧张素Ⅱ受体的表达等多个方面发挥改善血管以及心脏功能的作用。应进一步进行分子水平研究,以评估麝香保心丸在心血管疾病中的价值。