血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。

无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果:在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似,提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解。裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区(Cys-rich,Cys R)结构域和间隔区结构域,但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列(TSP12-8)和2个补体结合区(CUB)结构域。结论:内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感,这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解,并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理。

沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林在急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗术后心律失常中的应用及血清血管性血友病因子裂解酶、鸢尾素水平变化研究

目的探究沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林在急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心律失常中的应用效果。方法依据随机数字表法按1∶1比例将92例AMI行PCI术后心律失常患者分为试验组和基础组,每组各46例。基础组采用口服依那普利联合阿司匹林治疗,试验组采用口服沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林治疗,两组患者均治疗1个月。收集所有患者基线资料、疗效、治疗前后心功能指标及不良反应发生情况并进行组间比较。结果试验组患者总有效率高于基础组(P<0.05)。治疗后两组患者心功能指标、校正QT间期(QTc)、QRS时限、心肌酶谱指标及血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)水平均较同组治疗前降低,QT离散度(QTd)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)及鸢尾素(Irisin)水平均较同组治疗前升高;试验组患者治疗后心功能指标、心电图指标、心肌酶谱指标及ADAMTS-13水平均较同期基础组降低,NT-proBNP及Irisin水平均较同期基础组升高(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P=0.503)。结论沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林治疗AMI患者PCI术后心律失常安全有效,可调节血清Irisin、ADAMTS-13水平,减轻心肌损伤,提高心功能,促使心电图恢复。

血清胱抑素C、血管性血友病因子裂解酶与冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗后无复流的相关性

目的探讨血清胱抑素C(Cys-C)、血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)与冠心病患者经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后无复流的相关性。方法选取2019年1月至2020年12月义马煤业集团股份有限公司总医院收治的142例冠心病患者,所有患者均接受PCI治疗,术后采用心肌梗死溶栓治疗(TIMI)血流分级评估所有患者无复流情况,根据结果分为无复流组(TIMI分级0~Ⅱ级)、复流组(TIMI分级Ⅲ级),统计两组患者的临床资料,分析血清ADAMTS-13、Cys-C与冠心病患者介入治疗后无复流的关系。结果142例冠心病患者介入治疗后无复流20例,占14.08%(20/142);无复流组血清Cys-C、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平高于复流组,血清ADAMTS-13水平低于复流组(P<0.05);回归分析结果显示,入院时血清Cys-C、hs-CRP过表达是冠心病患者介入治疗后无复流的危险因子(OR>1,P<0.05),血清ADAMTS-13过表达是冠心病患者介入治疗后无复流的保护因子(OR<1,P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线,结果显示,入院时血清Cys-C、ADAMTS-13预测冠心病患者介入治疗无复流风险的曲线下面积(AUC)均>0.70,预测价值较理想。结论冠心病患者介入治疗后无复流与入院时血清ADAMTS-13、Cys-C水平有关,血清Cys-C过表达、ADAMTS-13低表达者介入治疗后无复流的发生风险高。

原发性膜性肾病患者血管性血友病因子裂解酶13的血浆水平及其临床意义

目的原发性膜性肾病(primary membrous nephropathy,PMN)患者发生静脉血栓栓塞(venous thromboembolism,VTE)风险高,检测PMN并发VTE患者与未并发VTE患者的血管性血友病因子裂解酶13(ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif 13A,DAMTS13)的血浆活性水平及探究其临床意义。方法纳入2019年9月至2021年9月在新疆维吾尔自治区人民医院住院治疗的30位PMN并发VTE患者做为MN血栓组、30例PMN未并发VTE的患者作为MN非血栓组、3位体检健康者作为健康对照组,用酶联免疫吸附试验测量入组者血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)及其特异性裂解酶ADAMTS13的血浆活性水平,并与临床资料作分析比较探究其临床意义。结果(1)PMN患者ADAMTS13的血浆水平较健康组低,差异具有统计学意义;(2)膜性肾病血栓组血浆ADAMTS13水平低于非血栓组,vWF及vWF/ADAMTS13比值高于非血栓组,差异均具有统计学意义(P<0.01);(3)PMN患者血浆ADAMTS13水平与血浆白蛋白(albumin,Alb)呈正相关(r=0.538,P<0.01),与24 h尿蛋白定量(r=-0.371,P<0.01)、总胆固醇(r=-0.363,P<0.01)和低密度脂蛋白(r=-0.407,P<0.01)、纤维蛋白原(r=-0.510,P<0.01)、白细胞介素-6(interleukin,IL-6)(r=-0.428,P<0.05)、D-二聚体(r=-0.404,P<0.05)呈负相关,但与血清M型磷脂酶A2抗原抗体水平无显著相关性(P>0.05);(4)ADAMTS13诊断PMN并发VTE的ROC曲线下面积为0.794(P<0.001),最佳临界值为65.95%(灵敏度为96.7%,特异度为53.3%),vWF/ADAMTS13比值诊断PMN并发VTE的ROC曲线下面积为0.831(P<0.001),最佳临界值为2.63(灵敏度为86.7%,特异度为66.7%)。结论PMN患者血浆ADAMTS13水平下降,并发VTE时下降更明显,其下降可能与患者肾功能、炎症因子、血脂水平、高凝状态相关,可能与PLA2R-Ab无相关性,且ADAMTS13可能对PMN并发VTE有预测价值,vWF/ADAMTS13比值预测作用可能更强。

高血压病患者血浆血管性血友病因子及其裂解酶的变化

目的:探讨高血压病患者血浆血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)水平及血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor-cleaving protease,vWF-cp)活性变化和临床意义。方法:高血压病患者分为合并高脂血症组32例和单纯高血压病组48例,健康成人组60例。应用免疫比浊法和免疫印迹发光绘图法分别检测血浆vWF水平和vWF-cp活性。结果:高血压病患者血浆vWF水平显著高于健康成人(P<0.01),而vWF-cp活性显著低于健康成人(P<0.01);高血压病合并高脂血症组血浆vWF水平高于单纯高血压病组(P<0.05),而vWF-cp活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血浆vWF水平升高,vWF-cp活性降低可能与高血压病发生、发展、内皮损伤有关,而且高血压病合并高脂血症其内皮损伤程度更重。

冠心病患者血浆血管性血友病因子裂解酶、生长分化因子15水平变化及相关性分析

目的观察冠心病患者血浆血管性血友病因子裂解酶(vWF-CP)及生长分化因子(GDF15)水平的变化,探讨两者的相关性。方法选取冠心病患者96例,其中稳定性心绞痛组(SAP组)47例,急性冠脉综合征组(ACS组)49例,选取同期无血管病变的非冠心病患者49例作为对照组,入组患者均在入院后采血。用ELISA法测定血浆vWF-CP、GDF15。结果 ACS组vWF-CP为(286.22±21.75)pg/mL、SAP组为(357.47±21.98)pg/mL、对照组为(581.85±21.52)pg/mL,组间相比,P均<0.05;ACS组GDF15为(11.30±0.51)ng/mL、SAP组为(8.37±0.54)ng/mL、对照组为(1.35±0.45)ng/mL,组间相比,P均<0.01。vWF-CP水平与GDF15水平呈负相关(r=-0.558,P<0.01)。结论冠心病患者病情不稳定时血浆vWF-CP水平降低、GDF15水平升高,两者存在显著的相关性,都与冠心病的病情有关,两者的联合检测可以更好预测冠心病患者血栓事件的发生。

冠心病患者血管性血友病因子裂解酶水平与GRACE评分及Gensini积分的相关性分析

目的:检测冠心病患者外周血血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor-cleaving protease,vWF-cp)的水平变化以及联合全球急性冠脉注册事件(Global Registry of Acute Coronary Events,GRACE)评分观察对冠心病危险分层的评估价值。方法:选取冠心病患者96例,其中稳定性心绞痛组(stable angina pectoris,SAP)47例,急性冠脉综合征组(acute coronary syndrome,ACS)49例;同时选取同期无血管病变的非冠心病患者49例作为对照组,采用GRACE系统进行评分及分层,同时利用Gensini评分系统评定冠状动脉狭窄程度,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)测定外周血vWF-cp的浓度。结果:对照组的vWF-CP水平明显高于ACS组(P=0.000),亦明显高于SAP组(P=0.000),ACS组与SAP组相比,差异有统计学意义(P=0.023);ACS组GRACE评分明显高于对照组(P=0.000),SAP组亦明显高于对照组(P=0.008),ACS组与SAP组相比,ACS组明显升高,差异有统计学意义(P=0.033);不同Gensini积分的冠心病患者的vWF-cp水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。冠心病患者Gensini积分等级与vWF-cp水平无明显相关性(r=0.060,P=0.616)(采用Spearman’s rho法)。GRACE评分等级与vWF-cp水平呈负相关(r=-0.672,P=0.000)(采用Spearman’s rho法)。结论:GRACE评分联合vWF-cp可以在临床上更准确、有效的预测冠心病患者的风险及预后。

血管性假性血友病因子裂解酶活性检测方法的建立及其临床应用

目的建立一种检测血管性假性血友病因子裂解酶(vWF-cp)活性的方法,并探讨其临床应用。方法用Sepharose CL-4B柱层析法从正常人新鲜冰冻血浆中分离出血管性假性血友病因子(vWF)作为酶反应底物。然后联合应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印记与发光绘图法(SWL法),分别检测60名健康成人、28名脑梗塞和7名血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的血浆vWF-cp活性,并比较各组的检测结果。结果该法准确检测了60名健康成人和35名患者的血浆vWF-cp活性,批内和批间变异为4.81%和8.63%。60名健康成人vWF-cp活性为(86.53±17.49)%;脑梗塞vWF-cp活性为(77.15±16.72)%,其活性低于健康成人(P<0.05);7例TTP,血浆置换前vWF-cp活性为(9.06±7.17)%,其活性显著低于健康成人(P<0.01);血浆置换24h后vWF-cp活性为(47.00±6.27)%,其活性有所升高,但仍低于健康成人(P<0.01);恢复期vWF-cp活性为(83.18±8.83)%,其活性接近健康成人(P>0.05)。结论SWL法可准确检测健康成人和疾病患者的血浆vWF-cp活性,其敏感性、特异性和重复性较好,可应用于临床检验。与健康成人相比,脑梗塞患者vWF-cp活性降低;TTP患者vWF-cp活性显著降低,血浆置换能有效提高TTP患者vWF-cp活性水平。

PCI术前 术后血管性血友病因子及其蛋白裂解酶水平分析

目的通过检测经皮冠状动脉介入(PCI)术前、术后冠心病患者血浆中血管性血友病因子(vWF)及其裂解酶(vWFcp)水平,了解其与冠心病及PCI术的关系。方法根据冠脉造影结果将研究对象分对照组(造影正常)及PCI组(经造影确诊为冠心病并行PIC术),通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆vWF浓度和及血浆vWF-cp活性水平并进行统计分析。结果术前、术后PCI组血浆vWF水平明显高于对照组,PCI术后血浆vWF水平明显高于PCI术前(P<0.05)。PCI组vWF-cp活性水平较对照组降低,而PCI术后低于PCI术前(P<0.05)。血浆vWF水平随冠心病变严重程度而升高,vWF-cp活性水平随之降低。结论 vWF及vWF-cp水平随冠脉病变严重程度及血栓风险不同呈增高和减低趋势,在急性冠脉综合征的发病过程中可能起重要作用。PCI术后vWF及vWF-cp水平变化,提示介入治疗一定程度上可增加血栓形成风险。

冠心病患者外周血血管性假血友病因子裂解酶水平的变化及临床意义

目的 探讨不同危险分层的冠心病患者外周血血管性假血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）水平的变化及与高敏C反应蛋白（hs-CRP）、氨基末端利钠肽前体（NT-proBNP）、超敏肌钙蛋白 （hs-cTn）水平和左心室射血分数（LVEF）的相关性。方法 选取冠心病患者96例，稳定型心绞痛（SAP）47例，急性冠状动脉综合征（ACS）49例，其中包括不稳定型心绞痛（UAP）26例和急性心肌梗死（AMI）23例；同时选取冠状动脉无狭窄的患者49例作为对照组，所有入选患者均在入院后即刻采血，而急性心肌梗死患者均为发病6 h内，并在入院10～14天后再次采血。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆ADAMTS-13的浓度。结果 ACS组患者外周血ADAMTS-13水平（286.22±21.75 ng/L）明显低于SAP组（357.47±21.98 ng/L）和对照组（581.85±21.52 ng/L），AMI组与UAP组的外周血ADAMTS-13水平比较差异无统计学意义（256.21±29.43 ng/L比258.55±31.56 ng/L），AMI组10～14天后ADAMTS-13水平明显高于其急性期 （619.91±30.80 ng/L比256.21±29.43 ng/L）。ACS组hs-CRP、NT-proBNP、hs-cTn均明显高于对照组及SAP组，而LVEF低于对照组及SAP组，冠心病患者外周血ADAMTS-13水平的变化与其他血清学指标hs-CRP、NT-proBNP、hs-cTn等存在明显负相关，与LVEF存在明显正相关。结论 外周血ADAMTS-13水平变化与冠心病患者的危险分层密切相关，联合其他血清学指标和LVEF可能可以更好的预测冠心病患者急性心脏事件的发生。

血清可溶性尿激酶受体、胸腺肽α_1水平和血管性血友病因子裂解酶活性在肿瘤患者预后中的意义

目的 了解恶性肿瘤患者血清可溶性尿激酶受体 (suPAR)、胸腺肽α1(Tα1)水平和血管性血友病因子裂解酶 (vWF cp)活性水平与患者预后的关系并作比较。方法 以免疫放射分析、酶联免疫吸附试验和残余胶原结合力 (R CBA)的方法分别检测 60例手术前恶性肿瘤患者血清su PAR、Tα1水平和vWF cp活性并随访了 5 1例患者的预后情况。应用Kaplan Meier生存分析了解上述三个指标对恶性肿瘤患者的预后价值并比较之。其临界点选择健康对照数值的均数加 2倍标准差。结果 上述三个指标在术前恶性肿瘤患者中均显著改变 ,但仅suPAR水平和vWF cp活性水平与患者的预后相关。进一步以多元回归分析三个指标对患者预后的影响发现 ,以suPAR的影响最为显著。结论 suPAR可作为恶性肿瘤患者预后判断的可靠指标。

TSP2-8和CUB1+2片段对血管性血友病因子裂解酶分泌方向的影响

本研究旨在探讨羧基端TSP2-8和CUB1+2片段是否决定血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)合成后细胞内运输的方向,以了解金属蛋白酶ADAMTS13羧基端结构与功能的关系。利用脂质体转染技术将重组质粒pcDNA3.1-ADAMTS13及pcDNA3.1-delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13分别转染犬肾上皮极性细胞MDCK,筛选出阳性细胞克隆后传代铺到中间有特殊分子筛膜的双池培养皿内培养,待细胞生长到无空隙后收集上、下池培养液;通过Western blot检测上、下池培养液中ADAMTS13蛋白表达水平,以对比分析ADAMTS13蛋白在极性细胞内的分泌方向。结果表明,稳定表达野生型ADAMTS13的MDCK细胞组,在分子筛膜的上池培养液中检测到ADAMTS13蛋白,而表达缺失TSP2-8CUB1+2区域ADAMTS13的细胞组,在分子膜的上、下池培养液中均检测到ADAMTS13重组蛋白。结论:金属蛋白酶ADAMTS13的分泌是有极性的,且羧基端TSP2-8和CUB1+2结构域与ADAMTS13合成后细胞内的运输方向密切相关。

外周血血管性血友病因子裂解酶水平对急性心肌梗死的诊断效能

目的观察外周血血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)水平对急性心肌梗死(AMI)的诊断效能。方法接受冠状动脉造影检查的患者374例,根据AMI诊断标准和冠状动脉造影检查结果分为AMI组(218例)和对照组(156例)。采用酶联免疫吸附实验检测两组患者外周血ADAMTS13,并作比较。收集两组患者的年龄、性别、BMI、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史等一般资料,肌酸激酶同工酶(CK-MB)、左心室射血分数(LVEF)、脑钠肽(BNP)、左室舒张期内径、D-二聚体、纤维蛋白原、血小板计数、血小板平均体积、血小板比积、空腹血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯等实验室检测指标,并作比较;将两组差异有统计学意义的指标作为自变量,以AMI为因变量,采用二分类Logistic回归分析法分析AMI的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)评价外周血ADAMTS13水平对AMI的诊断效能。结果AMI组患者外周血ADAMTS13水平为749.44(340.66,1395.31)ng/m L,对照组患者外周血ADAMTS13水平为1251.15(561.80,2431.81)ng/m L,两组相比,P<0.001。两组患者的平均年龄、男性占比、有糖尿病史、有吸烟史、有饮酒史、CK-MB、LVEF、BNP、左室舒张内径、D-二聚体、纤维蛋白原、血小板平均体积、血小板比积、空腹血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯等指标相比,P均<0.05。外周血ADAMTS13水平、甘油三酯水平、空腹血糖水平、纤维蛋白原水平、血小板比积是AMI的独立影响因素。外周血ADAMTS13水平诊断AMI的曲线下面积为0.64,取截断值为993.26 ng/m L时,外周血ADAMTS13水平诊断AMI的敏感度为62.6%、特异度为60.8%。结论AMI患者外周血ADAMTS13水平降低;外周血ADAMTS13水平、甘油三酯水平、空腹血糖水平、纤维蛋白原水平、血小板比积是AMI的独立影响因素;检测外周血ADAMTS13水平有助于AMI的诊断。

血管性血友病因子裂解酶在脓毒性休克患者中低表达且对其预后有评估价值

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在脓毒性休克患者中的表达意义。方法:选取脓毒症患者150例,按严重程度分为单纯脓毒症组(43例)、重度脓毒症组(48例)、脓毒性休克组(59例)。另外选取同期体检的健康志愿者60例作为健康对照组。检测脓毒症组患者确诊后第1、3、5、7天及健康对照组血浆ADAMTS13水平,并行急性生理与慢性健康状况评估(APACHEⅡ)评分,随访患者28 d预后情况,分析上述指标对患者预后的预测价值。结果:脓毒症组不同时间点血浆ADAMTS13水平均低于健康对照组(P均<0.05)。脓毒症3个亚组ADAMTS13、血管性血友病因子(vWF)、抗凝血酶(AT)、白细胞介素(IL)-6水平、APACHEⅡ评分比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。单纯脓毒症组ADAMTS13、AT高于重度脓毒症组和脓毒性休克组且重度脓毒症组高于脓毒性休克组(P均<0.05),vWF、IL-6水平、APACHEⅡ评分低于重度脓毒症组和脓毒性休克组,且重度脓毒症组低于脓毒性休克组(P均<0.05)。单纯脓毒症组和重度脓毒症组患者均无死亡病例。脓毒性休克组中存活29例,死亡30例,死亡率为50.85%。脓毒性休克死亡患者血浆ADAMTS13、AT水平低于存活者,vWF、IL-6水平、APACHEⅡ评分高于存活者(P均<0.05)。血浆ADAMTS13、vWF、AT、IL-6水平、APACHEⅡ评分为脓毒性休克患者预后的危险因素(P均<0.05)。ADAMTS13、vWF、AT、IL-6水平、APACHEⅡ评分对脓毒性休克患者预后死亡的预测价值较高,其中以ADAMTS13预测价值最高(P均<0.05)。结论:脓毒性休克患者血浆ADAMTS13水平明显降低,降低程度与患者疾病严重程度及预后有关,可能与调控vWF、AT、IL-6水平表达,介导炎症、凝血障碍的发生相关。

2型糖尿病患者血管并发症与血浆血管性血友病因子裂解酶的关系

目的检测2型糖尿病患者血浆血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)活性,探讨其在糖尿病血管并发症中的意义。方法将74名2型糖尿病患者根据是否合并有血管并发症分为无并发症组(24例)、微血管并发症组(27例)、大血管并发症组(23例)。观察不同组患者血浆vWF-cp活性水平,并与正常对照组(40例)比较。结果2型糖尿病患者血浆vWF-cp活性水平明显低于正常对照组(P<0.05);合并大血管病变组vWF-cp水平明显低于其他糖尿病组(P<0.05)。结论血浆vWF-cp活性水平下降可能是2型糖尿病患者容易形成血栓的另一重要原因。vWF-cp活性异常可能在糖尿病的临床进展和并发症的发生中起重要作用。

血栓性血小板减少性紫癜患者血管性血友病因子裂解酶活性的分析

目的通过对2例血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者诊疗经过的回顾及对血管性血友病因子裂解酶 (vWF-CP)活性研究,以提高对 TTP 发病机制及治疗的认识。方法报道2例 TTP 患者的诊疗经过并作文献复习,采用分析蛋白裂解片段法检测2名患者和正常人血浆 vWF-CP 活性。结果 2例 TTP 患者均痊愈出院。血浆置换治疗前血浆 vWF-CP 活性明显低于正常人,而治疗后其活性明显上升。结论 vWF-CP 活性下降或丧失是 TTP 的主要病因；血浆置换治疗明显优于血浆输注。

血管性血友病因子裂解酶活性域的表达及其单克隆抗体的制备

血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)是一种新发现的金属蛋白酶,与血栓性微血管病的发生密切相关。本研究应用IPTG从pET28a(+)-vWF-cp/MD质粒中诱导表达了vWF-cp的金属蛋白酶域,重组蛋白经Ni-NTA柱纯化,复性后免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了稳定分泌抗vWF-cp金属蛋白酶域抗体的细胞株,进一步对其单克隆后,收集细胞接种于小鼠腹腔产生腹水,鉴定所获得的单克隆抗体,同时,利用单克隆抗体确定vWF-cp在组织细胞中的位置及其在各种正常组织中的表达情况。结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的28%。利用杂交瘤技术制备出3株抗vWF-cp单克隆抗体,对其中2株单克隆抗体作了进一步的鉴定。免疫双扩散和竞争ELISA结果显示,它们均属IgG1亚类,腹水中的含量约为4mg/ml,效价达1×10-5,而且识别vWF-cp金属蛋白酶域不同的表位。Westernblot和免疫沉淀结果表明,2株单克隆抗体能够识别重组蛋白和正常血小板中200kD的蛋白。在组织细胞中,2株单克隆抗体识别的蛋白位于细胞胞质内,而且在多种正常组织如肝、前列腺和卵巢等组织中表达,但脑组织中无该蛋白的表达。结论:本研究为了解vWF-cp在组织中的分布以及进一步研究该蛋白酶的结构和功能奠定了基础,并且可用所制备的单克隆抗体建立vWF-cp抗原的检测方法。

丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响

目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响，初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养，将细胞接种在培养瓶中，待细胞融合至80％～90％时，更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0．1、0．5、1．0、2．0mg／L的培养基，培养24h后，收集人肾小管上皮细胞并提取mRNA，转化为CDNA，用实时定量荧光聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶mRNA的表达，并经凝胶成像行半定量分析。结果以空白对照人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA量为参照1，则0．1、0．5、1．0、2．0mg／L浓度丹参多酚酸盐共培养后的人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA依次为2．39、3．05、4．65和6．65，数据为重复2次实验的平均值。结论人肾小管上皮细胞可表达血管性血友病因子裂解酶mRNA，丹参多酚酸盐能增加人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的表达。丹参多酚酸盐对肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的调节可能会影响肾脏局部循环的出血、凝血状态，可能是丹参多酚酸盐的药理机制之一。