血管抑制蛋白VASH1在NSCLC中的表达及意义

目的探讨血管生成抑制蛋白1（vashohibin-1,VASH1）、微血管密度（microvessel density,MVD）在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及VASH1与临床病理特征及MVD的关系。方法采用免疫组织化学方法检测72例NSCLC组织、30例癌旁组织、21例肺良性病变组织蜡块中VASH1表达与MVD水平,同时分析VASH1与NSCLC患者临床病理特征的关系,并探讨其与MVD二者之间的相关性。结果 NSCLC、癌旁组织和肺良性病变组织中VASH1蛋白阳性表达率分别为73.6%（53/72）、26.7%（8/30）、14.3%（3/21）,三者间比较差异有统计学意义（χ^2=33.15,P〈0.01）。VASH1的表达在NSCLC的淋巴结转移、TNM分期和分化程度方面差异有统计学意义（均P〈0.05）,且NSCLC组织中VASH1表达与MVD水平亦呈正相关（r=0.434,P〈0.01）。结论 VASH1在NSCLC组织中表达升高,与NSCLC淋巴结转移、TNM分期、组织分化紧密相关,其在NSCLC的发生、发展过程中起重要作用。

循环血管生成素样蛋白8在糖脂代谢方面最新研究进展

动脉粥样硬化及其相关并发症已成为全球范围内广泛流行的疾病。既往大量研究均表明,糖脂代谢紊乱是动脉粥样硬化及其并发症的重要危险因素。血管生成素样蛋白(ANGPTL)8作为一种最近发现的激素,它与脂质代谢,2型糖尿病的发生、胰岛素抵抗密切相关,近期的研究也表明,血清ANGPTL8与颈动脉内膜增厚呈正相关[1-2]。并且与冠状动脉粥样硬化性疾病及外周动脉粥样硬化性疾病的严重程度呈正相关[3]。进一步深入研究证明循环ANGPTL8能够对动脉粥样硬化未来发展、相关并发症的发生有良好的预测作用。ANGPTL8有望成为预测动脉粥样硬化的独立危险因素。监测血清ANGPTL8含量及时采取干预治疗措施具有及其重要的意义。我们将这一新的糖脂代谢调控因子ANGPTL8,在糖脂代谢调控中的重要作用及其相关的机制进行概述。

新生血管特异性结合肽GX1抑制小鼠视网膜新生血管生成的实验研究

目的:观察GX1短肽对小鼠视网膜新生血管有无特异性结合及对其生成的作用。方法:采用高氧诱导小鼠视网膜新生血管生成,免疫组化检测小鼠视网膜新生血管有无GX1短肽受体表达,并比较GX1作用组与对照组视网膜新生血管内皮突破视网膜内界膜的细胞核数目及视网膜铺片血管密度的差异。结果:GX1短肽能与小鼠视网膜新生血管特异性结合,且GX1作用后,高氧诱导小鼠视网膜新生血管密度及迂曲程度较对照组减低,突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目减少。结论:GX1短肽具有抑制小鼠视网膜新生血管生成的作用。

重组人血管能抑制素分泌型表达载体的构建及其生物学效应研究

目的 构建表达分泌型人血管能抑制素 (canstatin)蛋白的真核表达载体 ,观察其生物学效应。方法 以SOEPCR法将canstatin及癌胚抗原 (CEA)引导肽cDNA体外连接 ,并定向克隆到真核蛋白表达载体pCMV Script上 ,脂质体介导转染HUVEC及A5 4 9细胞 ,荧光定量PCR法检测转染细胞canstatin基因表达量 ,并采用多种方法检测该重组载体的生物学活性。结果 成功构建canstatin分泌型载体 ,在其转染的肿瘤细胞和人脐静脉内皮细胞中均检测到不同拷贝数的表达。转染后HUVEC生长增殖缓慢 ,出现G0 ～G1期阻滞并伴有大量凋亡 ,与空载体转染组相比差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;而A5 4 9细胞转染后与空载体转染组在以上几个方面差异均无统计学意义 (P >0 0 5 )。重组载体转染A5 4 9细胞上清液干预的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成明显减少 ,且颜色苍白、轮廓模糊 ,空载体转染组和未干预组血管生长旺盛、脉络清晰。结论 SOE法构建的含有CEA引导肽的canstatin分泌型表达载体能在转染的内皮细胞及肺癌细胞中稳定表达 ,可有效抑制内皮细胞生长增殖并诱导凋亡。重组载体转染的细胞可分泌有生物学活性的canstatin。

解偶联蛋白与心肌能量代谢研究进展

解偶联蛋白（unoupling proteins．UCP）是存在于细胞线粒体内膜上的蛋白质，占整个线粒体蛋白6％～8％，它能降低线粒体内膜电化学梯度从而减少能量生成，同时释放热量。目前已发现了5类：UCP1～5，这5类UCP在结构和功能上相似，因分布不同，它们的生理作用有所不同，在心血管系统中主要表达的是UCP2、UCP3，现就UCP2、UCP3的结构与功能、主要生理作用及其在心血管疾病中的研究进展作一综述。

血管生成抑制因子METH-1腺病毒载体的构建

目的:利用大肠杆菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度的病毒。方法:实验于2004-08/2005-08在中山大学眼科中心国家重点实验室完成。自真核表达载体pMD18-T-METH1中酶切出METH1基因,亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-METH1,在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-METH1。以pAd-METH1为模板,经DNA测序正确后,用PacI酶切线性化pAd-METH1,转染293细胞,包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察转染细胞增强型绿色荧光蛋白的表达,采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:①构建了携带外源基因人血管生成抑制因子的穿梭载体pAdTrack-CMV-METH1。②制备了METH1重组腺病毒载体pAdEasy-METH1。③METH1重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞中进行有效的复制。结论:应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体,制备高滴度重组病毒,为METH1基因功能研究奠定了基础。

所谓肺硬化性血管瘤组织中Cox-2、bcl-2蛋白表达及意义

目的:探讨Cox-2、bcl-2在所谓肺硬化性血管瘤(So-called pulmonary sclerosing hemangioma,PSH)组织中的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化S-P法,检测35例所谓肺硬化性血管瘤、8例肺炎性假瘤(pulmonary pseu-dotumor,PP)、8例正常肺组织(normal lung tissue,NL)中Cox-2的bcl-2的蛋白表达。结果:Cox-2和bcl-2蛋白在35例PSH组织中的阳性表达率分别为14.29%(5/35)和31.43%(11/35),在8例PP组织中的阳性表达率分别为0%(0/8)和12.5%(1/8),而8例NL组织中均呈阴性表达。Cox-2、bcl-2蛋白在PSH、PP、NL三种组织中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在PSH中,Cox-2与bcl-2蛋白表达之间存在相关关系。结论:bcl-2与Cox-2蛋白表达并不直接参与PSH的发生发展;PSH中bcl-2与Cox-2之间存在着相关性表达,即bcl-2与Cox-2蛋白在PSH发生、发展中可能存在一定的协同调控作用关系。

抗凋亡蛋白ARC对人主动脉血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨抗凋亡蛋白ARC对人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)凋亡的影响。方法体外培养HA-VSMC,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测ARC在HA-VSMC中的表达水平,以及HA-VSMC经H2O2时间梯度处理后ARC的表达量随着时间的变化;经合成的ARC过表达的腺病毒(Ad-ARC)处理HA-VSMC 24 h后,通过Western blot方法检测ARC在HA-VSMC中的过表达情况;Ad-ARC和H2O2同时处理HA-VSMC,通过caspase3/7活性检测实验和锥虫蓝染色实验检测细胞的凋亡情况。结果RT-qPCR结果显示,与H9c2、HAEC、KEK293相比,ARC在HA-VSMC中表达相对较高(F=84.50,P<0.05);RT-qPCR结果显示,在H2O2时间梯度处理以后,随着时间的推移HA-VSMC中ARC的表达量越来越低(F=8.83,P<0.05);Western blot方法检测结果显示,与对照组和β-gal组进行比较,Ad-ARC组HA-VSMC中ARC的表达量显著上调(F=296.00,P<0.01);caspase3/7活性检测实验和锥虫蓝染色实验检测结果显示,与经过H2O2处理组相比,Ad-ARC明显抑制了H2O2诱导的HA-VSMC的凋亡(F=55.46、190.10,P<0.05)。结论抗凋亡蛋白ARC在HA-VSMC中高表达,过表达ARC可抑制H2O2诱导的HA-VSMC的凋亡。

视网膜新生血管中受体酪氨酸激酶及其抑制剂的开发利用

目的:视网膜血管性疾病的发生是多生长因子相互作用的结果,细胞内的酪氨酸激酶级联反应可调控基因表达、调节细胞的有丝分裂和增殖分化。为此本文就视网膜血管性疾病与受体酪氨酸激酶进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-01/2006-05期间的相关文章,检索词为“retina,neovascularization,growthfactor,receptor,inhibitor,receptor tyrosine kinase”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库2000-01/2006-05期间的相关文章,检索词为“视网膜,新生血管,受体酪氨酸激酶,信号传导,生长因子,抑制剂”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与视网膜血管性疾病或受体酪氨酸激酶相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到198篇相关文献,31篇文献符合纳入标准,排除的167篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的31篇文献中,2篇涉及视网膜新生血管与酪氨酸激酶的相关性,2篇涉及酪氨酸激酶信号传导途径,15篇涉及视网膜血管性疾病中生长因子及其受体的表达,14篇涉及视网膜新生血管与生长因子间的相互作用及酪氨酸激酶抑制剂的研究。资料综合:在视网膜血管性疾病中,视网膜中表达多种血管生长因子及酪氨酸激酶受体,通过细胞内的受体酪氨酸激酶的信号传导途径,调控基因表达、调节细胞的有丝分裂和增殖分化,从而参与视网膜新生血管的生成。从阻断多种生长因子的酪氨酸激酶信号传导途径着手,开发了一系列酪氨酸激酶抑制剂。结论:对受体酪氨酸激酶信号传导机制的深入研究及开发利用受体酪氨酸激酶抑制剂,将为视网膜新生血管疾病的治疗提供一种新的、安全、有效的途径。

儿童原发性肾病综合征VCAM-1、hs-CRP水平及与脂代谢的关系

目的通过检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)了解儿童原发性肾病综合征(PNS)脂代谢紊乱对血管内皮细胞功能、微炎症状态及凝血功能的影响。方法选取符合PNS标准的患儿65例为病例组,选取性别、年龄与之匹配的健康体检儿童45例为对照组。分别应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法及免疫比浊法测定病例组治疗前后及对照组血清中VCAM-1和hs-CRP的水平,应用特种蛋白分析仪测定2组24 h尿蛋白定量,并检测血浆白蛋白(ALB)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白(Apo)A1、ApoB、脂蛋白a[LP(a)]、纤维蛋白原(Fb)及D二聚体水平。采用Pearson法分析上述指标与VCAM-1、hs-CRP的相关性。结果病例组治疗前VCAM-1和hs-CRP水平明显高于对照组,治疗后VCAM-1和hs-CRP水平明显低于治疗前;血浆VCAM-1、hs-CRP与尿蛋白定量、血TG、TC、LDL-C、ApoB、LP(a)、Fb、D二聚体水平呈正相关,而与血清ALB、HDL-C呈负相关(P<0.05)。结论PNS患儿急性期VCAM-1、hs-CRP水平明显增高,监测血浆VCAM-1和hs-CRP水平可对PNS微炎症状态、内皮细胞损伤、高凝状态及血栓形成进行预测及评估。

白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用。方法:利用HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,研究白藜芦醇的体内抑瘤作用以及其对移植瘤微血管密度的影响。结果:白藜芦醇治疗组能不同程度抑制裸鼠肝脏移植瘤的生长,Res腹腔注射2周后,50mg/kgRes处理组瘤体显著小于生理盐水(NS)组和0.1%DMSO组且无明显的毒性反应;Res50mg/kg处理组MVD值(18.5±3.2)与对照组的MVD值(44.2±4.1)相比明显降低,差异有统计学意义。结论:Res可抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移,对裸鼠的主要脏器无明显毒副作用。

胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性与辛伐他汀的调脂效应

目的:探讨胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性对血脂水平及辛伐他汀降脂疗效的影响。方法:选择北京大学第一医院心内科住院的血脂异常患者369例。均签署知情同意书的患者。运用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法测定胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性位点的基因型。对其中211例伴高胆固醇血症的冠心病患者给予辛伐他汀20mg/d治疗,4周后测定血脂变化值,分析胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性与基线血脂及服用辛伐他汀后血脂变化值的相关性。结果:血脂异常患者369例均进入结果分析。①中国北方血脂异常患者中的胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性位点的基因型频率分别为II基因型22.5%,IV基因型50.0%,VV基因型22.5%。②不同基因型的患者服用辛伐他汀4周后,II基因型患者三酰甘油下降最多,IV基因型次之,VV基因型下降最少。IV基因型比II基因型的总胆固醇降低值减少了0.27mmol/L(P=0.01),VV基因型比II基因型的三酰甘油降低值减少了0.40mmol/L(P<0.01)。IV+VV基因型比II基因型的总胆固醇降低值减少了0.31mmol/L(P<0.01)。③调整了年龄,性别,体质量指数混杂因素的影响作用后,II基因型患者服药4周后低密度脂蛋白胆固醇下降较多,IV+VV基因型下降较少。IV+VV基因型比II基因型的低密度脂蛋白胆固醇降低值减少了0.27mmol/L(P=0.03)。而三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇的变化值在不同基因型患者中差异不明显。④基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律的检验采用卡方检验;不同基因型间基线血脂和服药后血脂变化值的比较采用方差分析;比较不同基因型和基线血脂以及服药后血脂变化的标准回归系数(β)大小用多元线性回归分析。结论:胆固醇酯转运蛋白基因的II基因型携带者对他汀类药物调脂疗效的反应最强。胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性可能是预测北京地区高胆固醇血症患者中他汀类药物调脂效应个体化差异的标记物之一。

Caveolin-1对内皮细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究Caveolin-1蛋白在内皮细胞增殖中的作用,其与Ras-p42/44MAPK细胞信号通路的关系。方法:以腺病毒介导在内皮细胞中表达外源Caveolin-1蛋白,分析其对内皮细胞增殖和p42/44MAPK分子磷酸化水平的影响。结果:感染腺病毒表达外源Caveolin-1蛋白的内皮细胞中,血管内皮生长因子(VEGF)诱导的3H-胸腺嘧啶掺入量降低了35%(n=3,P=0.009),p42/44MAPK分子磷酸化水平降低了47.6%。结论:Caveolin-1蛋白抑制p42/44MAPK分子磷酸化水平,抑制内皮细胞增殖。

Mta-1在甲状腺肿瘤中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

【目的】探讨转移相关基因（Mta-1）蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。【方法】选择甲状腺肿瘤石蜡组织标本160例，其中甲状腺癌120例和甲状腺腺瘤40例，另选择正常甲状腺组织50例。采用免疫组织化学SP法检测上述标本中Mta-1蛋白的表达，并检测其肿瘤微血管计数（MVC），分析Mta-1蛋白的表达与肿瘤血管生成的关系。【结果】甲状腺癌中Mta-1阳性表达和M VC值明显高于正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤，其差异有统计学意义（P＜0．05）。在120例甲状腺癌组织中，Mta-1的阳性表达和MVC值均与是否有颈部淋巴结转移、包膜完整性及 TNM 分期密切相关（ P＜0．01），而与其他临床病理特征指标无关（P＞0．05）。甲状腺癌组织中 Mta-1表达与MVC 值呈正相关（r＝0．625，P＜0．01）。【结论】Mta-1蛋白的异常表达与甲状腺癌的发生、浸润、淋巴转移等恶性潜能密切相关，其参与了甲状腺癌组织中肿瘤新生血管的生成。

TRPC_3参与缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)在缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用。方法:采用HUVECs细胞株,复苏传代后计数稀释,接种于6孔培养板中,实验组分为常氧对照组(5%CO2+95%空气)和缺氧组(1%O2+5%CO2+94%N2),处理24h后,应用实时荧光定量RT-PCR法及WesternBlot法检测TRPC3mRNA和蛋白水平的表达变化。构建靶向TRPC3基因的siRNA和无关序列质粒表达载体,分别转染至HUVECs,缺氧处理后再用四甲基偶氮唑盐比色法(Methods the tetrazolium,MTT)检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡。结果:缺氧处理24h,HUVECs中TRPC3mRNA和蛋白表达明显升高,细胞存活率为67.4%,与常氧对照组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3干扰组细胞存活率为92.7%,与缺氧组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3假干扰组与缺氧组无显著性差异(P>0.05)。荧光显微镜下观察,常氧对照组胞核均匀蓝染;缺氧处理组和缺氧+TRPC3假干扰组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;而缺氧+TRPC3干扰组胞核均匀蓝染。结论:TRPC3参与缺氧诱导HUVECs凋亡。

抗血管生成治疗在腺样囊性癌中的应用进展

唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）是口腔颌面部最常见的腺源性恶性肿瘤之一,其浸润性极强,与周围组织无界限,易侵入血管,造成血行性转移,转移率高达40%,为口腔颌面部恶性肿瘤中血循转移率较高的肿瘤之一,

Survivin、VEGF在前列腺癌中的表达及与微血管密度的相关性

目的:探讨Survivin、VEGF在前列腺癌(Pca)中的表达及与微血管密度(MDV)的关系。方法:采用免疫组化SP法分别测定42例PCa组织及10例正常前列腺(NP)组织中Survivin和VEGF的表达和MDV记数。结果:Survivin、VEGF在PCa中的阳性表达率分别为80.59%和69.05%,与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Pca中MVD计数显著高于正常前列腺组织,两者之间有显著性差异(P<0.01)。PCa组织中Survivin、VEGF和MVD计数的表达之间均呈正相关。结论:Survivin和VEGF在Pca中的表达呈正相关,其作用具有协同性,可促进肿瘤血管增生,在PCa的发生、发展中起一定的作用。

他汀类药物基因组学的研究

降血脂是目前防治心血管疾病最有效的手段。他汀类药物,即β羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂,是广泛用于临床的降血脂药物,其疗效问题一直受到医学界的关注,尤其是遗传因素对其疗效及副作用的影响。近年的许多研究指出,脂蛋白代谢相关基因的变异与他汀类药物降血脂疗效有关,现就此问题进行综述。