血管活性肠多肽对老龄勃起功能障碍大鼠的作用及机制研究

目的 观察血管活性肠多肽(VIP)对老龄勃起功能障碍(ED)大鼠的作用及其机制。方法40只SPF级雄性SD大鼠饲养至18月龄构建老龄模型大鼠,采用阿扑吗啡实验筛选老龄ED大鼠,阿扑吗啡实验结果阳性的老龄勃起功能正常大鼠为正常组,实验结果阴性的老龄ED大鼠为ED组和干预组,每组7只。干预组大鼠使用VIP 25 ng/kg隔日腹腔注射,治疗28 d。检测阴茎海绵体内压(ICP)及平均动脉压(MAP)评估勃起功能;酶联免疫吸附法检测大鼠阴茎海绵体组织环磷酸腺苷(cAMP)、一氧化氮(NO)含量;组织免疫荧光技术(IF)测大鼠阴茎海绵体组织血管性血友病因子(vWF)表达水平;蛋白质印迹法检测海绵体蛋白激酶A (PKA)、内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)、血管性血友病因子(vWF)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果 正常组、ED组和干预组基础ICP分别为(20.41±5.92)mmHg、(21.76±5.37)mmHg和(18.54±3.97)mmHg(1mmHg=0.133 kPa),MAP分别为(123.52±14.74)mmHg,(118.83±10.97)mmHg和(114.28±12.21)mmHg,各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,ED组Max ICP、Max ICP/MAP明显降低[Max ICP:(42.10±6.57)mmHg比(94.82±9.71)mmHg;Max ICP/MAP:(0.36±0.08)比(0.78±0.16),P均<0.01]。与ED组比较,干预组Max ICP、Max ICP/MAP明显升高[Max ICP:(59.52±2.20)mmHg比(42.10±6.57)mmHg,P<0.01;Max ICP/MAP:(0.52±0.06)比(0.36±0.08),P<0.05]。与正常组比较,ED组vWF荧光强度明显减少,干预组明显增加。与正常组比较,ED组cAMP和NO含量均降低[cAMP:(33.11±11.82)pmol/mg比(94.63±9.36)pmol/mg;NO:(3.05±1.51)nmol/mg比(11.59±2.43) nmol/mg,P均<0.01];PKA、eNOS、vWF及VEGF蛋白表达水平降低[PKA:(0.66±0.08)比(1.04±0.22);eNOS:(0.54±0.13)比(0.71±0.09);vWF:(1.22±0.30)比(2.04±0.24);VEGF:(0.45±0.13)比(0.82±0.18),P<0.05或P<0.01];与ED组比较,干预组cAMP、NO含量均增加[cAMP:(58.46±9.48)pmol/mg比(33.11±11.82)pmol/mg;NO:(5.31±1.39)nmol/mg比(3.05±1.51)nmol/mg,P<0.05或P<0.01];PKA、eNOS、vWF、VEGF蛋白表达水平增加[PKA:(0.97±0.11)比(0.66±0.08);eNOS:(0.68±0.10)比(0.54±0.13);vWF:(1.82±0.39)比(1.22±0.30);VEGF:(0.65±0.07)比(0.45±0.13),P<0.05或P<0.01]。结论 VIP可能通过调控cAMP/PKA信号通路与海绵体内皮细胞功能从而改善老龄大鼠ED。

薯蓣皂苷元通过激活VIP/cAMP/PKA通路改善慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和肺损伤

目的探讨薯蓣皂苷元对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠及血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、薯蓣皂苷元组(100 mg/kg)、阳性组(地塞米松0.81 mg/kg)、薯蓣皂苷元+H89组(100 mg/kg薯蓣皂苷元+1 mg/kg VIP/cAMP/PKA通路抑制剂H89),每组12只。4周后,采用全身体积描记系统检测大鼠肺功能,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中炎症因子水平及肺组织cAMP水平,采用HE染色检测肺组织病理变化,采用流式细胞术测定肺Th17、Treg细胞比例,采用蛋白质印迹法检测肺组织VIP、PKA蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织有炎症细胞浸润、部分血管破裂等损伤,炎症评分、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05);与模型组比较,薯蓣皂苷元组、阳性组大鼠肺功能损伤缓解,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均降低(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA升高(P<0.05);与薯蓣皂苷元组比较,薯蓣皂苷元+H89组大鼠肺功能损伤加重,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05)。结论薯蓣皂苷元可能通过激活VIP/cAMP/PKA通路,改善COPD大鼠气道炎症和肺损伤。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方治疗气虚型便秘大鼠的作用机制

目的:基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方对气虚便秘模型大鼠作用及其机制。方法:选取48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组、益气润肠方低剂量组、益气润肠方中剂量组和益气润肠方高剂量组,每组8只。空白组大鼠正常饮食,每日给予生理盐水灌胃,其余大鼠给予洛哌丁胺混悬液3 mg/(kg·d)灌胃加饥饱饮食2周制作气虚便秘模型。造模成功后,空白组及模型组每日给予生理盐水灌胃,乳果糖组给予乳果糖口服溶液1.67 g/(kg·d)灌胃,益气润肠方高、中、低剂量组分别给予益气润肠方17.5、8.75、4.375 g/(kg·d)灌胃,连续2周。14 d后称量大鼠粪便湿重、粪便干重并计算粪便含水率;留取结肠组织,采用苏木精伊红染色法观察结肠病理变化,qPCR检测大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western blot检测大鼠VIP、AQP3蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.01),粪便湿重及粒数明显减少(P<0.01);与模型组比较,益气润肠方低、中、高剂量组和乳果糖组体质量明显增高(P<0.01,P<0.05),粪便湿重增加、粪便粒数增多(P<0.05,P<0.01),但粪便含水率无统计学意义(P>0.05)。与乳果糖组比较,益气润肠方中、高剂量组粪便湿重明显增加、粪便粒数显著增多(P<0.05)。与空白组比较,模型组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,乳果糖组及益气润肠方各剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),益气润肠方高剂量组效果最显著(P<0.01),且优于乳果糖组(P<0.05)。与模型组比较,益气润肠方各剂量组VIP、AQP3的蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。益气润肠方可以明显改善咯派丁胺造成的便秘大鼠的肠道病理形态损害。结论:益气润肠方可通过调控VIP-cAMP-PKA-AQP3通路治疗大鼠气虚型便秘。

大黄素对术后肠梗阻大鼠胃肠动力、炎症和氧化应激反应的影响及机制研究

目的:探究大黄素(Emo)对术后肠梗阻(POI)大鼠胃肠动力、炎症和氧化应激反应的影响及相关机制。方法:将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、针灸治疗组、Emo治疗组和通路干预组,每组6只。通过腹部手术在大鼠中诱导POI模型。对照组和模型组大鼠给予0.9%氯化钠溶液。针灸治疗组给予针刺相应腧穴。Emo治疗组给予Emo 80 mg/kg灌胃。通路干预组给予Emo 80 mg/kg灌胃和血管活性肠肽(VIP)激活剂Prepro VIP 5 nmol/kg尾静脉注射。通过胃排空(GE)和胃肠道转运(GIT)实验来确认胃肠道运动。通过检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平和髓过氧化物酶(MPO)活性来确认炎症反应。通过检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平来证实氧化应激反应。采用HE染色观察组织病理学变化。采用Western blot检测VIP/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,模型组组织结构受损明显,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平降低,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、水通道蛋白3(AQP3)、磷酸化PKA(p-PKA)水平和MPO活性升高(均P<0.05)。经针灸和Emo治疗后,组织结构损伤得到明显改善,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平增加,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、AQP3、p-PKA水平和MPO活性降低(均P<0.05)。此外,使用VIP激动剂可明显逆转Emo治疗对POI大鼠的影响。结论:Emo可能通过抑制VIP/cAMP/PKA信号通路防止POI大鼠胃肠动力下降,并降低炎症及氧化应激水平。

利血平致脾虚大鼠唾液蛋白分泌改变及其机制的探讨

目的观察利血平致脾虚大鼠唾液蛋白分泌的改变并探讨其机制。方法利血平组大鼠20只皮下注射0.4mg/(kg.d)利血平9d造模,对照组大鼠20只注射生理盐水9d;10d时两组各随机抽取10只大鼠检测酸刺激前后唾液淀粉酶活性(sAA)比值,眼眶静脉采血检测血清的血管活性肠肽(VIP)和环磷酸腺苷(cAMP),处死动物取腮腺检测VIP和cAMP,取腮腺HE染色病理组织学观察和透射电镜计数腮腺酶原颗粒。两组剩余大鼠均停止注射并正常饲养40d,检测以上项目。结果利血平组大鼠较对照组食量明显减少、体重下降。10d时:利血平组sAA活性比值(0.39±0.18)显著低于对照组(0.80±0.21,P<0.01),25d已恢复正常并持续至40d(与本组10d比较,P<0.05;与对照组比较,P>0.05);HE染色病理组织学检查未见两组腮腺有明显病理改变,透射电镜发现利血平组的单位观察视野腮腺酶原颗粒数(41.4±4.9)高于对照组(34.6±5.2,P<0.01);血清VIP利血平组(22.5±13.1mg/L)低于对照组(38.5±14.1mg/L,P<0.05),腮腺VIP两组差异无统计学意义;血清cAMP利血平组(125.8±15.5μmol/L)高于对照组(105.3±16.7μmol/L,P<0.05),腮腺cAMP两组差异无统计学意义。40d时各项检测指标两组比较差异无统计学意义。结论利血平致脾虚大鼠酸刺激下唾液蛋白分泌减少,可能与VIP和cAMP调节途径有关。

利血平对大鼠唾液蛋白分泌的影响

目的:观察利血平对大鼠唾液蛋白分泌的影响.方法:实验大鼠随机分为2组,实验组皮下注射利血平0.4mg/(kg·d),正常组皮下注射等量生理盐水.10d后,抽取唾液检测酸刺激前后唾液淀粉酶活性(sAA)比值;HE染色检测腮腺形态学和透射电镜计数腮腺酶原颗粒;ELISA法检测血管活性肠肽(VIP)和环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果:实验组较正常组摄食量明显减少,体质量下降;sAA活性比值显著低于正常组(0.39±0.18vs0.80±0.21,P<0.01);HE染色未见2组腮腺有明显病理改变,透射电镜发现实验组腮腺单位观察视野内酶原颗粒数量明显高于正常组(41.4±4.9vs34.6±5.2,P<0.01);实验组血清VIP含量明显低于正常组(22.5±13.1μg/Lvs38.5±14.1μg/L,P<0.05),2组腮腺VIP含量无明显差异;实验组血清cAMP明显高于正常组(125.8±15.5nmol/Lvs105.3±16.7nmol/L,P<0.05);2组腮腺cAMP水平无明显差异.结论:利血平导致大鼠消化代谢机能下降,在酸刺激下大鼠的唾液蛋白分泌明显减少,可能是通过降低血清VIP水平调节唾液蛋白分泌.

消积通便方对便秘小鼠VIP-cAMP-PKA信号通路的影响

目的探讨消积通便方治疗便秘的作用机制。方法将64只SPF级雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、消积通便方低剂量组、消积通便方中剂量组、消积通便方高剂量组、莫沙必利组。空白组给予生理盐水灌胃,其余各组给予洛哌丁胺10 mg/kg灌胃,均每日2次,共14 d。消积通便方低、中、高剂量组以及莫沙必利组小鼠均于第8天开始灌胃相应药物,正常组和模型组灌胃等量的生理盐水,均连续7 d。观察各组小鼠一般情况,记录实验第15天胃排空率及肠道推进率,采用ELISA法测定血清中血管活性肠肽(VIP)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,HE染色观察结肠组织黏膜情况,实时荧光定量PCR法检测结肠组织中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)mRNA表达情况。结果空白组小鼠一般状态良好,体重逐步增加;模型组小鼠有不同程度易激惹或倦怠,精神不振,反应迟钝,进食量及饮水量减少;消积通便方各组及莫沙必利组小鼠精神状态及活动改善,进食、饮水量渐增。与空白组比较,模型组小鼠胃排空率及血清VIP、iNOS水平均明显增高(P均<0.05),肠道推进率及结肠组织中PKA mRNA、cAMP mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);HE染色显示结肠黏膜固有层及黏膜下层可见炎性细胞浸润,肌层明显变薄。与模型组比较,消积通便方中、高剂量组及莫沙必利组小鼠胃排空率及血清VIP、iNOS水平均明显降低(P均<0.05),消积通便方高剂量组和莫沙必利组小鼠肠道推进率及结肠组织中PKA mRNA、cAMP mRNA表达量均明显升高(P均<0.05);HE染色显示消积通便方中、高剂量组及莫沙必利组小鼠结肠组织损伤明显减轻。结论消积通便方可能通过下调VIP、iNOS水平,激活cAMP-PKA通路,从而调节肠道平滑肌的活动,促进肠蠕动,缓解便秘症状。

五味子乙素调节VIP/cAMP/PKA信号通路对肺炎链球菌肺炎大鼠肺组织损伤的影响

目的:探讨五味子乙素对肺炎链球菌(SP)肺炎大鼠肺组织损伤的影响,并分析其潜在的分子机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型组、左氧氟沙星(75 mg/kg)组及五味子乙素低(40 mg/kg)、高(80 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠鼻腔内滴入SP菌液(50μL,1×10^(8)CFU/mL)建立SP肺炎模型。各组大鼠给予相应的干预1 w。在末次干预后24 h,检测肺湿质量/干质量(W/D)比值;ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10水平;HE染色观察肺组织病理学变化;免疫荧光分析肺组织巨噬细胞的极化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)分离肺泡巨噬细胞,RT-qPCR检测其中M1和M2巨噬细胞标志物(iNOS、TNF-α、Arg-1、IL-10)基因表达;蛋白质印迹(Western Blot)检测肺组织血管VIP/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达。结果:与模型组比较,五味子乙素各剂量组SP肺炎大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平、肺W/D比值、肺组织病理损伤评分、CD86阳性细胞(M1巨噬细胞)表达、肺泡巨噬细胞iNOS、TNF-α mRNA表达及肺组织p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低,血清IL-10水平、CD206阳性细胞(M2巨噬细胞)表达、肺泡巨噬细胞Arg-1、IL-10 mRNA表达及肺组织VIP、cAMP蛋白表达和p-PKA/PKA水平显著升高(P<0.05)。结论:五味子乙素可减轻SP感染大鼠肺组织炎症损伤,其作用机制可能与激活VIP/cAMP/PKA信号通路,抑制大鼠肺泡中M1巨噬细胞极化,促进M2巨噬细胞极化有关。

归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障

目的:探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。方法:将密度为1×10^(7)个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液,经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL,构建胃癌荷瘤小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为5组,模型组、奥沙利铂组(10mg·kg^(-1))、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1)),每组10只,另外余10只作为空白组。各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水,治疗14 d。末次给药后,次日眼球取血分离血清并取其结肠样本。苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组黏膜下层水肿,黏膜层中肠腺排列紊乱,杯状细胞缺失,可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象。而各给药组均有不同程度的改善;与正常组比较,模型组血清中DAO和D-LA水平均显著上升(P<0.01),与模型组比较,联合用药高剂量组DAO和D-LA水平及联合用药中剂量组D-LA水平均有所下降(P<0.05,P<0.01),与奥沙利铂组比较,联合用药高、中剂量组D-LA水平有所下降(P<0.05),其余组DAO和D-LA表达水平也有所下降,但差异无统计学意义;与正常组比较,模型组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平均有所升高,其中联合用药高剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),联合用药中剂量组cAMP蛋白表达水平升高(P<0.05);与奥沙利铂组比较,联合用药高剂量组cAMP蛋白表达水平明显升高(P<0.05),其余组mRNA及蛋白表达也有所升高,但差异无统计学意义。结论:归芪白术方联合奥沙利铂通过VIP/cAMP/PKA信号通路调节AQP3和AQP4达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。

枳术丸调控VIP、cAMP、PKA、AQP1对慢传输型便秘小鼠肠道水液代谢的影响

目的探讨枳术丸对慢传输型便秘脾虚证小鼠肠道水液代谢的影响。方法用番泻叶灌胃+饥饱失常法建立慢传输型便秘脾虚证小鼠模型并随机分为模型组(蒸馏水)、莫沙必利组(2.5mg·kg^(-1))、枳术丸组(11.7g·kg^(-1)),另设空白组(蒸馏水),每组10只。分组治疗7d后,观察各组小鼠的一般行为学特征,检测各组小鼠肠道推进率、粪便含水量,采用HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态改变,Elisa法检测小鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含量,Western-Blot检测结肠cAMP、PKA、水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组肠道推进率、粪便含水量均减少(P<0.05),Elisa法检测示结肠组织VIP、cAMP、PKA含量均降低(P<0.05或P<0.01),Western-Blot结果示结肠组织cAMP、PKA蛋白表达减少(P>0.05,P<0.01),AQP1蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较,莫沙必利组和枳术丸组肠道推进率呈增加趋势(P>0.05),粪便含水量增加(P<0.05)。Elisa法检测示结肠组织VIP呈上升趋势(P>0.05),cAMP、PKA含量均明显增加(P<0.01),Western-Blot结果示结肠组织cAMP、PKA蛋白表达增加(P>0.05,P<0.01),AQP1蛋白表达减少(P<0.05)。结论枳术丸可以改善慢传输型脾虚证便秘小鼠的便秘症状,其机制可能与上调VIP-cAMP-PKA通路从而降低结肠AQP1表达,减少肠道水分重吸收,软化大便有关。

附子-肉桂调控结肠VIP/cAMP/PKA/AQP通路改善大鼠阳虚型慢传输型便秘

目的:通过血管活性肠肽(VIP)/环状磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白(AQP)通路探究附子-肉桂对阳虚型慢传输便秘(STC)大鼠肠道功能的影响及作用机制。方法:将SD大鼠随机分为6组(n=6),包括正常组、模型组、附子-肉桂高剂量组、附子-肉桂中剂量组、附子-肉桂低剂量组及普芦卡必利组。除正常组以外,其余组均采用盐酸洛哌丁胺联合冰水灌胃造模法,建立阳虚型STC大鼠模型。记录各组大鼠首次黑便排出时间,粪便数量,粪便含水量,肠道推进率及粪便性状评分。通过苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理形态,阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察结肠黏液分泌情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中VIP的水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中AQPs mRNA表达水平,免疫组化检测结肠和肾组织中AQPs表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中cAMP、PKA及VIP的蛋白表达水平。结果:与空白组大鼠相比,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著加长,粪便粒数及含水量显著减少,粪便性状评分及肠道推进率显著降低(P<0.01);大鼠肠道病变重,黏液分泌减少;血清中VIP含量显著减少,结肠和肾组织中水通道蛋白1(AQP1)表达水平显著增加,水通道蛋白3(AQP3)及水通道蛋白(AQP9)表达水平显著减少(P<0.01);结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达降低。与模型组大鼠比较,高剂量附子-肉桂组大鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便粒数及含水量增加,粪便性状评分及肠道推进率提高;附子-肉桂高剂量组,大鼠肠道病变减轻,黏液分泌增加;血清中VIP含量增加(P<0.01),结肠和肾组织中AQP1表达水平明显降低,AQP3及AQP9表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01)。附子-肉桂高剂量组大鼠结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达也显著增加(P<0.01)。结论:附子-肉桂高剂量组可以通过上调VIP/cAMP/PKA/AQP通路提高肠道动力,平衡肠道水液代谢,从而改善阳虚型慢传输便秘大鼠的便秘症状。

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 m L·kg;),肺肠合治低(5 g·kg^(-1))、中(7.5 g·kg^(-1))、高(10 g·kg^(-1))剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg^(-1)),分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、c AMP、p-PKA/PKA明显降低(P<0.05,P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01),肺组织VIP蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、c AMP、p-PKA/PKA升高(P<0.05,P<0.01),肺组织VIP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/c AMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。

基于VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路探讨针刺治疗水液缺乏型干眼的作用机制

目的:观察针刺对水液缺乏型干眼(ATD)豚鼠眼表症状及泪腺组织中血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白5(AQP5)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨针刺治疗ATD的作用机制。方法:40只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针组和西药组,每组8只。皮下注射氢溴酸东莨菪碱复制ATD模型。针刺组针刺双侧“睛明”“攒竹”“丝竹空”“太阳”“瞳子髎”,每次15 min,每日1次;假针组每5 min钝针点压上述穴位1次,共3次;西药组双眼滴玻璃酸钠滴眼液,3次/d,每次1滴。以上3组均治疗14 d。分别于造模前、造模后及干预后进行酚红棉线泪液分泌量(PRT)实验、测定泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素钠染色评分(FLS)。干预后泪腺称重,计算泪腺指数;HE染色法观察泪腺组织病理形态变化;免疫荧光染色法检测泪腺组织AQP5的表达;ELISA法检测泪腺组织VIP和AQP5含量;Western blot法检测泪腺组织VIP、cAMP、PKA、磷酸化(p)-PKA及AQP5蛋白表达。结果:造模后,与空白组比较,其余4组PRT减少、BUT缩短(P<0.01,P<0.05),FLS升高(P<0.05,P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组PRT减少、BUT缩短(P<0.01),FLS升高(P<0.01),泪腺指数降低(P<0.01),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量降低(P<0.01),VIP、cAMP、PKA、p-PKA和AQP5蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。干预后,与模型组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺指数升高(P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、p-PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组VIP和AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与假针组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.05,P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组AQP5的蛋白表达升高(P<0.05)。与西药组比较,针刺组PRT增多(P<0.05)。空白组泪腺结构无明显异常;模型组和假针组泪腺上皮细胞明显萎缩,可见淋巴细胞浸润;针刺组和西药组泪腺上皮细胞结构基本正常,部分腺腔扩张,可见少量淋巴细胞浸润。结论:针刺可减轻干眼眼表损伤,促进泪液分泌,其作用机制可能与激活VIP/cAMP/PKA/AQP5信号通路,增强泪腺分泌功能有关。

竹盐对便秘小鼠的影响及其机制研究

研究竹盐对盐酸洛哌丁胺诱导的慢传输型便秘(STC)小鼠模型的缓解作用和机制。对小鼠连续7 d灌胃盐酸洛哌丁胺(10 mg/kg)造便秘模型,第8天开始,灌胃盐酸洛哌丁胺1 h后,再灌胃低中高剂量(0.5,1.0和1.5 g/kg)竹盐,2.5mg/kg枸橼酸莫沙必利和生理盐水。第14天灌胃结束后统计6 h排便粒数,测量小肠计算肠推进率。采用苏木精-伊红染色法观察结肠病理学变化。采用试剂盒测定血清中胃泌素(Gas)、P物质(SP)和一氧化氮(NO)含量。采用蛋白质印迹法测定结肠中c-kit原癌基因(c-kit)、血管活性肠肽(VIP)、蛋白激酶A (PKA)、水通道蛋白3 (AQP3)蛋白的表达,采用实时荧光定量法测定结肠组织中干细胞因子(SCF)和环磷酸腺苷(cAMP)的mRNA的相对表达。结果显示:与模型组相比,竹盐中高剂量组和枸橼酸莫沙必利组中STC小鼠结肠组织肌层逐渐变厚,杯状细胞增多,缓解了便秘导致的黏膜损伤;与模型组相比,中高剂量竹盐和枸橼酸干预后明显增加了STC小鼠肠推进率和血清中Gas和SP含量,减少了NO含量,促进了结肠组织中c-kit、VIP、PKA、AQP3蛋白表达水平和SCF、cAMP的mRNA的相对表达,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。竹盐对盐酸洛哌丁胺诱导的STC小鼠具有通便作用,可能通过调节SCF/c-kit和VIP/cAMP/PKA/AQP3信号通路达到缓解便秘效果,该研究为开发相关功能性食品提供理论基础和科学依据。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨枳实-白芍药对调控C-IBS的作用及机制

目的:研究不同配伍比例的枳实-白芍药对对便秘型肠易激综合征(C-IBS)大鼠的影响,探讨其对C-IBS的作用及机制。方法:取SPF级Wistar成年雄性大鼠60只,随机留取10只大鼠作为空白组。其余50只大鼠为实验组,均采用冰0.9%氯化钠溶液灌胃的方法制备C-IBS模型,造模成功后将50只实验组大鼠随机分为模型对照组、匹维溴铵组、枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组,每组10只。经过14 d治疗后,计算粪便含水量,ELISA法检测血清血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)的含量,荧光定量PCR检测结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA的表达,Western Blot检测结肠组织cAMP、PKA、AQP3蛋白的表达。结果:与模型对照组比较,枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可升高粪便含水量(P<0.05),枳实-白芍药对2∶1组可显著升高血清VIP、cAMP、PKA、AQP3含量(P<0.01),枳实-白芍药对1∶1组可升高血清VIP含量(P<0.05),枳实-白芍药对1∶2组可显著升高血清VIP、cAMP、AQP3含量(P<0.01,P<0.05),枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可显著升高结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA和cAMP、PKA、AQP3蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且各组之间差异无统计学意义,说明枳实和白芍配伍时以经典名方枳实芍药散的原方剂量即可。结论:枳实-白芍药对配伍比例为1∶1时即可发挥治疗C-IBS的作用,其机制可能与调控VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。