血管活性肠肽受体2亚型mRNA在鸡形觉剥夺性近视眼中的表达

目的探讨雏鸡高度近视眼眼球后壁组织血管活性肠肽受体2亚型(vasoactive intestinal peptide receptor 2,VIPR2)mRNA的动态表达及意义。方法选择出生1 d健康来亨雏鸡共30只,15只右眼遮盖作为实验组,分别持续遮盖1周、2周和4周;另15只双眼均未遮盖作为正常对照组。两组均采用检影验光检测屈光度;眼科A超测定活体眼轴长度;对两组3个时间段眼球后壁行逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测VIPR2 mRNA的动态表达。结果实验组由实验前远视[快速]变为高度近视眼,并随遮盖时间的延长、近视度数的加深,眼轴延长;两组眼球后壁均有VIPR2 mRNA的阳性表达;随着出生时间的延长,两组VIPR2 mRNA的表达均逐渐下降。与对照组相比,实验组VIPR2 mRNA的表达明显上调(P<0.01)。结论形觉剥夺可导致高度近视眼;高度近视眼较正常眼VIPR2 mRNA的表达明显上调。血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)可能通过与VIPR2结合,参与了近视眼形成与发展的调控。

嗜酸性粒细胞性胃肠炎儿童胃黏膜血管活性肠肽及其受体表达与嗜酸性粒细胞数量及总IgE水平变化的关系

目的探讨嗜酸性粒细胞性胃肠炎(EG)患儿胃黏膜血管活性肠肽(VIP)及血管活性肠肽2型受体(VPAC2)表达与嗜酸性粒细胞(EOS)数量、总免疫球蛋白E(Ig E)水平的关系。方法采用非随机临床对照研究方法,于2015年7月至2016年8月在南京医科大学附属儿童医院消化科纳入EG患儿20例(EG组),包括男16例,女4例,年龄(6. 38±4. 59)岁;同期纳入行胃镜活检但组织病理学检查无异常的儿童20例为对照组,其中男15例,女5例,年龄(5. 46±3. 27)岁,两组间人口基线特征匹配。所有受检者采集外周血行EOS计数及总Ig E水平测定,胃镜检查下获取胃窦黏膜组织进行苏木精-伊红染色;采用免疫组织化学法检测胃窦黏膜组织中VIP及VPAC2表达;探讨胃黏膜组织中VIP及VPAC2含量与胃黏膜EOS数量及外周血总Ig E水平的关系。结果 EG患儿外周血EOS计数及总Ig E水平分别为1. 64(0. 06,27. 37)×109/L和477. 7(173. 7,4437. 0) U/ml,明显高于对照组的0. 13(0. 04,0. 85)×109/L和55. 9(21. 9,97. 3) U/ml,差异均有统计学意义(均P<0. 01)。EG组患者胃黏膜组织中VIP和VPAC2阳性表达值(吸光度,A值)明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0. 05)。EG患者胃黏膜组织中VIP含量与胃黏膜EOS数量及外周血总Ig E水平均呈明显负相关(rs=-0. 81、-0. 83,均P <0. 01),EG患者胃黏膜组织中VPAC2含量与胃黏膜EOS数量及外周血总Ig E水平均呈明显负相关(rs=-0. 72、-0. 77,均P<0. 05)。结论 EG患儿外周血EOS计数及总Ig E水平增高,胃黏膜组织EOS数量增加,与胃黏膜中VIP及VPAC2含量呈负相关,提示VIP可能参与EG的发生。

四磨汤对肝脾气滞型功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响

目的观察四磨汤对肝脾气滞型功能性消化不良(FD)大鼠血管活性肠肽(VIP)及其受体2(VIPR2)表达的影响,探讨其调节胃肠动力的作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组(0.305mg/kg)和四磨汤高、中、低剂量组(5.62、2.81、1.40g/kg),采用多因素造模法制备肝脾气滞型FD大鼠模型,各给药组分别予相应药物灌胃14d。观察大鼠一般情况,测定体质量、胃排空率和小肠推进率,HE染色观察胃窦和十二指肠组织形态,免疫组化染色检测十二指肠组织VIP、VIPR2阳性表达,Westernblot、RT-PCR分别检测十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,体质量、胃排空率和小肠推进率均显著降低(P<0.01),十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,四磨汤高、中剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率和小肠推进率均显著升高(P<0.05,P<0.01),十二指肠组织VIP、VIPR2蛋白和mRNA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色显示,胃窦和十二指肠组织形态未发生明显改变。结论四磨汤可能通过抑制肝脾气滞型FD大鼠十二指肠组织VIP、VIPR2表达促进胃肠动力,从而改善FD。

旋覆代赭汤对胃动力低下大鼠胃窦组织中脑肠肽受体mRNA表达的影响

[目的]观察旋覆代赭汤对胃动力低下大鼠胃窦平滑肌细胞促胃液素受体(GASR)及血管活性肠肽2受体(VIPR2)mRNA表达的影响。[方法]将70只大鼠随机分为正常组和模型组,正常组10只,模型组60只。模型组每只大鼠按10 g/kg体重的甘草煎剂灌胃后,随机分为模型3 d、模型7 d组,旋覆代赭汤低、中、高剂量组及多潘立酮组。多潘立酮组予0.27 mg/ml的多潘立酮混悬液灌胃,旋覆代赭汤低、中、高剂量组分别予浓度为0.369、0.738、1.476 g/ml的旋覆代赭汤灌胃,给药5 d。采用原位杂交法检测大鼠胃窦平滑肌细胞GASR及VIPR2 mR-NA的表达。[结果]一定剂量甘草煎剂可复制大鼠胃动力低下模型,旋覆代赭汤可使胃动力低下大鼠胃窦平滑肌细胞GASR mRNA的阳性细胞平均光密度升高,平均灰度值降低;而VIPR2 mRNA的阳性细胞的平均光密度降低,平均灰度值升高(P<0.05或<0.01)。[结论]旋覆代赭汤可通过调节脑肠肽受体在胃窦组织中的表达达到促胃动力的作用。

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃组织GASR、空肠组织VIPR2含量及其基因表达的影响

目的观察加味四逆散对慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜超微结构、胃窦组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽受体2(VIPR2)含量及其基因表达的影响,并阐明其机制。方法将Wistar大鼠60只随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,奥美拉唑组,每组10只。除正常组外,其余5组均采用慢性身心应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型。加味四逆散小、中、大剂量组大鼠每日分别灌胃0.25、0.5、1.0g/mL浓度的中药煎剂2mL,奥美拉唑组大鼠每日灌胃0.3mg/mL的奥美拉唑溶液2mL,正常组及模型组每日灌胃生理盐水2mL,造模结束后,透射电镜法观察腺胃区胃黏膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,免疫组化法和Real time-PCR法检测胃窦组织细胞GASR、空肠组织细胞VIPR2蛋白含量及其基因表达的变化。结果电镜观察显示正常组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接紧凑,胞膜完整,胞核形态及大小正常;模型组大鼠胃黏膜细胞受损严重;其余治疗组均较模型组不同程度好转。使用加味四逆散及奥美拉唑治疗后,各组胃窦组织GASR蛋白和mRNA的表达均较模型组增加(P<0.05),空肠组织VIPR2蛋白和mRNA的表达均较模型组降低(P<0.05)。其中加味四逆散大剂量组GASR、VIPR2蛋白和mRNA的表达接近正常组水平,两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。与奥美拉唑组与加味四逆散小剂量组相比,加味四逆散大剂量组大鼠GASR蛋白和mRNA的表达均增高(P<0.05),VIPR2蛋白和mRNA的表达降低(P<0.05)。结论加味四逆散可改善慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜组织细胞的微观病理形态,并可调整胃组织GASR和空肠组织VIPR2的含量及其基因表达。

加味四逆散对身心应激大鼠胃黏膜形态学的作用机制

目的:探讨加味四逆散(jiaweisinisan,JWSNS)对身心应激大鼠胃黏膜的保护作用及其机制.方法:大鼠随机分为正常组、模型组、JWSNS大、中、小剂量组及奥美拉唑组,采用慢性心理性应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型,经JWSNS等干预后评估胃黏膜溃疡指数(ulcer index,UI),常规HE(hematoxylin and eosinstain,HE)染色镜下观察胃黏膜形态学改变,透射电镜法观察腺胃区胃黏膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,放射免疫法检测大鼠胃组织中胃泌素(gastrin,GAS)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)水平并用RT-PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2mRNA表达变化.结果:与模型组比较,正常组、JWSNS中、大、小剂量组及奥美拉唑组大鼠胃黏膜溃疡指数(分)明显减小(0.32±1.58、8.50±3.88、4.67±3.08vs25.33±4.33,P<0.01;13.70±2.26、12.00±2.73vs25.33±4.33,P<0.05);与奥美拉唑组比较,JWSNS中、大剂量组胃黏膜溃疡指数明显减小(P<0.05,P<0.01);胃黏膜HE染色结果显示模型组大鼠胃黏膜弥漫出血、溃疡糜烂,较正常组损伤明显,JWSNS大、中、小剂量组大鼠胃黏膜损伤较模型组不同程度减轻.电镜观察显示正常组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接紧凑,胞膜完整,胞核形态及大小正常;模型组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接松解,胞质中细胞器及胞核受损严重,染色质明显边集、浓缩或均一化分布;其余治疗组均较模型组不同程度好转.与模型组比较,正常组、JWSNS中、大剂量组、奥美拉唑组、JWSNS小剂量组大鼠胃窦组织中GAS含量显著增高(39.23±5.54、27.52±4.28、38.27±4.18、28.30±5.53vs8.33±4.63,P<0.01;15.74±4.56vs8.33±4.63,P<0.05),与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃窦组织中GAS含量增高(P<0.05);与模型组比较,正常组、JWSNS大、中剂量组及奥美拉唑组大鼠胃窦组织中VIP含量降低(36.32±1.68、39.67±2.98vs89.33±4.43,P<0.01;60.50±3.85、59.00±2.89vs89.33±4.43,P<0.05),与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃窦组织中VIP含量降低(P<0.05);与模型组比较,正常组、JWSNS中、大、小剂量组及奥美拉唑组胃组织GASRmRNA表达均升高(1.00±0.10、0.53±0.03、0.62±0.05vs0.19±0.05,P<0.01;0.25±0.02、0.43±0.03vs0.19±0.05,P<0.05),正常组、JWSNS大、中、小剂量组及奥美拉唑组空肠组织VIPR2mRNA表达则降低(1.00±0.20、1.15±0.33vs3.40±0.57,P<0.01;1.83±0.30、2.39±0.36、1.79±0.35vs3.40±0.57,P<0.05);与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃组织GASRmRNA表达明显升高(P<0.05),而JWSNS大剂量组空肠组织VIPR2mRNA表达则明显降低(P<0.01).结论:JWSNS对身心应激大鼠胃黏膜有较好的保护作用.

VIPR2mRNA在“泻剂结肠”大鼠结肠组织中的表达

为探讨血管活性肠肽受体2（VIPR2）mRNA在“泻剂结肠”大鼠结肠组织中的表达情况，本研究应用大黄粉悬液灌胃法建立“泻剂结肠”大鼠模型（模型组），采用炭末推进率法测定大鼠肠道运输功能，应用半定量聚合酶链反应（PCR）检测VIPR2mRNA在结肠组织中的表达，并设立空白对照组（应用同体积生理盐水灌胃）进行对比分析。结果显示，模型组炭末推进率明显低于空白对照组，P〈0．05；模型组VIPR2mRNA的表达明显强于空白对照组，P〈0．01。结果表明，大黄粉悬液灌胃法可以成功建立“泻剂结肠”大鼠模型，“泻剂结肠”大鼠结肠组织中VIPR2mRNA的相对表达量较高。

重组PACAP衍生物RMBYLL的高效制备及其体外生物学效应

为了利用基因工程技术高效制备具有治疗Ⅱ型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物RMBYLL,并在体外研究其生物学效应,采用基因重组技术表达重组肽RMBYLL,纯化、制备并鉴定重组肽RMBYLL后,利用特定细胞系和Western-blot等技术,检测RMBYLL对VPAC1、VPAC2和PAC1受体的选择性和激动活性,以及重组肽RMBYLL对胰岛素受体介导的信号传导最终效应物—葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。实验结果表明:利用重组肽技术制备的RMBYLL的M_r为3.901k,纯度大于95%,其产率为18.7 mg/(L发酵产物);制备的RMBYLL可与VPAC2受体特异结合并显著促进VPAC2-CHO细胞cAMP的产生,其受体半激活浓度(EC_(50))为0.90 nmol/L,目的肽RMBYLL可显著增强3T3-L1脂肪细胞GLUT4的表达,阳性实验组是对照组的1.91倍。由此表明,利用本研究确立的表达、纯化策略可实现高活性RMBYLL的高效制备,应用前期构建的含有特定受体的CHO细胞和3T3-L1脂肪细胞模型,可方便有效地进行相关药物肽的体外生物学效应研究。