心瓣膜组织工程中种子细胞原代联合培养的实验研究

目的：探讨体外原代联合培养、扩增，鉴定同一来源的人血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞的方法，为组织工程心脏瓣膜的构建提供理想的种子细胞。方法：无菌条件下取冠状动脉旁路移植术中剩余大隐静脉3cm～8cm，组织块培养法原代培养混合血管细胞，DMEM培养液培养、扩增混合血管细胞。倒置显微镜、免疫组化方法对内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞进行鉴定。结果：倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞，呈现内皮样细胞、成纤维样细胞混合生长的特征。免疫细胞化学检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白、成纤维细胞纤维连接蛋白相关抗原呈阳性反应。细胞经3～4次传代，细胞数量可增殖达到8×10^6～10×10^6。结论：使用组织块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞，三种细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程心脏瓣膜种子细胞的足够数量。

组织工程心脏瓣膜裸鼠体内移植的实验研究

目的将人血管混合细胞体外动态种植于脱细胞牛心包构建的组织工程心脏瓣膜(Tissue engineered heart valves,TEHVs)并移植入裸鼠体内,观察其生物学特征变化。方法将体外动态构建的TEHVs移植入裸鼠体内,30d时取材,观察组织、细胞的超微结构变化,种子细胞的生长行为和生物学特征变化,种子细胞与支架材料的黏附性,TEHVs的生物相容性等参数。结果组织学观察见:细胞数量、分层数较移植前增多,并有大量细胞浸润入TEHVs深层组织内;免疫组化显示:TEHVs上细胞的内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白、成纤维细胞Fibronectin相关抗原呈阳性表达;扫描电镜见:裸鼠体内移植后细胞数量较移植前增多,细胞表面和细胞之间的网状胶原结构较埋置前增多明显;透射电镜可见:W-P小体、质膜小泡、密斑、密体、微丝等特征性结构。结论TEHVs细胞能够在裸鼠体内定向分化、增殖,生物学特征无改变,TEHVs生物相容性良好。