胶质母细胞瘤中脑组织特异性血管生成抑制因子1的研究进展

脑组织特异性血管生成抑制因子1(BAI1)是近年来从人类脑组织中提取的一种抑癌基因,它通过抑制肿瘤血管生成来发挥作用。有研究证明胶质母细胞瘤中BAI1表达水平下降,提示它与胶质母细胞瘤的发生、发展及预后关系密切,有必要对胶质瘤中的BAI1基因进行深入研究。

脑特异性血管生成抑制因子1在突触和认知障碍中的作用

粘附G蛋白偶联受体(adhesion G protein-coupled receptors,aGPCRs)在认知障碍相关疾病中扮演着重要角色。脑特异性血管生成抑制因子1(brain-specific angiogenesis inhibitor 1,BAI1)作为aGPCRs中重要一员,具有抗血管生成、抗肿瘤及参与免疫吞噬的作用。近来的研究发现BAI1在突触形成和突触可塑性中也发挥着重要作用,但其在神经系统疾病中的研究相对匮乏。目前,人口老龄化加剧了认知障碍的发生,阿尔茨海默病、血管性认知障碍的发病机制尚不清楚,认知障碍的早期识别面临挑战。其中,突触损伤在轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)阶段即显著出现,BAI1可调控突触后膜功能、突触发生、突触信号传递及树突棘形态发育等,因此或可作为认知障碍早期预警指标和干预靶点。

过表达血管生成抑制蛋白1对人结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨过表达血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1,VASH1)对人结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:包装慢病毒并感染人结直肠癌SW680、SW620细胞以构建过表达VASH1的细胞系,以未经感染的细胞为对照;qPCR实验和WB实验检测VASH1的过表达效果,小管形成实验、CCK-8实验、软琼脂克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验检测过表达VASH1在体外对细胞的微血管形成、增殖、克隆形成以及迁移能力的影响,NOD-SCID小鼠皮下成瘤实验检测过表达VASH1对SW620细胞移植瘤的体内生长和肺转移的影响。结果:成功构建过表达VASH1的SW480和SW620细胞。体外实验表明,与对照组相比,过表达VASH1的结直肠癌细胞的微血管形成能力、增殖能力、克隆形成能力以及迁移能力均显著降低(均P<0.05)。体内实验表明,与对照组相比,过表达VASH1的SW620细胞NOD-SCID小鼠皮下移植瘤的生长速度以及肺转移能力也明显降低(均P<0.05)。结论:过表达VASH1能够抑制人结直肠癌细胞的恶性生物学行为。

枸杞多糖对小鼠结直肠癌肿瘤生长的抑制作用及对血管形成机制的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠结直肠癌肿瘤生长及血管形成机制的影响。方法:建立小鼠CT26结直肠癌肿瘤模型,LBP给药观察对模型小鼠肿瘤生长的抑制作用,绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织切片,免疫组织化学方法检测CD31表达,观察肿瘤间质血管密度;大鼠动脉环实验观察LBP对血管形成的影响。体外实验QPCR检测LBP对脑组织特异性血管生成抑制因子1(BAI1)表达的影响,同时检测LBP对结直肠癌细胞株(CT26)及人真皮微血管内皮细胞株(HDMEC)增殖的影响。结果:LBP用药组CT26结直肠癌小鼠肿瘤重量为(0.31±0.04)g小于对照组(0.63±0.06)g(P<0.05);绘制肿瘤生长体积曲线,发现LBP可抑制小鼠肿瘤的生长(P<0.05)。CD31染色显示LBP用药组小鼠肿瘤间质血管密度小于模型组(P<0.05)。LBP对大鼠动脉环血管形成具有明显抑制作用,且与浓度有关。体外实验发现,与对照组比较,LBP 500μg/m L及1 000μg/m L处理HDMEC后,BAI1表达上调(P<0.01);LBP药物浓度设定在0~1 000μg/m L之间,随着浓度的增加,LBP对小鼠结直肠癌CT26细胞及HDMEC细胞增殖均无明显的影响。结论:LBP对小鼠结直肠癌生长的抑制作用可能与抑制血管形成、上调BAI1表达有关,但具体的作用机制有待进一步阐明。

重组血管生成抑制因子-1对增生性瘢痕组织血管及其相关因子的影响

目的研究基因转染血管生成抑制对兔耳增生性瘢痕组织血管及其相关因子表达的影响。方法将基因重组血管抑制剂Ad—METH-1作用于兔耳增生性瘢痕，用微循环显微镜检、组织学染色、免疫组织化学染色等方法，研究Ad—METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响，探讨基因转染血管生成抑制对增生性瘢痕的影响。结果Ad—METH-1注射后30d，实验组瘢痕组织微血管计数为12.38±2．56，VEGF阳性细胞百分比为17．64％，bFGF阳性细胞为18．24％；对照组微血管计数为48．12±6、46，VEGF阳性细胞百分比为31．34％，bFGF阳性细胞为28．26％。结果显示，实验组瘢痕组织微血管计数低于对照组，两组间差异有统计学意义（P〈0．01）；实验组瘢痕组织VEGF及bFGF的阳性细胞百分比均低于对照组，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad—METH．1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及VEGF、bFGF表达产生了明确的抑制作用，早期行血管抑制治疗可抑制增生性瘢痕的形成。基因转染血管抑制治疗有望成为一种有效的增生性瘢痕防治方法。

表达VASH1基因的人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物敏感性的变化

目的探讨表达人血管生成抑制因子1(VASH1)的人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物的敏感性变化。方法构建针对VASH1的慢病毒载体p GCL-GFP-VASH1,经测序鉴定后转染293T细胞,筛选出适合浓度的慢病毒转染人脑胶质瘤U-87MG细胞,荧光显微镜下检测转染效率;通过RT-PCR和Western blot分析U-87MG细胞VASH1 m RNA和蛋白表达水平;用CCK-8法检测U-87MG细胞在化疗药物顺铂和替莫唑胺作用下的存活率。流式细胞仪检测U-87MG细胞凋亡。结果成功构建p GCL-GFP-VASH1慢病毒载体,并成功转染U-87MG细胞,转染率达70%以上;RT-PCR和Western blot结果证实转染VASH1慢病毒载体的U-87MG细胞表达VASH1 m RNA和蛋白。在顺铂或替莫唑胺作用下,表达VASH1的U-87MG细胞存活率均较未表达VASH1的U-87MG细胞明显降低(P<0.01),而且U-87MG细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论 VASH1慢病毒载体转染U-87MG细胞可使其稳定表达VASH1,并提高人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物敏感性、增加细胞凋亡率。

ORAOV1和Vasohibin1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:检测乳腺浸润性乳腺癌(infiltrating breast carcinoma,IBC)中口腔癌过表达蛋白1(oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)和血管生成抑制因子1(vasohibin1,VASH1)的表达情况及其相互之间的关系,并分析它们在IBC中的临床意义。方法:通过免疫组织化学方法检测239例IBC和100例相应的正常乳腺组织中ORAOV1和VASH1蛋白的阳性表达情况。结果:在IBC组织中,ORAOV1和VASH1蛋白的阳性率分别为58.2%和56.9%;对照组中,ORAOV1和VASH1蛋白的阳性率分别为13.0%和12.0%,其表达差异在2组间均有统计学意义(P<0.01)。ORAOV1和VASH1蛋白阳性率的差异在IBC病人肿瘤组织的不同分化程度之间、淋巴结转移与否之间、肿瘤大小之间及不同TNM分期之间差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);且ORAOV1蛋白的阳性率与VASH1蛋白的阳性率之间呈正相关关系(P<0.01)。在IBC病人中ORAOV1和VASH1蛋白阳性组术后的生存时间明显低于阴性组(P<0.05~P<0.01)。多因素回归分析显示阳性表达的ORAOV1和VASH1蛋白、肿瘤组织的大小及TNM分期高低均是影响IBC病人术后生存时间的独立预后因子(P<0.05~P<0.01)。结论:表达异常增高的ORAOV1和VASH1可能参与IBC的发生、发展,并促进其浸润和转移;在IBC病人肿瘤组织中联合检测ORAOV1和VASH1蛋白的表达情况对预测其发展和预后均有重要意义。

METH1基因截短体的构建及其对HUVEC细胞增殖的影响

目的筛选血管生成抑制因子METH1功能编码区基因片段,为进一步研究METH1抑制增生性瘢痕的分子机制奠定基础。方法设计METH1三种基因截短体,分别构建相应的重组pcDNA3.1真核表达载体,然后将其稳定转染入HUVEC细胞,用RT-PCR、Western-Blot方法检测其在细胞中的表达,最后,通过MTT及FCM法验证其对HUVEC细胞增殖的影响。结果获得了能稳定表达的三种截短体,其中METH1-T2同METH1一样具有明显抑制HUVEC细胞增殖的作用,而METH1-T1、METH1-T3抑制细胞增殖的效果不明显。结论所获METH1-T2为功能活性区片段,可以替代METH1全长进行抑制增生性瘢痕的分子机制研究。

BAI1及其相关蛋白BAIAP2的中枢调控机制

脑血管结构和功能异常与脑功能和脑疾病发生关系密切。脑特异性血管生成抑制因子1(brain-specific angiogenesis inhibitor 1,BAI1)是在正常脑组织中高度表达的跨膜蛋白,具有抑制血管生成、吞噬凋亡细胞和抑制肿瘤形成的功能。BAI1及脑特异性血管生成抑制因子1相关蛋白2(BAI1-associated protein 2,BAIAP2)可以调节神经元的信息传递,影响脑发育和脑功能,参与神经可塑性调节和多种神经精神疾病的发生发展。本文主要综述了BAI1与BAIAP2的结构特征及其与突触可塑性、学习记忆、神经精神疾病发生发展的关系和调控机制,旨在为系统阐明BAI1与BAIAP2的中枢调控功能拓宽思路。