血管生成抑制多肽HM-3及ES-2的组织分布研究

探讨血管生成抑制多肽HM-3和ES-2在组织中分布的特点。将两种多肽HM-3和ES-2分别用异硫氰荧光素（FITC）进行标记,建立C57BL/6黑色素瘤（B16F10）小鼠模型,将标记多肽以尾静脉注射给药,通过流式细胞仪检测分析给药后小鼠各个组织中多肽的分布情况。结果表明血管生成抑制多肽HM-3和ES-2主要分布在肝、肾和胃中,且分布浓度会随着时间的推移而降低,在心、脾和肺中基本没有分布。

奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用。方法 采用人肝癌LCI D2 0裸鼠角膜微囊移植模型 ,利用体视显微镜和显微数码摄像系统 ,动态观测奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成能力的影响。应用人肝癌LCI D2 0皮下移植瘤模型 ,采用CD34免疫组织化学SP法检测肿瘤标本微血管密度 (MVD) ,观察奥曲肽对人肝癌诱导的肿瘤血管生成和皮下移植瘤生长的影响。结果 LCI D2 0肝癌组织移植裸鼠角膜微囊能够诱导角膜新生血管形成 ;与对照组相比 ,奥曲肽组动物角膜新生血管芽生延迟 ,新生毛细血管网稀疏、生长缓慢 ;术后第 7、9、12、15、18、2 1天 ,奥曲肽组人肝癌诱导的角膜新生血管积分比对照组减少 (P <0 0 5 )。奥曲肽对LCI D2 0皮下肿瘤生长具有抑制作用 ,免疫组化研究表明 ,治疗组肿瘤内MVD(2 1 7± 4 2 7)比对照组MVD(31 8± 3 87)减少 (P <0 0 1)。结论 生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成具有抑制作用 ,可能为肝癌的治疗提供一个新的途径。

新的血管生成抑制肽(手性制剂)抗肿瘤血管生成的实验研究

目的 观察一种新的血管生成抑制肽对肿瘤的抑制作用 ,并探讨其作用机制。方法 体外药效实验 ,采用 MTT法及血管内皮细胞迁移法 ,体内用 L ewis肺癌瘤株皮下接种 C57BL/ 6N小鼠 ,观察皮下移植瘤生长情况。结果 新的血管生成抑制肽对血管内皮细胞增殖、迁移有明显的抑制作用 ,在体内使 Lewis肺癌皮下移植瘤体积明显缩小 ,毛细血管稀少。结论 新的血管生成抑制肽能明显抑制 L ewis的肿瘤生长 ,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关。

血管生成抑制素的功能结构域K1-3的融合表达与抗体制备

目的：重组表达angiostatin的功能结构域K1-3，并制备抗体，为其作用机理研究打下基础．方法：设计引物，通过PCR以人纤溶酶原CDNA为模板扩增出K1-3基因片段，克隆至pGEX-4T-l融合表达载体，IPTG诱导，挑出表达克隆，切下基因片段，克隆至pUC19进行序列测定，保留序列完全正确的克隆并进行诱导表达;从SDS-PAGEL切下表达的蛋白条带作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体，并以Westernblotting检测抗血清的结合特异性·结果：DNA电泳结果显示PCR扩增出约780hP的片段，序列测定表明为K1-3;K1-3可以与GST融合表达，产物存在于包含体中;抗血清与K1-3及煮沸变性的天然angiostatin特异地结合．结论：经PCR扩增并克隆到序列正确的K1-3片段，而且能够以融合形式表达，用其免疫家兔获得特异性抗体．

3TSR抑制肿瘤血管生成的研究进展

近年来,肿瘤的生物治疗逐渐得到重视,其中备受关注的领域之一就是血管抑制剂的应用。人类凝血酶敏感蛋白-1(tThrombospondin 1,TSP-1)的1型重复序列(three thrombospondin-1 type 1 repeats,3TSR,TSRs)是从TSP-1中提纯的抗血管生成的功能结构域。3TSR作为一种较新的抗新生血管形成因子,保留了TSP-1抑制新生血管形成的功能,同时很大程度上降低了TSP-1其他功能引起的副作用。它可能通过诱导内皮细胞凋亡抑制新生血管生成。

多肽HM-3对人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的检测HM-3类不同血管生成抑制剂治疗人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的药效学,考察血管生成抑制剂与肿瘤微环境的相互作用,为临床确定治疗方案提供参考和依据。方法建立人非小细胞肺癌A549的裸鼠移植瘤模型,以多西他赛(10 mg·kg^(-1))为阳性对照药物,评价了在肿瘤体积≥300 mm^3给予有效、过高剂量HM-3和贝伐单抗对肿瘤生长的抑制作用。结果动物实验表明,肿瘤的体积≥300mm^3给药,阳性对照组多西他赛具有很好的抗肿瘤活性。G2多西他赛(10 mg·kg^(-1))组的瘤重抑瘤率为60.80%。G3 HM-3(3 mg·kg^(-1))组、G4 HM-3(48 mg·kg^(-1))组、G5Avastin(5 mg·kg^(-1))组抑瘤效果不佳,瘤重抑瘤率分别为43.60%、-34.80%、44.40%。结论由于受肿瘤生长阶段、肿瘤微环境、作用靶点等影响,血管生成抑制剂HM-3有一定抑制肿瘤生长的效果,但效果不佳。HM-3抑瘤效果在(0~6 mg·kg^(-1))范围内存在剂量依赖关系。而HM-3(48mg·kg^(-1))过高剂量对人非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤无抑制作用,表现促进作用。特殊量效关系提示临床使用血管抑制剂时应注意使用剂量。

多肽mPEG-SC_(20k)-HM-3联合奥沙利铂对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用

m PEG-SC20k-HM-3是具有整合素亲和性的一种新型高效血管生成抑制多肽,为探索其与传统化疗药物联用的抗肿瘤活性,建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,选用奥沙利铂为化疗药物,根据临床前抗肿瘤药效学方法评价联合用药的抑瘤作用,并用金氏公式判断两种药物的联合作用。结果显示,与单独用药相比,联合用药组的抑瘤效果更好,且均具有显著差异(P<0.05)。其中,奥沙利铂(7.5 mg/kg)联合m PEG-SC20k-HM-3(73.4 mg/kg)的肿瘤抑制率为84.6%,抑制作用比单用奥沙利铂(7.5 mg/kg)和单用m PEG-SC20k-HM-3(73.4 mg/kg)均有显著提高。根据金氏公式计算,其Q值为1.164(>1.15),可判定该组的用药组合表现出协同作用。结果表明,m PEG-SC20k-HM-3与奥沙利铂单独给药均能抑制肿瘤生长,两者联用对肝细胞癌具有协同作用。

血管生成抑制剂NM-3抑制胃癌生长机制研究

目的:研究血管生成抑制剂NM-3对胃癌生长的影响,探讨其抑制胃癌生长可能存在的分子机制。方法:建立人胃癌裸鼠皮下种植模型。将40只荷瘤裸鼠随机分成4组,种植后第2 d开始分别腹腔内注入生理盐水(2 ml/kg,对照组)、NM-3(剂量分别为10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg,治疗组),每周2次,共6周。第7周处死动物,测量皮下肿瘤体积、计算抑瘤率;取瘤组织行免疫组化染色测定微血管密度(MVD)、胃癌细胞凋亡指数(AI)。结果:NM-3剂量为10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的皮下肿瘤体积分别为(915.46±39.66)mm3(、871.26±38.84)mm3(、812.27±32.59)mm3,明显低于生理盐水对照组(1 609.55±41.32)mm3(P<0.05),抑瘤率为43.20%、45.87%、49.53%;和生理盐水组比较,NM-3治疗后肿瘤的微血管密度明显减少,胃癌细胞的凋亡指数显著增加(P均<0.05),且与治疗剂量有关。结论:NM-3可通过抑制肿瘤微血管生成,诱导胃癌细胞凋亡,抑制体内人胃癌生长。

人参皂苷Rg3对膀胱癌细胞血管生成相关蛋白的表达及癌细胞生长和转移的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)和DNA拓扑异构酶I(DNA TOP I)的抑制作用,并阐明其对膀胱癌细胞增殖、侵袭和血管生成的抑制作用机制。方法不同浓度人参皂苷Rg3加入到EGFR-TPK、DNA TOP I和人膀胱癌细胞株S637中,用ELISA法研究人参皂苷Rg3对EGFR-TPK和DNA TOP I的抑制作用;溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定人参皂苷Rg3对人膀胱癌细胞株S637细胞和人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)生长的抑制作用;Transwell法检测人参皂苷Rg3对S637细胞侵袭的抑制作用;酶标仪法检测人参皂苷Rg3对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响;Western blot法检测人参皂苷Rg3存在下,人膀胱癌细胞株S637中还氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、小窝蛋白-1(CAV-1)及干细胞标志物(SOX-2)的表达。结果人参皂苷Rg3对EGFR-TPK和DNA TOP I(半抑制率IC_(50)分别为35.32±3.12和8.32±1.21μmol·L^(-1))、S637细胞生长(半抑制率IC_(50)为35.11±2.32μmol·L^(-1))都具有良好的抑制能力,但对于SV-HUC-1细胞,人参皂苷Rg3则表现了较低的毒性;人参皂苷Rg3与空白对照组比较能够诱导肿瘤细胞穿过滤膜的数量减少(P<0.01);与空白对照组比较,人参皂苷Rg3能显著提高S637细胞中Caspase 3活性(P<0.05);人参皂苷Rg3能够下调HIF-1α、COX-2、SOX-2及VEGF的表达,上调CAV-1的表达(P<0.05,P<0.01)。结论低毒性的人参皂苷Rg3通过多靶向的降低EGFR-TPK、DNA TOP I活性和HIF-1α、COX-2、SOX-2及VEGF的表达,上调CAV-1的表达和激活Caspase 3活性的方式,对膀胱肿瘤细胞的侵袭、增殖和血管生成产生抑制作用。

心力衰竭患者血浆CTRP3、血管生成素样蛋白2、sST2的浓度及预后价值

目的探讨心力衰竭患者血浆补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1q tumor necrosis factor related proteins-3,CTRP3)、血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein 2,angptl2)、可溶性致癌抑制因子2(soluble suppression of tumorigenicity 2,sST2)的浓度及预后价值。方法选择2014年8月到2018年2月在北京市垂杨柳医院心内科收治的心力衰竭患者122例作为心力衰竭组,并分为收缩性心力衰竭组62例和舒张性心力衰竭组60例两个亚组;对照组为非心力衰竭人群122例。采用酶联免疫吸附法检测混杂血浆CTRP3、angptl2、sST2浓度,随访调查患者的预后并进行相关性分析与预测价值分析。结果心力衰竭组的左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)低于对照组,左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVEDD)及血尿素、肌酐浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两亚组心功能与生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。心力衰竭组的血浆angptl2、sST2浓度高于对照组,CTRP3浓度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两亚组CTRP3、angptl2、s ST2浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随访至今,心力衰竭组患者中预后不良16例,发生率为13.1%。Pearson相关分析结果显示CTRP3、angptl2、sST2、LVEF、LVEDD、尿素、肌酐都与心力衰竭患者预后显著相关(P<0.05)。Cox回归模型分析显示CTRP3、angptl2、sST2为影响心力衰竭患者预后的主要因素(P<0.05)。结论心力衰竭患者血清CTRP3、angptl2、sST2浓度呈现异常表达情况,具有预测预后不良的价值,是心力衰竭预后评估的生物学标志物。

5-氨基-1,3-二氢-1,3-二氧-异吲哚-2-丙酸类衍生物的合成及抗血管生成活性研究

根据RGD序列肽的构效关系,设计并合成了一系列以5-氨基-1,3-二氢-1,3-二氧-异吲哚-2-丙酸为分子骨架的新化合物.其中间体和目标物的化学结构经1HNMR,MS和元素分析确证.体外初步生物活性筛选结果表明,目标物在10-5mol/L浓度下对bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成有显著抑制活性.

miR-221-3p调控血管生成抑制蛋白-1对黑色素瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的 观察miR-221-3p、血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)在黑色素瘤组织及黑色素瘤细胞系A375中的表达,探讨miR-221-3p、VASH-1在黑色素瘤细胞侵袭、迁移中的作用。方法 2019年1月—2021年9月新疆医科大学第一附属医院行手术治疗黑色素瘤患者21例,取手术切除的癌组织及癌旁组织。取对数生长期人黑色素瘤A375细胞及正常人表皮黑色素MC细胞。采用实时荧光定量PCR法检测癌组织、癌旁组织及A375、MC细胞miR-221-3p、VASH-1 mRNA相对表达量。取对数生长期A375细胞分为阴性对照组(转染siRNA-NC)、转染组(转染miR-221-3p siRNA),采用CCK-8法检测转染后培养12、24、48、72 h时细胞增殖率;采用Transwell小室实验检测转染24 h时迁移细胞数和侵袭细胞数;采用流式细胞术检测转染48 h时细胞周期;采用Western blot法检测转染48 h时VASH-1、GRB2、ERK1+2、VEGF-D、VEGF-α蛋白相对表达量。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与VASH-1的靶向关系。结果 (1)癌组织miR-221-3p、VASH-1 mRNA(2.469±0.161、3.909±1.124)相对表达量均高于癌旁组织(1.399±0.169、2.950±1.117)(t=21.024,P<0.001;t=2.776,P=0.008)。A375细胞miR-221-3p、VASH-1 mRNA(1.514±0.088、2.306±0.404)相对表达量均高于MC细胞(0.804±0.032、0.559±0.130)(t=13.188,P<0.001;t=7.131,P=0.002)。(2)2组转染后培养12、24、48、72 h时细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)转染24 h,转染组迁移细胞数[(319.515±15.325)个]和侵袭细胞数[(19.995±11.346)个]均少于阴性对照组[(494.155±13.126)、(114.005±11.266)个](t=14.991,P<0.001;t=10.184,P<0.001)。(4)转染48 h,转染组G_(1)期、S期、G_(2)期细胞比率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)转染48 h,转染组VASH-1(0.426±0.029)、GRB2(0.519±0.020)、ERK1+2(0.755±0.061)、VEGF-D(0.544±0.028)、VEGF-α(0.315±0.012)蛋白相对表达量均低于阴性对照组(0.982±0.006、1.056±0.042、0.998±0.035、1.008±0.013、0.946±0.018)(P<0.05)。(6)miR-221-3p siRNA+VASH-1 WT组荧光素酶活性(0.507±0.006)低于miR-NC+VASH-1 WT组(1.062±0.040)(t=23.990,P<0.001),miR-221-3p siRNA+VASH-1 MUT组荧光素酶活性(1.082±0.048)与miR-NC+VASH-1 MUT组(1.019±0.019)比较差异无统计学意义(t=2.140,P=0.099)。miR-221-3p靶向VASH-1。结论 黑色素瘤miR-221-3p和VASH-1表达升高,下调miR-221-3p可沉默VASH-1及VEGF信号通路GRB2、VEGF-D、VEGF-α、ERK1+2蛋白表达,抑制黑色素瘤A375细胞的侵袭和迁移能力。

miR-30b-5p通过Sema3A调控HUVECs细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成

目的探究miR-30b-5p对HUVECs细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成的影响及机制。方法培养的HUVECs细胞进行不同处理:blank组(正常糖培养)、HG组(高糖培养)、HG+mimic-NC组(高糖联合mimic-NC转染)、HG+miR-30b-5p mimic组(高糖联合miR-30b-5p mimic转染)、HG+miR-30b-5p mimic+oe-NC组(高糖联合miR-30b-5p mimic+oe-NC转染)、HG+miR-30b-5p mimic+oe-Sema3A组(高糖联合miR-30b-5p mimic+oe-Sema3A转染)。CCK-8、流式细胞术、划痕实验、血管生成实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和血管形成。qRT-PCR检测miR-30b-5p、Sema3A mRNA表达。Starbase、Targetscan、miRDB网站预测miR-30b-5p与Sema3A的靶向结合位点,双荧光素酶报告实验分析miR-30b-5p对Sema3A的靶向调控。结果与blank组比较,HG组HUVECs细胞miR-30b-5p表达下降,细胞增殖、迁移和血管形成能力降低,凋亡率增加(均P<0.05);与HG+mimic-NC组比较,HG+miR-30b-5p mimic组细胞的增殖、迁移和血管形成能力增强,凋亡率降低(均P<0.05);miR-30b-5p靶向调控Sema3A;与HG+miR-30b-5p mimic+oe-NC组比较,HG+miR-30b-5p mimic+oe-Sema3A组细胞增殖、迁移和血管形成能力降低,凋亡率增加(均P<0.05)。结论miR-30b-5p通过负调控Sema3A促进高糖介导的HUVECs细胞增殖、迁移和血管形成,抑制其细胞凋亡。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3在肝癌中的研究进展

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,具有病死率高、侵袭转移能力强的特点。T细胞免疫球蛋白黏蛋白(TIM)3是TIM基因家族中的一员,其与机体免疫反应和肿瘤进展之间的关系是临床研究的热点。TIM3与肝癌的发生、发展有关,其可能通过免疫抑制、促进血管生成等方式来促进肝癌的进展,对于肝癌的治疗具有重要的价值和广阔的应用前景。因此,本文对TIM3在肝癌中的研究进展进行综述,以期为TIM3在肝癌中的深入研究提供参考依据。

人参皂苷Rg3对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用及其与肿瘤相关巨噬细胞的关系

目的研究人参皂苷Rg3(ginsenoside Rg3,Rg3)对肺腺癌小鼠异体移植瘤生长和转移的抑制作用及其相关机制。方法构建高转移肺腺癌小鼠移植瘤模型,将24只接种高转移性Lewis肺癌的C57BL/6J小鼠随机分成3组:对照组、顺铂(Cisplatin,DDP)组和Rg3组。给予相应药物干预,于接种后24日处死各组小鼠,剥离皮下肿瘤,取出双肺,计算肺转移发生情况,免疫组织化学检测皮下移植瘤中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)和微血管密度(microvessel density,MVD)的表达并定量分析。结果 DDP组、Rg3组抑瘤率分别为39.20%、54.86%,与对照组比较,瘤重差异有统计学意义(P<0.01),肺表面结节转移抑制率分别为30.25%,58.57%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组、DDP组和Rg3组TAMs分别为(47.21±12.06)、(45.67±11.90)、(16.11±6.32),MVD分别为(24.57±4.59)、(23.52±4.74)、(14.17±2.43)。结论 Rg3对肺腺癌移植瘤的生长和转移具有抑制作用,其机制可能与其抑制肿瘤内TAMs在肿瘤基质中浸润及抑制微血管生成有关。

兔Vx2肿瘤血管生成靶向成像磁共振扫描技术研究

目的建立靶向性超顺磁性长循环脂质体靶向探针,进行兔Vx2肿瘤磁共振靶向成像,评价小动物磁共振扫描序列及方法。方法将精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)短肽通过硫醚键连接在包封超顺磁性氧化铁(SPIO)的长循环脂质体表面,合成靶向性和非靶向长循环脂质体。流式细胞分析确定其受体亲和力。建立兔皮下荷Vx2肿瘤模型并进行磁共振靶向成像研究。对比不同磁共振扫描方法的区别及影响图像质量的相关因素。结果靶向超顺磁性脂质体对αvβ3整合素受体具有较高的特异性亲和力(P<0.01)。该靶向造影剂能够在肿瘤内缓慢浓聚,给药后15h达最大值。非靶向造影剂给药后2h即达最大浓聚。磁敏感加权(SWI)扫描序列图像质量较好。动物摆位、给药剂量及匀场对图像质量影响较大。结论RGD-超顺磁性长循环脂质体能在肿瘤内特异性浓聚,并能够用SWI序列MRI扫描进行证实。

苏拉明联合人参皂苷Rg3抑制肺腺癌小鼠移植瘤转移的作用及机制

目的血管生成抑制剂靶向治疗肿瘤已成为目前研究热点之一。本研究旨在观察苏拉明联合人参皂苷Rg3(PG-Rg3)对肺腺癌小鼠异体移植瘤转移的协同抑制作用,并初步探讨苏拉明和PG-Rg3抑制肿瘤转移的相关机制。方法复制高转移肺腺癌小鼠移植瘤模型,将40只接种高转移性Lewis肺癌的C57BL/6J小鼠按随机数字表法随机分成5组:对照组、顺铂组、苏拉明组、PG-Rg3组及苏拉明+PG-Rg3组(联合组)。给予相应药物干预,于接种后24 d处死各组小鼠,剥离皮下肿瘤和取出双肺,计算肺转移发生情况,免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中组织蛋白酶B(CB)和血管内皮生长因子(VEGF)表达并定量分析,RT-PCR半定量检测组织蛋白酶B mRNA、VEGF mRNA表达。结果对照组、顺铂组、苏拉明组、PG-Rg3组、联合组的肺表面转移结节数分别为(14.00±2.90)、(9.77±1.65)、(6.00±1.70)、(5.80±2.02)、(1.93±1.12),CB灰度值分别为(147.24±5.51)、(129.57±5.41)、(87.39±5.03)、(81.38±5.31)、(67.36±4.37),CB mRNA相对量分别为(85.07±9.24)、(80.45±9.01)、(45.21±7.53)、(39.67±6.84)、(24.33±6.10),VEGF灰度值分别为(156.26±6.45)、(134.7±5.81)、(96.13±5.66)、(90.80±4.92)、(68.73±4.31),VEGF mRNA相对量分别为(91.07±9.43)、(84.45±9.50)、(49.67±8.07)、(45.48±6.46)、(27.39±5.19),苏拉明组和PG-Rg3组中肺表面转移结节数、皮下肿瘤内CB、CB mRNA、VEGF、VEGF mRNA表达与对照组相比明显下降,相反顺铂组对此则无明显影响。联合用药组则显著抑制肿瘤肺表面转移结节数且具有协同作用。结论苏拉明和PG-Rg3对肺腺癌移植瘤的转移具有协同抑制作用,其机制与其抑制肿瘤内CB、CB mRNA、VEGF、VEGF mRNA表达相关。

分子靶向抗癌药物-PI3K抑制剂ZSTK474的发现及转化研究

目的PI3K（phosphatidylinositol 3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶）为一种由调节亚单位p85或p101和催化亚单位p110组成的脂激酶.PI3K被受体酪氨酸激酶（RTK）激活后,催化磷脂酰肌醇二磷酸PIP2磷酸化为磷脂酰肌醇三磷酸PIP3.与PI3K的功能相反,作为抑癌基因的磷酸酶PTEN催化PIP3去磷酸化为PIP2.PIP3通过激活Akt等促进癌细胞的生长、增殖、迁移和血管生成等.根据p110的不同,PI3K分为α、β、δ和γ4种亚型.流行病学研究发现很多癌症患者中PIK3CA（表达p110α的基因）变异或扩增以及PTEN功能丧失,因而PI3K被认为在癌症发生中起重要作用,而以PI3K为靶标的抗癌药物的研发也便成为近年来分子靶向抗癌药物研究领域的热点.我们利用JFCR39分子靶向药物发现系统发现ZSTK474为一种PI3K抑制剂,然后深入研究了其抗癌效果及作用机制.结果首先利用JFCR39药物发现系统,通过比较分析ZSTK474的JFCR39指纹图谱,发现其与PI3K抑制剂LY294002具有相似的指纹图谱,从而推测其分子靶标为PI3K.然后利用均相时间分辨荧光测定法（HTRF）测定其对各重组PI3K亚型的抑制活性,得到其对PI3Kα、β、δ和γ的半数抑制浓度（IC50）分别为16,44,5,49nmol·L^-1.ZSTK474的PI3K抑制活性具有较高的专一性,不仅对139种常见的蛋白激酶无明显抑制活性,而且LanthaScreen、Adaptakinase、Kinase-Glo等活性测定方法证明对PI3K超级家族的其他成员也呈现高度选择性.分别给24种人癌裸鼠移植瘤模型口服ZSTK474200mg·kg^-114d,与对照组相比显示明显的抗癌效果,且无明显的毒副作用出现.我们对ZSTK474的抗癌作用机制进行了详细考察,流式细胞分析发现ZSTK474将多种癌细胞的细胞周期阻断在G0/G1期,但无明显的sub-G1出现.TUNEL及Caspase活性测定方法等也表明ZSTK474并没有明显的细胞凋亡诱导作用.考察对血管生成的影响表明ZSTK474可抑制血管内皮细胞HUVEC的增殖、迁移以及体外管腔形成,对用药组和对照组肿瘤组织的免疫组化染色证明其体内血管生成抑制作用.另外,我们还分别使用体外和体内试验研究了用于预测ZSTK474抗癌效果的生物标志物,发现磷酸化Akt的表达可以作为预测ZSTK474效果的生物标志物.我们还对其抗癌细胞迁移及诱导自噬作用进行了研究.结论ZSTK474被发现是一种新型的专一性强的PI3K抑制剂.临床前试验表明ZSTK474对多种实体瘤模型显示抗癌效果且无明显毒副作用.其抗癌作用可能与细胞周期G0/G1期阻滞、抑制血管生成以及癌转移等机理有关.ZSTK474已分别在美国和日本进入临床试验.

NM-3联合卡铂抑制胃癌生长的实验研究

目的:探讨血管生成抑制剂NM-3联合卡铂对裸鼠皮下种植胃癌细胞生长的影响及可能机制。方法:40只皮下种植人胃腺癌SGC-7901裸小鼠分成生理盐水对照组(2ml/kg)、卡铂治疗组(5mg/kg)、NM-3治疗组(20mg/kg)及联合治疗组(NM-320mg/kg和卡铂5mg/kg),腹腔注射,每周2次。6周后处死动物,取完整肿瘤组织,测量肿瘤体积,计算抑瘤率;常规染色检测胃癌细胞凋亡指数(AI)以及免疫组化染色记数微血管密度(MVD)。结果:(1)生理盐水组、卡铂组、NM-3组及联合组肿瘤体积(mm3)分别为1609.55±41.32、1375.17±38.75、871.26±38.84和548.32±66.02,NM-3组及联合组肿瘤体积均显著小于生理盐水组、卡铂组(P<0.05),且联合组肿瘤体积显著小于NM-3组(P<0.05);卡铂组、NM-3组及联合组抑瘤率分别为14.56%、45.87%、65.93%,联合治疗对裸鼠皮下胃癌生长的抑制作用明显优于各单药治疗。(2)生理盐水组、卡铂组、NM-3组和联合组的MVD计数分别为7.30±0.53、6.98±0.45、4.72±0.51和4.80±0.39,NM-3组及联合组的MVD较卡铂组和生理盐水组明显减少(P<0.05),而卡铂组和生理盐水组之间、NM-3组和联合组之间MVD无差异(P>0.05)。(3)生理盐水组、卡铂组、NM-3组和联合组的胃癌细胞凋亡指数(AI)分别为(2.12±0.29)%、(2.47±0.31)%、(10.43±3.15)%和(12.63±3.75)%,NM-3组及联合组AI均显著高于生理盐水对照组及卡铂组(P<0.05),而生理盐水组和卡铂组、NM-3组以及联合组之间无差异(P>0.05)。结论:血管生成抑制剂NM-3能减少胃癌微血管生成,诱导胃癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长,并且能够增强传统细胞毒药物卡铂抗胃癌作用。

7肽小分子LCI-X7抑制人肝细胞癌的实验研究

目的:通过噬菌体展示体内筛选技术已获得可特异性结合多种人肝细胞肝癌细胞系和肝癌肿瘤血管7 肽小分子LCI-X7。探讨其在体内、体外对肝癌的抑制作用。方法:采用MTT、流式细胞仪、BrdU染色、Boyden小室等方法分别研究LCI- X7对人肝细胞肝癌细胞系HCCLM6细胞的增殖、凋亡、细胞周期、运动及侵袭的影响,并初步探索其治疗剂量范围。采用LM6人肝癌裸鼠模型,研究腹腔注射LCI- X7对HCCLM6肿瘤生长及转移的影响,腹腔注射5 FU(50 mg·kg 1 ·周1)为阳性对照,相同体积生理盐水为阴性对照。检测肿瘤组织CD31抗体染色的微血管密度以观察LCI- X7治疗对肿瘤血管生成的影响。结果:与具有相同氨基酸不同序列的对照肽相比,LCI X7 在0.1×10-9M至1×109M浓度范围内未能改变HCCLM6 在体外的增殖和细胞周期;而1×10-6M LCI X7可减少约70%HCCLM6 细胞的穿膜运动(P<0.05)及侵袭(P<0.05);在裸鼠实验,LCI X7(500μg·kg 1)与对照相比,显著降低肝内及肺转移率,分别为1/10 vs. 7/10及4/10 vs. 10/10(P<0.05);肿瘤微血管染色的结果显示,LCI- X7治疗可降低微血管密度至51.3%(P<0.05)。LCI- X7 治疗对裸鼠无明显毒性。结论:LCI- X7可抑制HCCLM6的运动和侵袭,并可减少HCCLM6在裸鼠体内的肝内播散和肺转移。