梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

脑梗死病人血清血管生成素样蛋白3、神经调节蛋白4水平与颅内动脉狭窄程度及预后的关系

目的:探讨脑梗死病人血清血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)、神经调节蛋白4(Nrg4)水平与颅内动脉狭窄程度及预后的关系。方法:选取本院2018年12月—2022年1月收治的脑梗死病人142例,将未合并颅内动脉粥样硬化性狭窄(ICAS)的脑梗死病人纳入无狭窄组(34例),将合并ICAS的108例脑梗死病人依据颅内动脉狭窄程度分为轻度狭窄组(35例)、中度狭窄组(27例)、重度狭窄组(46例);利用酶联免疫吸附法测定血清ANGPTL3、Nrg4水平;治疗90 d后,根据Rankin评分将脑梗死病人分为预后不良组(Rankin评分≥3分)和预后良好组(Rankin评分<3分);Spearman法分析脑梗死病人血清ANGPTL3、Nrg4水平与ICAS程度、Rankin评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ANGPTL3、Nrg4水平对脑梗死病人预后不良的预测价值,血清ANGPTL3、Nrg4水平单独及联合预测的ROC曲线下面积(AUC)比较行Z检验。结果:无狭窄组、轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组脑梗死病人血清ANGPTL3水平依次升高,血清Nrg4水平依次降低(P<0.05);预后不良组脑梗死病人血清ANGPTL3水平、治疗90 d Rankin评分高于预后良好组,血清Nrg4水平低于预后良好组(P<0.05);Spearman分析结果显示,脑梗死病人血清ANGPTL3水平与ICAS程度、治疗90 d Rankin评分均呈正相关,血清Nrg4水平与ICAS程度、治疗90 d Rankin评分均呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示,血清ANGPTL3、Nrg4水平单独及联合预测脑梗死病人预后不良的AUC分别为0.807,0.851,0.914,敏感度分别为76.90%、70.80%、87.70%,特异度分别为84.30%、82.10%、79.20%;二者联合预测的AUC大于ANGPTL3、Nrg4单独预测的AUC(Z值分别为2.426,1.780,P<0.05)。结论:脑梗死病人血清ANGPTL3水平升高,血清Nrg4水平降低,二者与颅内动脉狭窄程度密切相关,且是不良预后的重要预测因素。

利妥昔单抗对膜性肾病患者肾功能、抗M型磷脂酶A2受体抗体及血管生成素样蛋白-4水平的影响

目的 探究奥美沙坦联合利妥昔单抗治疗膜性肾病对患者肾功能及抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体、血管生成素样蛋白-4水平的影响。方法 选取2019年5月至2022年5月于江苏省徐州市中医院风湿肾病科接受治疗的膜性肾病患者72例,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组36例。对照组给予醋酸泼尼松片联合奥美沙坦治疗,观察组给予奥美沙坦酯片联合利妥昔单抗进行治疗。治疗6个月后,比较两组临床效果及肾功能指标、抗M型PLA2R抗体、血管生成素样蛋白-4、辅助性T(Th)细胞水平。随访3个月,记录两组不良反应发生情况。结果 治疗6个月后,观察组的疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗6个月后,两组血尿素氮、肌酐、尿酸、抗M型PLA2R抗体、血管生成素样蛋白-4、Th17细胞、Th1细胞、Th2细胞水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 奥美沙坦联合利妥昔单抗治疗膜性肾病可以改善患者的肾功能,降低抗M型PLA2R抗体、血管生成素样蛋白-4水平,提高患者的治疗效果。

Toll样受体4激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及其作用机制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制。方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只。构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次。然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理。处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关。

秦艽鳖甲散调控Toll样受体4信号通路改善银屑病小鼠皮损作用机制研究

目的:研究秦艽鳖甲散改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应的分子机制。方法:将60只小鼠按照随机数字表法随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组(0.98、1.95、3.90 g/kg)。除对照组仅剔除毛发,其余各组均使用咪喹莫特构建银屑病小鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色检测皮损组织病理变化;银屑病面积与严重性指数评分(PASI)评估皮损程度;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清炎症介质水平;实时萤光定量PCR(qRT-qPCR)检测白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平;免疫组织化学检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达水平;蛋白免疫印迹检测NLRP3、TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与模型组比较,甲氨蝶呤组及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组小鼠皮损状态明显改善;PASI评分明显降低;血清炎症介质水平、NLRP3及TLR4/NF-κB通路相关蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:秦艽鳖甲散能够改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB通路,下调NLRP3表达有关。

高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

1,25-二羟维生素D_3对2型糖尿病肾病患者血管生成素样蛋白4水平的影响

目的探讨1,25-(OH)_2维生素D_3对2型糖尿病肾病患者血、尿血管生成素样蛋4(Angptl4)水平的影响。方法纳入单纯2型糖尿病患者(A组),糖尿病肾病微量白蛋白尿组(B组),糖尿病肾病大量蛋白尿组(C组),每组各30例。将60例DN患者按性别、年龄配对再随机分为接受1,25-(OH)_2D_3治疗组和对照组各30例。检测所有患者尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)、尿Angptl4,血1,25-(OH)_2D_3、血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血钙(Ca)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1C)和血Angptl4,治疗组给予骨化三醇胶丸治疗12周,并复查上述指标。结果与A组患者相比,B组和C组患者ACR、尿Angptl4水平明显升高(P<0.05),血1,25-(OH)_2D_3、血Angptl4水平明显下降(P<0.05);与B组相比,C组患者ACR、尿Angptl4水平明显升高,(P<0.05),血1,25-(OH)_2D_3、血Angptl4水平明显下降(P<0.05);对照组治疗前后各项指标无明显变化(P>0.05)。治疗组治疗后与治疗前相比,ACR和尿Angptl4水平下降(P<0.05),血1,25-(OH)_2D_3、血Angptl4水平明显升高(P<0.05);相关分析显示血Angptl4水平与血1,25(OH)_2D_3的水平呈正相关(r=0.526,P<0.05),与尿Angptl4水平呈负相关(r=-0.656,P<0.05),与尿ACR水平呈负相关(r=-0.621,P<0.05)。结论 DN患者血Angptl4水平明显下降、尿Angptl4水平明显上升,而补充活性维生素D_3后,DN患者的血Angptl4水平有所提升,且蛋白尿减少。

类风湿关节炎患者血清及关节液血管生成素样蛋白4、白细胞介素-17、核因子κB受体活化因子配体的临床意义

目的 探讨类风湿关节炎患者血清及关节液血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、白细胞介素-17(IL-17)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达水平及其临床意义。方法 选取165例类风湿关节炎患者纳入观察组,选取同期165例骨关节炎患者纳入疾病对照组,并选取165名健康体检者纳入正常对照组。采用酶联免疫吸附法检测3组研究对象血清和(或)关节液中ANGPTL4、IL-17、RANKL表达水平,分析观察组患者血清ANGPTL4、IL-17、RANKL水平与疾病活动度的相关性。结果 观察组血清ANGPTL4、IL-17、RANKL水平高于疾病对照组和正常对照组,疾病对照组血清ANGPTL4、IL-17、RANKL水平高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组关节液ANGPTL4、IL-17、RANKL表达水平与疾病对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组和疾病对照组关节液ANGPTL4、IL-17、RANKL表达水平均低于血清表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不同疾病活动度患者中,高度活动者血清ANGPTL4、IL-17、RANKL水平高于低度活动者、中度活动者,且中度活动者高于低度活动者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,类风湿关节炎患者血清ANGPTL4、IL-17、RANKL水平均与疾病活动度指标28个关节疾病活动度(DAS28)评分、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)水平呈正相关(P<0.001)。受试者工作特征曲线显示,血清ANGPTL4、IL-17、RANKL联合预测类风湿关节炎患者1年关节影像学进展的曲线下面积为0.910。结论 类风湿关节炎患者血清ANGPTL4、IL-17、RANKL与疾病活动度均呈正相关,三者联合预测1年关节影像学进展的效能较好,为监测类风湿关节炎病情变化提供了新途径。

缬沙坦通过TGF-β1/Smad3信号通路调控足细胞血管生成素样蛋白4的表达

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人足细胞血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)表达的影响,以及缬沙坦对这一作用的调控及相关机制。方法不同浓度TGF-β1(0、1、2.5、10 ng/mL)刺激常规培养的人足细胞系,刺激不同时间(12、24、48 h)后,RT-PCR和Western blot检测ANGPTL4的mRNA及蛋白表达情况;将人足细胞系分为4组:对照组、TGF-β1刺激组、Smad3抑制剂(SIS3)+TGF-β1组、缬沙坦+TGF-β1组,给予不同处理,检测ANGPTL4 mRNA及蛋白表达情况,以及Smad3和p-Smad3蛋白表达。结果TGF-β1刺激足细胞后,ANGPTL4 mRNA和蛋白表达水平呈剂量和时间依赖性升高;与TGF-β1单独刺激组比较,SIS3处理可显著抑制TGF-β1诱导的ANGPTL4 mRNA和蛋白表达水平的升高(均P<0.01),缬沙坦处理亦可显著抑制TGF-β1诱导的ANGPTL4 mRNA和蛋白表达以及p-Smad3/Smad3蛋白表达。结论TGF-β1/Smad3信号通路可调控足细胞ANGPTL4表达,缬沙坦可能通过TGF-β1/Smad3通路抑制足细胞ANGPTL4表达,从而发挥肾脏保护作用。

特发性膜性肾病中抗M型磷脂酶A2受体抗体、血管生成素样蛋白-4及可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体的临床意义

目的:探讨血清抗M型磷脂酶A2受体(anti-M typephospholipase A2 receptor,PLA2R)抗体、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(soluble urokinase plasminogen activator receptor,suPAR)和尿液血管生成素样蛋白-4(angiopoietin-like protein 4,Angptl4)在特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)诊断中的临床意义。方法:以2012年6月—2016年12月南通大学附属医院肾内科经肾活检确诊为膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的47例患者和同期10例健康成人为研究对象。MN包括IMN 30例,继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy,SMN)17例,其中包括肿瘤相关性MN 6例,狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)6例,乙型肝炎病毒相关性MN(hepatitis B virus-associated membranous nephropathy,HBV-MN)5例。应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测其血清抗PLA2R抗体、suPAR和尿液中Angptl4和足糖萼蛋白(podocalyxin,PCX)蛋白水平;应用免疫组化法检测肾组织中PLA2R和Angptl4表达。比较各组血清抗PLA2R抗体、suPAR和尿液Angptl4蛋白的表达水平,并分析IMN组血清抗PLA2R抗体、suPAR和尿液Angptl4蛋白表达与各临床指标的相关性。结果:IMN组血清抗PLA2R抗体及尿液Angptl4蛋白表达均显著高于SMN组和对照组(P<0.05),各组血清suPAR水平差异无统计学意义(P>0.05)。血清抗PLA2R抗体在IMN组、SMN组和对照组阳性率分别为70%、29.4%、0。IMN组血清抗PLA2R抗体表达水平与24 h尿蛋白、尿液PCX蛋白呈正相关,与血清白蛋白呈负相关;尿液Angptl4蛋白表达水平与PCX蛋白呈正相关。IMN组肾组织中PLA2R和Angptl4阳性表达显著高于其他组(P<0.05)。结论:血清抗PLA2R抗体可作为诊断IMN的特异性指标,并与病情密切相关。血清suPAR对诊断IMN无意义。尿液Angptl4蛋白测定可作为血清抗PLA2R抗体阴性时辅助诊断IMN的新指标。

脑小血管病与Toll样受体4核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3信号通路

脑小血管病是指由于各种病因影响脑内小动脉、微动脉、毛细血管、微静脉和小静脉导致的一系列临床、影像和病理综合征[1]。影像学主要表现为腔隙性病灶、脑白质高信号、脑微出血、近期皮质下小梗死灶和脑萎缩等异常信号[2]。在我国脑小血管病占缺血性脑卒中的46%[3]。随着我国人口老年化程度的不断加深,脑小血管病发病率呈逐年上升趋势。目前,脑小血管病的病理生理改变暂时集中于内皮功能障碍、血脑屏障破坏、慢性缺血低灌注和炎性反应等因素。

高迁移率族蛋白1、Toll样受体4和血管细胞黏附因子1与狼疮性肾炎血脂异常的关系

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB-1)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)与狼疮性肾炎(LN)血脂异常和动脉粥样硬化(atheroscleros,AS)的关系。方法收集20例正常健康人、30例系统性红斑狼疮(SLE)无肾脏损害和35例LN患者外周静脉血,检测血脂水平、HMGB1mRNA、TLR-4mRNA、血清HMGB1蛋白水平、外周血单核细胞CD14+/VCAM-1表达。结果 LN组患者血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显高于SLE组和正常对照组(P<0.01);LN组患者血清中HMGB1表达量(9.86±1.54)g/L高于正常对照组(7.85±0.75)g/L和SLE组(7.46±1.53)g/L;HMGB1mRNA和TLR4mRNA表达亦升高(P<0.01),SLE组和正常对照组差异无统计学意义;与SLE组和正常对照组比较,LN组单核细胞中CD14+/VCAM-1表达明显增强;在LN组患者外周血中HMGB1表达与TLR4、血脂(TG、LDL-C)呈正相关(r=0.915、0.536、0.448,P<0.05或<0.01)。结论在LN发病过程中晚期炎症介质HMGB1可能通过与TLR4结合,促进单核细胞表面VCAM-1表达,从而引起血脂异常,参与AS的形成。

Toll样受体4对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:观察小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS1)Toll样受体4(TLR4)的表达及其对高糖诱导凋亡蛋白表达的影响。方法:离体小鼠MS1分为低浓度葡萄糖(5.6mM)对照组(C组)、高浓度葡萄糖(25.0mM和35.0mM)诱导组(HG组)、TLR4抑制剂干预组(35.0mM葡萄糖+1μM CLI-095,HG+CLI组)及TLR4抑制剂对照组(5.6mM葡萄糖+1μM CLI-095,CLI组)。平行培养24h或48h后,先用CCK-8法检测C组和HG组MS1细胞活力,选定高糖干预浓度(35.0mM)及时间(48h);再分别应用免疫组化和Western Blotting检测各组MS1细胞TLR4表达水平;应用Western Blotting检测各组MS1细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3表达水平;应用明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)活性变化。结果:与C组比较,HG组MS1的TLR4蛋白表达显著增加(P<0.01);凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);MMP2活性明显增强(P<0.05);与HG组比较,HG+CLI组Caspase-9水平均明显降低(P<0.01),Caspase-3水平仅有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05);TLR4的表达和MMP2活性虽有下降,但差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:MS1高表达TLR4可能参与高糖诱导的MS1细胞凋亡。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

Toll样受体4及骨形成蛋白2表达在慢性阻塞性肺疾病患者血管重塑中的作用研究

目的探讨肺血管中Toll样受体4(TLR-4)及骨形成蛋白2(BMP-2)的表达在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血管重塑中的作用。方法肺组织标本取自青岛大学医学院附属医院胸外科2012年7月—2013年7月住院需要手术治疗的50例男性高分化肺鳞癌患者。根据是否患有COPD将患者分为COPD组和对照组,各25例。光学显微镜下观察肺动脉形态结构变化;采用图像分析系统测定管壁厚度占外径百分比(WT%)和血管壁横断面积占血管总面积百分比(WA%);免疫组化染色法检测肺动脉血管平滑肌细胞TLR-4、BMP-2、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平,并分析其与血管重塑的相关性。结果 COPD组患者炎症评分、WT%、WA%及肺动脉血管平滑肌细胞TLR-4、BMP-2、PCNA表达水平均高于对照组(P<0.05)。COPD组患者肺动脉平滑肌细胞TLR-4、BMP-2水平与炎症评分、WT%、WA%及PCNA水平均呈正相关,PCNA水平与WT%、WA%、炎症评分均呈正相关(P<0.05)。结论TLR-4、BMP-2的表达水平增加促进了炎性反应,诱导平滑肌细胞增殖,在COPD患者血管重塑过程中起到了重要作用。

虫草菌丝通过抑制TLR4/NF-κB信号通路与血管生成素样蛋白4对肝纤维化小鼠模型的保护作用

目的探究虫草菌丝对CCl_(4)诱导的肝纤维化小鼠模型的干预作用,及对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路与血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)的影响。方法将60只SPF级雄性C57/BL6J小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组及虫草菌丝低、中、高剂量组,每组各10只。模型组和各用药组注射15%CCl_(4)-橄榄油,造模6周。在第4周首日开始给药,连续3周。分别采用血生化法检测小鼠血清ALT、AST、TBil水平或活性,HE和SR染色观察肝组织病理学,碱水解法测定肝组织羟脯氨酸(HYP)含量情况,PCR检测α-SMA、Col-Ⅰ的mRNA表达情况,免疫组化测定肝组织α-SMA、Col-Ⅰ与ANGPTL4蛋白表达,Western Blot检测α-SMA、ANGPTL4、TLR4、NF-κB/P-NF-κB、CD163蛋白的表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常组比较,模型组小鼠血清ALT、AST、TBil水平均显著增加(P值均<0.01);与模型组比较,虫草菌丝高剂量组显著改善小鼠肝纤维化程度,血清ALT、AST、TBil水平均显著减少(P值均<0.05)。HE染色发现虫草菌丝高剂量组能显著减少肝组织炎性细胞浸润。SR染色发现,虫草菌丝高剂量组明显减轻肝脏胶原沉积。与正常组比较,模型组肝组织HYP含量、SR阳性染色面积比均显著增加(P值均<0.01);与模型组比较,虫草菌丝高剂量组肝组织HYP含量、SR阳性染色面积比均显著减小(P值均<0.05)。与正常组比较,免疫组化、PCR和Western Blot结果显示模型组肝组织中α-SMA和Col-ⅠmRNA及蛋白表达显著增加(P值均<0.01);与模型组比较,虫草菌丝高剂量组肝组织中α-SMA、Col-Ⅰ胶原纤维表达均显著减少(P值均<0.05)。与正常组比较,模型组肝组织ANGPTL4、TLR4、P-NF-κB/NF-κB、CD163蛋白表达均显著增加(P值均<0.01);与模型组比较,虫草菌丝高剂量组肝组织ANGPTL4、TLR4、P-NF-κB/NF-κB、CD163蛋白含量均显著降低(P值均<0.05)。结论虫草菌丝对CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化具有显著治疗作用,其机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路及抑制肝组织ANGPTL4表达相关。

高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4与哮喘气道炎症的关系及维生素D的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)与气道炎症的关系及维生素D的作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和1,25-(OH)2D3干预组(每组8只)。采用HE染色观察小鼠肺组织病理学变化并应用计算机图像系统测定支气管壁厚度,采用免疫组化法观察肺组织HMGB1和TLR4表达,同时收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血,将BALF进行细胞学检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF和外周血中HMGB1、TLR-4、白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果哮喘组小鼠肺组织HMGB1和TLR4表达较强,干预组表达较弱。哮喘组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显升高,单核/巨噬细胞比例明显下降(均为P<0.05);干预组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显下降,单核/巨噬细胞比例明显上升(均为P<0.05)。哮喘组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显高于对照组,IFN-γ含量均明显低于对照组(均为P<0.05);干预组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显低于哮喘组,IFN-γ含量明显高于哮喘组(均为P<0.05)。BALF中HMGB1和TLR4含量分别与细胞总数和IL-4浓度均呈正相关(r1为0.796、0.730;r2为0.695、0.648;均为P<0.05)。结论 HMGB1和TLR4与气道炎症和免疫紊乱有关;适量1,25-(OH)2D3可减轻气道炎症,可能与调节Th1/Th2细胞平衡有关。

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景:目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。目的:分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法:选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论:①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组(P<0.05)。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组(P<0.05)。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组(P<0.05),白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组(P<0.05);紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组(P<0.05),紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组(P<0.05)。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.60,P<0.01);过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关(P<0.01),与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关(r=-0.66,P<0.01)。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。

Toll样受体4介导的自噬减轻糖基化高密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:探讨自噬对糖基化高密度脂蛋白(glycosylated high-density lipoprotein,gly-HDL)所致的血管内皮细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分别与100 mg/L HDL和不同浓度(25、50和100 mg/L)gly-HDL共同孵育24 h;另再培养HUVECs给予1μmol/L自噬诱导剂雷帕霉素或2 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理1 h,或5 mg/L抗Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)单克隆中和抗体预处理30 min,再与gly-HDL(100 mg/L)共同孵育24 h。采用MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用Western blot技术检测自噬标志分子beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、内质网应激凋亡途径关键分子caspase-12及TLR4的表达变化,采用激光共聚焦显微镜观测细胞内LC3的变化。结果:经gly-HDL处理的HUVECs活力下降,LDH漏出和细胞凋亡显著增加(P<0.01),且caspase-12被激活(P<0.05);雷帕霉素预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用减弱(P<0.05);而3-MA预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用则进一步加强(P<0.05)。gly-HDL显著上调TLR4的表达,并触发自噬反应,表现为beclin-1和LC3-Ⅱ表达上调及LC3显著颗粒化,且呈浓度依赖性(P<0.05);而抗TLR4单克隆中和抗体预处理可显著抑制gly-HDL所诱导的beclin-1上调和LC3颗粒化(P<0.01)。结论:TLR4介导gly-HDL对HUVECs自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制caspase-12活化减轻gly-HDL所诱导的HUVECs凋亡。