ANG-1基因重组腺相关病毒获取及转染猪骨髓干细胞的研究

目的:构建携带血管形成素-1(ANG-1)基因腺相关病毒(AAV)载体,通过病毒包装和纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并转染到乳猪骨髓干细胞中,获得有效表达,为进行血管再生的基因治疗研究奠定基础。方法:利用PCR技术,获取目的基因ANG-1,通过重组DNA技术得到ANG-1与pUC119的重组质粒,采用Sal和Bgl双酶将pUC119中的目的基因ANG-1基因片断切出,再克隆到质粒pSNAV2.0中。用Lipofectamine将pSNAV ANG-1质粒转染293细胞后,用G418选择培养获得293/AAV2ANG-1细胞株,产生了有传染性的病毒颗粒,纯化并进行病毒DNA颗粒滴度测定。分别将绿色荧光蛋白(GFP)基因重组腺相关病毒(rAAV2GFP)及rAAV2ANG-1感染猪骨髓干细胞,并对转染效率及转染后表达情况进行初步研究。结果:测序证实ANG-1与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与PCR筛选证实重组质粒和预期结果完全一致,在新的重组质粒中,ANG-1有一套CMV启动子和PolyA终止子系统。293细胞包装病毒效果良好,携带ANG-1的感染性AAV滴度为9×1011v.g/ml,用Western杂交法检测显示猪骨髓干细胞中表达ANG-1。1×106v.g/ml rAAV2GFP感染CD34阳性细胞48h后55%左右的细胞有明显的荧光。结论:ANG-1基因AAV构建成功,并能在骨髓干细胞中有效表达,为严重缺血性疾病基因治疗的研究奠定了基础。

促血管生成素-1与冠状动脉病变严重程度的关系

目的 探讨促血管生成素-1（Ang-1）与冠脉狭窄严重程度的关系.方法 134例冠脉造影阳性患者按冠脉病变支数及狭窄程度（按Gensini评分）的不同分别检测血清Ang-1水平.结果 随冠脉病变支数增多,Ang-1浓度增高,单支、两支、三支病变组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;Gensini评分高分数组Ang-1水平明显高于低分数组（P＜0.05）;Ang-1与冠脉狭窄程度（Gensini评分）呈正相关（r =0.674,P=0.032）.结论 血清Ang-1水平随冠脉狭窄严重程度增加而增加,或可促进缺血心肌的冠脉血管新生.