纤溶酶原激活物抑制因子1在腹膜透析患者中的表达变化及对基质金属蛋白酶-2/血管内皮生长因子/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的调控作用

目的揭示纤溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)在腹膜透析患者中的表达及其功能。方法选择100例腹膜透析患者作为研究对象,透析7个月后,根据腹膜平衡试验结果将患者分为高转运组和低转运组。透析1个月时和7个月时,使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测所有患者透析液中PAI-1、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平。对C57/BL6小鼠连续28 d腹腔注射3 mL含4.25%葡萄糖的腹膜透析液来建立腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF)小鼠模型。将小鼠按随机数字表法分为3组(n=12):对照组、PF+si-NC组和PF+si-PAI-1组。PF+si-NC组和PF+siPAI-1组小鼠分别腹腔注射300μL阴性对照siRNA(si-NC)或靶向PAI-1的siRNA(si-PAI-1)。通过蛋白质印迹法检测PAI-1、MMP-2、VEGF、磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2(phosphorylated vascular endothelial growth factor 2,pVEGFR2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,pErk)的蛋白表达。通过免疫组织化学染色检测巨噬细胞表面标志物(macrophage surface markers,CD68)、VEGF和血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的阳性表达。结果与透析1个月时相比,透析7个月后患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。与低转运组相比,高转运组患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。PAI-1、MMP-2和VEGF联合诊断高转运的曲线下面积(area under curve,AUC)、敏感性和特异性依次为0.909、82.61和92.45。与PE+siNC组比较,PE+si-PAI-1组的间质细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和炎症细胞浸润明显减轻。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的CD68、VEGF和CD31阳性率降低(P<0.05)。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的PAI-1、MMP-2、VEGF、pVEGFR2和pErk的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论本研究显示PAI-1、MMP-2和VEGF的联合诊断对腹膜溶质转运速率具有较高的诊断价值。下调PAI-1可能通过抑制MMP-2/VEGF/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路来抑制血管生成,从而抑制腹膜纤维化。

原儿茶酸对子宫内膜异位症大鼠炎症反应及血管生成的作用机制研究

目的:观察原儿茶酸(Protocatechuic acid,PA)对大鼠子宫内膜异位症(heterotopia endometriosis,EMS)组织血管生成的作用及机制。方法:选择动情期雌性SD大鼠,通过子宫内膜自体缝合术建立SD大鼠的EMS疾病模型,将54只SD大鼠随机均分为空白组、模型组、PA(高、中、低)剂量组和孕三烯酮组,PA各剂量组和孕三烯酮组每天灌胃给药1次,模型组给予等容积的生理盐水,连续灌胃28d,空白组大鼠正常喂养。测量大鼠的异位组织体积,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠腹腔积液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及白介素1β(IL-1β)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测组织中血管生成素(Ang)-1和Ang-2水平、血清及组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量、组织中总细胞外信号调节激酶1/2(t-ERK1/2)和磷酸化总细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠14d、42d的病灶体积升高,腹腔液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β均显著升高,子宫内膜组织Ang-1、Ang-2蛋白表达均显著升高,血清中VEGF和MMP-2、MMP-9蛋白表达均显著升高,子宫内膜异位症组织中p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均显著升高(P<0.05)。原儿茶酸低剂量组、原儿茶酸中剂量组、原儿茶酸高剂量组呈浓度依赖性负向调控上述指标的变化(P<0.05)。结论:原儿茶酸可减轻子宫内膜异位症大鼠创面损伤,抑制炎症反应和血管生成,其潜在的机制可能与失活ERK/VEGF/MMP通路有关。

血管内皮抑素的临床应用进展

内皮抑素（endostafin，ES）是一种能特异性作用于内皮细胞，并能抑制血管生成的内源性血管生长调节因子。自1997年美国哈佛大学O’Relny从鼠血管内皮细胞瘤株的培养液中分离出内皮抑素，经纯化和氨基酸测序后，发现它是胶原蛋白的XVⅢ的一个片段，并证实它是一种潜在的内源性抗血管新生因子。经多个实验证实，ES能有效抑制多达60种以上不同种类肿瘤，并能调节12％的人类基因组表达，从而下调病理性血管发生而没有毒副作用，也无耐药性，是迄今发现的最好的血管生成抑制因子之一。现将ES在临床上的研究和应用进展简要综述如下。

VEGF和MMP-9在食管癌中的表达及低氧调节研究

目的本研究主要就食管癌表血管形成过程中MMP-9和VEGF的表达情况以及低氧的调节作用展开分析讨论。方法选择我院2011年2月至2012年2月所收治的56例食管癌患者作为研究对象,其中有42例患者手术标本中的MMP-9和VEGF表达采用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-TCR)来进行检测,56例患者手术标本中的MMP-9和VEGF表达采用酶联吸附试验来进行测定,并用免疫组化染色法来对其MVD以及VEGF来进行测定。结果食管癌患者病灶部位的VEGF表达明显高于癌旁组织,且与肿瘤内的MVD呈正相关,VEGF阴性与VEGF阳性患者的平均MVD计数存在显著差异,具有统计血意义,P<0.05。其MMP-9的表达同样高于癌旁组织,但与患者的临床病理特征以及MVD计数无关,低氧可以增加VEGF的表达,但不会影响MMP-9的表达。结论在食管癌的形成以及转移过程中,VEGF表达起到了十分重要的作用,同时它还受到低氧的调节,将来可以将其作为抗血管治疗的靶点以及食管癌进展过程中的生物学指标。

七氟烷调节ERK-VEGF/MMP-9通路抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的实验研究

目的:探讨七氟烷抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶-9(MMP-9)通路的影响。方法:不同气体浓度七氟烷处理人胶质瘤U251细胞24 h,分为空白对照组(0%)、七氟烷低(1.7%)、中(3.4%)、高(5.1%)剂量组和阳性对照组(多柔比星,75 nmol·L^(-1)),采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、改良Matrigel Boyden室测定法和划痕试验法检测细胞存活率、侵袭能力和迁移能力,采用蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞ERK、VEGF和MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,七氟烷低、中、高剂量组及阳性对照组人胶质瘤U251细胞存活率、侵袭细胞数、细胞迁移率和ERK、VEGF、MMP-9蛋白表达量均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);七氟烷高剂量组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:七氟烷能够抑制人胶质瘤U251细胞的侵袭及迁移能力,其机制可能与降低ERK-VEGF/MMP-9信号通路相关蛋白表达量有关。

胃癌组织血管内皮生长因子、微血管密度和微淋巴管密度检测及其意义

新生血管形成是实体肿瘤侵袭性生长的必要条件。血管内皮生长因子（VEGF）是一个主要的肿瘤血管生长调节因子，我们观察VEGF在胃癌组织、癌旁组织的表达状况，并检测微血管密度（MVD）及微淋巴管密度（MLD），分析它们表达与胃癌临床病理特征及生存期的关系，探讨VEGF在胃癌发病机制中的作用。

熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响

目的:探讨熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶9(MMP-9)通路的影响。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型组、熊果酸低(100 mg·kg^-1)、中(250 mg·kg^-1)、高(500 mg·kg^-1)剂量组、孕三烯酮(60 mg·kg^-1)组,每组12只,另取12只设为假手术组。造模后以熊果酸及孕三烯酮灌胃治疗,1次/d,持续给药7 d。给药结束24 h后处死大鼠,观察药物对大鼠异位子宫内膜体积生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色检测各组大鼠异位子宫内膜组织中CD31表达情况;采用免疫酶联吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中VEGF和MMP-9水平;采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测大鼠异位子宫内膜组织中VEGF、MMP-9 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠异位子宫内膜组织中ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、VEGF、MMP-9蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组相比,熊果酸组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9 mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著降低(P<0.05),异位子宫内膜生长抑制率升高(P<0.05)且熊果酸各剂量组之间呈剂量依赖性;熊果酸高剂量组和孕三烯酮组相比,差异无统计学意义(P>0.05);ERK蛋白表达各组之间无明显变化(P>0.05)。结论:熊果酸可抑制子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,可能是通过下调ERK-VEGF/MMP-9通路来实现。

西藏地区胃癌患者血清VEGF的变化及临床意义

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率有上升趋势。但其发病机制目前仍未完全阐明。研究证实，肿瘤生长微环境和肿瘤血管生长在其发生发展中占重要位置。而VEGF（血管内皮生长因子）是重要的血管生长调节因子。