白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB调控鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤作用

目的探讨白藜芦醇(RES)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/TLR4/NF-KB调控大鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤的作用。方法采用大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞株为主要受试物,分为对照组、RES组(30μmol/L)、AngⅡ组(10^-4μmol/L)和实验组(30μmol/L RES预处理2 h+10-4μmol/L AngⅡ)。CCK-8法检测A7r5细胞的存活率;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6表达;采用试剂盒检测ROS和iNOS活性;Western blot法检测A7r5细胞AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白表达水平。结果与对照组相比,AngⅡ组A7r5细胞株存活率显著升高,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低(P<0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著升高,ROS和iNOS活性显著升高,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高(P<0.05)。与AngⅡ组相比,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低,实验组A7r5细胞株存活率下降更为明显(P<0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论白藜芦醇可有效缓解大鼠血管平滑肌细胞的炎症和氧化应激损伤,主要通过抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB信号通路。

血管外膜局部血管紧张素Ⅱ调控TLR4在高血压血管重构中的作用及机制探讨

目的探讨血管外膜在高血压血管重构中的作用以及局部血管紧张素Ⅱ通过TLR4信号途径对高血压血管重构的影响。方法去除大鼠颈动脉外膜,局部转染血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)腺病毒质粒,观察血管结构的变化,分离SHR大鼠血管外膜单核细胞进行原代培养,研究AngⅡ分别经TLR4信号和MYD88依赖和Trif依赖性途径,对单核细胞P38 MAPK,NF-KB活性以及MCP-1表达的影响,分析AngⅡ调控TLR4信号的主传导途径。结果去除血管外膜能使增生内膜形成,血管外膜局部注射转染AngⅡ的腺病毒质粒,可观察到单核细胞浸润及炎症因子MCP-1的表达,AngⅡ经TCR4信号途径,对单核细胞P38 MAPK和NF-KB活性以及炎症因子表达产生明显的影响。结论血管外膜在高血压血管重构中起重要作用,这与局部AngⅡ通过调控天然免疫TLR4,通过MYD88依赖性信号传导途径影响炎症因子表达有关。

血管紧张素Ⅱ诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达及髓过氧化物酶活性的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对RAW264.7细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA、蛋白表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响及其致炎致动脉粥样硬化(AS)机制。方法:体外培养RAW264.7细胞,用不同浓度的AngⅡ(1、10、100、1000nmol/L)及100μg/L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24h后,RT-PCR法测RAW264.7细胞TLR4 mRNA水平,Western blot检测RAW264.7细胞TLR4蛋白表达,比色法测细胞培养上清中MPO活性。同时,预先加入不同剂量的TLR4阻断剂(1mg/L、5mg/L)后,再用AngⅡ(100nmol/L)刺激RAW264.7细胞24h,检测细胞培养上清中MPO活性。结果:AngⅡ浓度依赖性地增加RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01),LPS也可诱导RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01);AngⅡ浓度依赖性地升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01),LPS也可升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01),而TLR4阻断剂明显抑制AngⅡ这一效应(P<0.01)。结论:AngⅡ上调RAW264.7细胞TLR4表达,通过跨膜受体TLR4诱导MPO分泌,加重炎症反应,促进AS的形成和发展。

Toll样受体4在血管紧张素Ⅱ致高血压小鼠心脏纤维化中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致高血压小鼠心脏纤维化过程中的作用。方法野生型C57小鼠18只分为3组:空白对照组、AngⅡ组和TLR4阻断组,每组6只。AngⅡ组和TLR4阻断组AngⅡ微量泵灌注建立高血压模型,TLR4阻断组尾静脉注射TLR4中和抗体后,小鼠尾动脉套法测血压,心动超声图观察小鼠的心脏功能变化。免疫组织化学、Masson染色观察心脏纤维化。RT-PCR检测心肌白细胞介素1β和单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达。结果与AngⅡ组比较,TLR4阻断组小鼠血压降低,左心室舒张末期壁厚度减少,舒缩未期左心室内径增加(P<0.05)。心肌组织半乳糖凝集素2阳性巨噬细胞浸润减少,白细胞介素1β和单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。小鼠心肌间质和血管周围纤维化减轻(P<0.05)。结论 TLR4通过介导炎性反应参与AngⅡ所致高血压小鼠心脏纤维化过程。

血管紧张素Ⅱ和高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4信号通路及炎性因子表达的影响

目的探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率最高的siRNA,用于后续实验。第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响。采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况。结果高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88mRNA的表达水平(均P<0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P<0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显。siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高糖及AngⅡ组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖环境和AngⅡ刺激系膜细胞TLR4/MyD88信号通路激活,特异性TLR4siRNA基因可以部分阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号的激活,厄贝沙坦也可部分阻断TLR4信号通路,高糖和AngⅡ共刺激增强由TLR4介导的天然免疫炎症效应,TLR4/MyD88信号通路在此效应中扮演重要角色;TLR4siRNA基因沉默技术为寻找DN的治疗方法提供了新思路,也为临床上使用ARB延缓DN进程提供了新的理论依据。

血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞Toll样受体4和炎症因子表达

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)所模拟的高血压肾损害微环境中的作用机制。方法 NRK-52E细胞按AngⅡ浓度梯度(10^(-6)~10^(-10)mol/L)培养24h以确定最佳干预浓度,按时间梯度(6~48h)分组培养选择最佳干预时间;同时建立稳定转染TLR4特异RNAi质粒的NRK-52E细胞株。免疫细胞化学及RT-PCR检测TLR4表达水平,ELISA检测上清IL-6及TNF-α水平。结果 10^(-6)~10^(-9)mol/L的AngⅡ均可诱导NRK-52E细胞中TLR4 mRNA明显上调,其中10^(-7)mol/L组作用更为显著;6h即可见TLR4 mRNA水平显著增高,高峰维持12~24h;同时IL-6、TNF-α表达亦上调。TLR4特异性RNA干扰可显著抑制NRK-52E中TLR4的mRNA表达,逆转AngⅡ对IL-6、TNF-α表达的上调作用。结论 AngⅡ可诱导NRK-52E细胞中TLR4及IL-6、TNF-α的表达,阻断TLR4可抑制相关炎症因子的表达,提示TLR4可能通过诱导微炎症反应而参与高血压肾损害。

血管紧张素Ⅱ_1型受体阻断剂——氯沙坦抑制CCl_4诱导的大鼠肝纤维化

目的 探讨血管紧张素Ⅱ1 型受体阻断剂———氯沙坦对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用。方法 SD大鼠按 1ml·kg-1 体重皮下注射 5 0 %CCl4植物油溶液 ,用分光光度法测定血浆丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸转氨酶 (AST)活性和肝组织羟脯氨酸 (Hyp)含量 ,并采用放免方法测定血清PCⅢ和HA含量。给药 1 2周后取肝组织进行HE染色。结果 氯沙坦剂量组(2 5 ,5 ,1 0mg·kg-1 ,ig)、卡托普利组 (1 0 0mg·kg-1 ,ig)明显降低肝纤维化大鼠血清转氨酶 (ALT、AST)、PCⅢ、HA水平和肝组织中Hyp含量。组织病理学检查显示氯沙坦有减轻肝纤维化作用。

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达及髓过氧化物酶活性的抑制作用

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的RAW264.7细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响及其抗炎、抗动脉粥样硬化机制。方法体外培养RAW264.7细胞。采用RT-PCR检测RAW264.7细胞TLR4mRNA水平,Western blotting检测RAW264.7细胞TLR4蛋白表达,比色法测定细胞培养上清中MPO活性。结果罗格列酮浓度依赖性地下调AngⅡ诱导的RAW264.7细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性。此外,TLR4阻断剂对AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性有部分地抑制作用,而罗格列酮可增强这一抑制效应。同时罗格列酮明显地抑制TLR4特异性配体脂多糖的促MPO分泌效应。结论罗格列酮可下调AngⅡ诱导的RAW264.7细胞TLR4表达,并可能通过干预TLR4,影响胞内信号转导途径,抑制MPO分泌,减轻炎症反应,阻止动脉粥样硬化的发生发展。

基于TLR4信号通路研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ诱导ANA-1细胞炎性应答的影响

目的:研究小檗碱(BBR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法:对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜(DMSO);模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液;低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μmol/L BBR工作液;抑制剂组加入浓度为10μmol/L TAK242工作液。采用细胞增殖与毒性检测实验(CCK-8)方法检测不同浓度的BBR对细胞活力的影响;采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度(MFI);采用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平;采用Western blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、pJNK/JNK、p-p65/p65、p-IRF3/IRF3的磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况;采用生化法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:(1)CCK-8法检测结果:与对照组比较,低、中、高剂量BBR组细胞活性均无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)流式细胞术检测结果:与荧光抗体组比,模型组MFI明显减弱;与模型组比较,模型+高剂量BBR组MFI明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ELISA检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)实时定量PCR法检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)Western blot结果:与对照组比较,模型组处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显下降。与对照组比较,模型组处理15 min后ERK、p38蛋白磷酸化表达明显升高,处理30 min后JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,而模型+高剂量BBR组与模型+抑制组p65、IRF-3、ERK、p38、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、p-p65的表达明显升高,而模型+高剂量BBR组、模型+抑制剂组、模型+抑制剂+高剂量BBR组的TLR4、p-p65蛋白的表达均明显下降。(6)生化检测结果:与对照组比较,模型组MDA含量明显升高,SOD活力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),模型+低、中、高剂量BBR组MDA含量明显下降,SOD活力明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BBR能够调控TLR4信号通路,抑制由AngⅡ诱导TLR4信号通路的异常激活和NF-κB、MAPK信号转导,降低促炎因子的水平,调控炎性应答;此外,BBR还能够改善AngⅡ诱导ANA-1细胞的脂质过氧化程度及抗氧化能力,降低AngⅡ造成的氧化应激损伤,保护ANA-1细胞。

血管紧张素Ⅱ及氯沙坦对小鼠足细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)对足细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响,及血管紧张素1型受体阻断剂氯沙坦(Losartan,Lo)能否抑制Ang II对足细胞GLUT4的作用。方法将小鼠MPC5足细胞分成对照组、AngⅡ10-6mmol/L组、AngⅡ10-8mmol/L组、AngⅡ10-10mmol/L组、Lo10-6mmol/L+AngⅡ10-6mmol/L组,半定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测足细胞GLUT4m RNA的水平,间接免疫荧光检测GLUT4蛋白的表达。结果与对照组相比,AngⅡ10-6mmol/L组能够显著抑制GLUT4的表达及蛋白合成,GLUT4m RNA的表达下降了56.1%(P=0.041),间接免疫荧光表达下降了54.9%(P<0.05)。AngⅡ10-8mmol/L组及AngⅡ10-10mmol/L组GLUT4的表达与对照组相比有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05),AngⅡ10-8mmol/L组对GLUT4抑制强于AngⅡ10-10mmol/L组,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。Lo 10-6mmol/L+AngⅡ10-6mmol/L组GLUT4的表达显著升高,与AngⅡ10-6组相比,m RNA升高176.3%(P=0.006),蛋白表达升高87.8%(P<0.05)。结论 AngⅡ能够显著抑制足细胞GLUT4的表达及合成,具有浓度依赖性,这种作用能被氯沙坦所阻断。

多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)、原代的Wistar-Kyoto(WKY VSMCs)和自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉血管平滑细胞(VSMCs)为研究对象,观察刺激D4受体对AngⅡ促增殖作用的影响以及D4受体特异性阻断剂L745870对该作用的阻断效应。细胞增殖采用MTT和细胞计数方法测定。结果 AngⅡ(10-7mol/L)可促进A10细胞增殖,最大增殖幅度为64%。D4受体激动剂PD168077本身对A10细胞无增殖影响,但D4受体特异激动剂PD168077可抑制AngⅡ(10-7mol/L)介导的血管平滑肌细胞的增殖作用,最大抑制幅度为40%;应用D4受体阻断剂L745870后该抑制作用丧失;D4受体对AngⅡ介导血管增殖的作用在SHR和WKY大鼠的VSMCs之间并无区别。结论 D4受体对AngⅡ介导的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用可能在一定程度上抑制了高血压病所伴发的血管平滑肌细胞增殖。

Sirt4在心肌细胞中增强血管紧张素Ⅱ对GATA结合蛋白4的激活作用

目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对照腺病毒(Ad-GFP/Ad-U6)分别感染大鼠原代心肌细胞,感染24 h后用PBS或1μmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理细胞48 h。采用Western blot及Real-time PCR检测GATA4的表达,通过免疫荧光及细胞核分离法检测GATA4的核转运,利用双荧光素酶报告基因法检测GATA4下游分子心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的启动子活性。结果 Sirt4在大鼠原代心肌细胞中不会影响GATA4的蛋白及mRNA水平(P>0.05)。与对照组比较,Sirt4过表达显著增加AngⅡ诱导的GATA4磷酸化,而干扰Sirt4表达降低GATA4的磷酸化水平。在大鼠原代心肌细胞中下调Sirt4表达可以明显抑制AngⅡ引起的GATA4入核;Sirt4过表达显著增加GATA4下游分子ANP、BNP的启动子活性(P<0.01)。结论 Sirt4可以在大鼠原代心肌细胞中促进AngⅡ对GATA4的激活效应。

TRPV4受体对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠肾损害的影响

目的通过利用瞬时受体电位香草酸亚型4(transient receptor potential vanilloid type 4,TRPV4)基因敲除(TRPV4-/-)小鼠,探讨TRPV4受体在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)所诱导的肾损害中的作用。方法实验小鼠分为假手术组和Ang Ⅱ处理组。在野生型和TRPV4-/-小鼠中通过皮下灌注Ang Ⅱ建立Ang Ⅱ依赖型高血压模型,而假手术组小鼠皮下只灌注生理盐水。处理4周后,分别检测小鼠的尾动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量及8-异构前列腺素、血清肌酐的改变,并且同时对肾组织病理学的变化进行分析。结果与相应的假手术组比较,Ang Ⅱ处理组小鼠血压升高、尿白蛋白及8-异构前列腺素排泄量增加,并同时伴有血清肌酐升高(P<0.05);肾小球纤维样硬化及肾小管间质损伤程度均出现明显加重,并伴有肾胶原蛋白水平的增高(P<0.05)。除血压外,TRPV4基因敲除能显著抑制上述所有病理变化,从而缓解Ang Ⅱ所诱导的肾损害(P<0.05)。结论在Ang Ⅱ所诱导高血压的过程中,TRPV4基因敲除能够明显减弱由上述过程所诱发的肾损害。因此,上述研究结果提示TRPV4受体在促进Ang Ⅱ所诱导的肾损害中发挥重要的病理生理学作用。

高血压发生中多巴胺D4受体对肾脏近曲小管细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的异常调控

目的研究多巴胺 D_4受体对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞上血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)表达的异常调控在原发性高血压(EH)发生中的作用。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠的 RPT 细胞株作为研究对象,采用免疫印迹法测定刺激 D_4受体后 AT_1R 的表达变化,并观察其作用机制及信号途径。结果 D_4受体激动剂PD168077(10^(-6)mol/L,24 h)刺激 D_4受体可明显抑制 WKY 大鼠 RPT 细胞 AT_1R 的表达,该作用呈现浓度和时间依赖性关系;PD168077对 AT_1R 表达的抑制作用可被 D_4受体特异性阻断剂 L745870(10^(-6)mol/L)所阻断;相反,在 EH 状态下这种作用受损,PD168077反而增加 AT_1R 的表达。在钙通道拮抗剂尼卡地平存在的情况下 D_4受体对 WKY 细胞 AT_1R 的抑制作用被阻断,提示 D_4受体对 AT_1R 的下调作用可能通过钙通道途径发生影响。结论D_4受体对 AT_1R 蛋白表达具有抑制作用,该作用受损可能在高血压的发生、发展过程中发挥一定作用。

血管紧张素受体AT_2及AT_4研究进展

血管紧张素Ⅱ的大部分心血管效应是由血管紧张素Ⅱ1型受体介导,但是越来越多的研究显示:血管紧张素Ⅱ2型受体具有拮抗AT1的功能,并被认为其可能是一种潜在的心脏、血管保护性受体。血管紧张素Ⅳ及其4型受体发挥着与经典血管紧张素Ⅱ不同甚至相反的生物学功能。

黄芪甲苷通过抑制氯化物细胞内通道蛋白4/ADP核糖基化因子6信号通路改善血管紧张素Ⅱ诱导的高血压大鼠模型的心肌损伤

目的探究黄芪甲苷在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠模型中的心肌保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠分随机分为6组,每组10只:对照组,模型组,黄芪甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)组和ADP核糖基化因子6(Arf6)特异性抑制剂(NAV-2729)组。建立AngⅡ诱导高血压心肌损伤大鼠模型后给予不同药物或剂量处理2周后,观察各组大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡以及相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达情况。另选30只SD大鼠随机分为3组,每组10只:氯化物细胞内通道蛋白4(CLIC4)过表达联合黄芪甲苷组、腺病毒阴性对照联合黄芪甲苷组及腺病毒阴性对照组。先通过尾静脉注射相应腺病毒,再用AngⅡ诱导高血压模型。2周后观察大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡情况。结果与模型组大鼠比较,中剂量和高剂量的黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压心肌损伤模型大鼠的心脏功能及心肌结构,促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(0.36±0.01比0.22±0.02,0.78±0.01比0.22±0.02;均P<0.05),抑制Bax表达(1.51±0.02比2.13±0.03,1.22±0.01比2.13±0.03;均P<0.05)。黄芪甲苷通过抑制CLIC4/Arf6蛋白表达发挥心肌保护作用,过表达CLIC4则减弱这种保护作用。结论黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压大鼠模型中的心肌损伤,可能通过抑制CLIC4/Arf6信号通路实现。

血管紧张素Ⅱ-CaMK-CREB-CYP11B2和肾上腺素-PKA-CREB-CYP11B2途径在应激性高血压发病中的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ-CaMK-CREB-CYP11B2和肾上腺素-PKA-CREB-CYP11B2途径在应激性高血压(SIH)发病中的作用。方法选取鼠龄在6～8w的SPF级雄性Wistar大鼠28只,适应性喂养7d后,按照完全随机法分为SIH模型组与正常组,每组14只。通过每天声光间断足底电、夹尾持续刺激12w构建SIH大鼠模型。采用放射免疫法检测SIH模型大鼠血浆血管紧张素Ⅱ含量,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测SIH模型大鼠血清肾上腺素含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学方法检测SIH模型大鼠肾上腺组织Creb、Nr4a1、Nr4a2、Cyp11b2基因mRNA表达和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平及醛固酮合酶(CYP11B2)蛋白表达水平的变化。结果与正常组比较,SIH模型组大鼠体质量增长明显缓慢,收缩压与舒张压均明显升高(P <0.05),血浆血管紧张素Ⅱ含量无明显变化(P>0.05),血清肾上腺素含量明显升高(P <0.05),肾上腺组织Creb基因mRNA表达水平明显上调(P <0.05),Nr4a1与Nr4a2基因mRNA表达水平有下调趋势(P>0.05),Cyp11b2基因mRNA表达水平明显上调(P <0.05);与正常组比较,SIH模型组大鼠肾上腺CREB磷酸化水平及CYP11B2蛋白表达水平明显上调(P <0.05)。结论SIH模型组大鼠肾上腺组织肾上腺素-PKA-CREBCYP11B2途径的激活是血液醛固酮含量增多、应激性高血压发病的原因之一。

血管紧张素Ⅱ在肺纤维化进展中的作用机制研究

目的探究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在肺纤维化进展中的作用机制。方法随机将30只清洁级雄性大鼠分为3组,每组10只,分别为空白对照组、模型组、AngⅡ组。空白对照组经气管滴入0.9%氯化钠溶液200 ml,模型组气管滴入博来霉素5 mg/kg,AngⅡ组气管滴入博来霉素同时皮下埋入AngⅡ微量泵,以25μg·kg-1·h-1的速度持续泵入AngⅡ,用药4周后取肺组织进行NOX4、NALP3免疫荧光染色,采用免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平。结果荧光免疫染色可见,与空白对照组相比,模型组大鼠肺组织中NOX4蛋白强度明显增加,AngⅡ组大鼠的肺纤维化程度较模型组进一步加重,NOX4强度明显增加,免疫印迹试验结果显示,NOX4蛋白表达为AngⅡ组(0.76±0.14)>模型组(0.58±0.19)>空白对照组(0.18±0.07),组间差异有统计学意义(P<0.05);荧光免疫染色可见,与空白对照组相比,模型组大鼠肺组织中NALP3染色细胞明显增多,强度增加,AngⅡ组大鼠的肺纤维化程度较模型组进一步加重,NALP3强度明显增加,免疫印迹试验结果显示,NALP3蛋白表达为AngⅡ组(0.50±0.04)>模型组(0.25±0.03)>空白对照组(0.11±0.01),组间差异统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ能够激活NOX4、NALP3信号通路,从而加重大鼠肺纤维化进程。

木犀草素调控Nrf2-Gpx4介导铁死亡途径抑制Ang Ⅱ诱导心肌细胞肥大

目的:探究木犀草素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导下心肌细胞肥大的影响及分子机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,MTT法检测木犀草素对AngⅡ诱导下心肌细胞活力的影响,以筛选木犀草素的实验浓度。将H9c2细胞分为6组:正常对照组、模型组、木犀草素25μmol/L组、木犀草素50μmol/L组、Nrf2抑制剂brusatol(100 nmol/L)组、木犀草素50μmol/L+brusatol组,根据分组给予相应的药物预处理,再用AngⅡ诱导建立心肌细胞肥大模型。AngⅡ处理48 h后,Texas Red^(TM)-X鬼笔环肽免疫荧光染色检测各组细胞表面积;RT-qPCR检测各组细胞中肥大相关基因(ANP、BNP、NFATc1)的mRNA表达;试剂盒检测各组细胞中MDA、GSH、SOD、Fe^(2+)水平,DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞中ROS含量;Western Blot检测各组细胞核Nrf2、HO-1、Gpx4、xCT蛋白表达。结果:木犀草素50μmol/L对AngⅡ处理的细胞活力无明显影响,经100μmol/L木犀草素处理的细胞活力显著降低(P<0.05),故采用25、50μmol/L木犀草素研究其抗心肌细胞肥大作用。与正常对照组比较,模型组心肌细胞表面积、ROS荧光强度、MDA、Fe^(2+)水平及ANP、BNP、NFATc1 mRNA表达显著升高,细胞中SOD、GSH水平及核Nrf2、Gpx4、xCT、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素25、50μmol/L组心肌细胞表面积、ROS荧光强度、MDA、Fe^(2+)水平及ANP、BNP、NFATc1 mRNA表达显著降低,细胞中SOD、GSH水平及核Nrf2、Gpx4、xCT、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。Brusatol可逆转木犀草素的作用(P<0.05)。结论:木犀草素可抑制氧化应激,减轻AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大,其作用机制可能与增强Nrf2的核转录,激活Nrf2/Gpx4通路,抑制铁死亡有关。

血管紧张素受体拮抗剂治疗糖尿病肾病机制研究进展

糖尿病肾病(DN)是引起终末期肾病(ESRD)的主要原因,几乎占ESRD的40%以上,也是糖尿病患者的主要死亡原因。DN发病确切的机制尚未完全清楚,以高糖为基础的病理生理改变是DN发生发展的基础,主要涉及遗传因素、糖代谢紊乱、血流动力学改变、炎性递质、细胞因子、免疫等多种因素。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是核受体超家族中配体激活的转录因子之一,其亚型PPARγ在脂质代谢、胰岛素敏感性、炎性反应和血压调控等方面具有重要作用。Toll样受体(TLRs)是介导免疫和炎性反应的主体。血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)是一类作用于肾素-血管紧张素系统(RAS)的降压药物,不仅可以从血流动力学上治疗DN的发生发展,还在调节代谢紊乱、抑制炎症及免疫中起到重要作用。本文对血管紧张素受体拮抗剂治疗DN机制研究进展进行综述。