血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控体外培养的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达

目的利用强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统,对体外培养血管平滑肌细胞的血管紧张素Ⅱ2型受体表达进行有效调控,在此基础上对基质金属蛋白酶2的表达受血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法建立强力霉素可调控表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因的双重稳定大鼠血管平滑肌细胞。观察该血管平滑肌细胞中血管紧张素Ⅱ2型受体受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ及其1型、2型其受体拮抗剂干预上述细胞后基质金属蛋白酶2的表达情况变化。结果强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统可成功介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因在原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的表达,该表达受到强力霉素给予/去除的紧密调控;强力霉素干预可在48h内迅速诱导该血管平滑肌细胞表达血管紧张素Ⅱ2型受体,该表达在强力霉素干预后72h进一步增强(P<0.01)。血管紧张素Ⅱ2型受体基因的可调控表达抑制由于血管紧张素Ⅱ干预后引起的基质金属蛋白酶2表达的增强(P<0.01)。这一作用被血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂进一步增强(P<0.01);而被加入2型受体拮抗剂干预取消;同时给予上述两种拮抗剂时基质金属蛋白酶2的表达与基础状态时的情况一致。结论血管紧张素Ⅱ干预增强基质金属蛋白酶2的表达,该作用是通过血管紧张素Ⅱ1型受体介导的;经强力霉素诱导表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因可以明显抑制这一生物学作用,说明血管紧张素Ⅱ2型受体基因经诱导后表达可以有效调控血管平滑肌细胞细胞外基质合成和降解。

腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响 ,用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2R) ,体外转染VSMC ,用流式细胞仪检测AT2R转染表达率 ,RT PCR方法检测AT2RmRNA表达 ,VSMC增殖用MTT比色法和 5 溴脲苷 (BrdU)掺入法检测 ,迁移用改良Boyden趋化小室法检测 ,细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测。结果表明 ,AdCMV AT2R转染后 ,VSMC表达率为 89.5 1% ;AT2R峰值表达时 ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 6 1.4%和 5 1.6 % (P <0 .0 1) ,VSMC的跨膜迁移数减少 6 2 .2 % (P <0 .0 5 ) ,细胞凋亡增加约 3.2倍 ,bax表达增加 76 .3% (P <0 .0 5 )。提示AT2R表达可介导抑制VSMC的增殖和迁移 。

血管紧张素Ⅱ2型受体基因重组腺病毒简便快速的构建方法

目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目的基因的重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad AT2R。用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有GFP报告基因,对病毒滴度进行监测。结果:PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因AT2R,滴度为1.5×1012pfu/ml。结论:细菌内同源重组法构建腺病毒比传统的细胞内同源重组法具有成功率高、方法简便、快捷和实验周期短的优点。AT2R基因重组腺病毒的成功构建为进一步实验研究奠定了基础。

血管紧张素Ⅱ2型受体对AngⅡ诱导成年大鼠心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype2 receptors,AT2)在成年心肌成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子α(α-TNF)和白介素1β(IL-1β)中的作用,明确AT2受体和AT1受体作用的差异。方法差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,将细胞分为4组进行药物干预:对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、AngⅡ+氯沙坦(losartan)组、AngⅡ+PD123319组,应用放射免疫法检测各组细胞分泌α-TNF和IL-1β的水平。结果AngⅡ诱导使心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β明显增加。与AngⅡ组相比,α-TNF在AT1受体阻断后下调了58.7%(P<0.05),AT2受体阻断后下调了65.9%(P<0.05);IL-1β在AT1受体阻断后下调了69.1%(P<0.05),AT2受体阻断后下调了78.7%(P<0.05)。结论AT2受体参与介导心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β。

血管紧张素Ⅱ2型受体自身抗体与血压水平及肾功能的关系

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体自身抗体(抗 AT_2R)与血压水平及肾功能的关系。方法采用横断面研究方法,从门诊及体检人群中随机调查138例病人作为研究对象。根据血压水平按 JNC-7标准将其分为3组:正常血压组(≤120/80 mmHg,31例)、高血压前期组(120～139/80～89 mmHg,39例)、高血压组(≥140/90mmHg,68例)。通过问卷调查及体检获取一般资料,用酶联免疫吸附技术(ELISA)检测外周抗 AT_2R水平,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及内皮素1(ET-1)水平,并检测血脂、血糖、肾功能等。结果①3组人群外周血抗 AT_2R 水平有明显差异(P<0.01),且随血压水平升高而降低;抗 AT_2R 水平与收缩压、舒张压、平均动脉压呈负相关(r=-0.900,P<0.01;r=-0.766,P<0.01;r=-0.666,P<0.01);②3组人群血尿酸、血肌酐水平有显著差别(P<0.05),抗 AT_2R 与其均呈负相关(r=-0.295,P<0.01;r=-0.361,P<0.05);③TNF-α、ET-1水平在3组间有差异显著(P<0.01),抗 AT_2R 与其均呈负相关(r=-0.791,P<0.01;r=-0.795,P<0.01)。④多元线性回归分析显示,年龄、TNF-α、ET-1及抗 AT_2R 是平均动脉压的独立影响因素(P 均<0.05);TNF-α、ET-1及抗AT_2R 是收缩压的独立影响因素(P 均<0.05);年龄、TNF-α、ET-1及抗 AT_2R 是舒张压的独立影响因素。结论抗 AT_2R 与血压水平呈明显负相关,并与外周血 TNF-α、ET-1水平变化有关;提示抗 AT_2R 可能在高血压及其相关肾功能损害过程中起一定作用。

球囊损伤大鼠主动脉内皮后血管紧张素Ⅱ2型受体的表达及瑞舒伐他汀的干预作用

目的通过观察血管内皮损伤后血管紧张素Ⅱ2型受体表达的变化及瑞舒伐他汀对其表达的影响,探讨血管紧张素Ⅱ2型受体在再狭窄中的作用。方法建立球囊损伤大鼠主动脉内皮模型,并将大鼠随机分为对照组、手术组和瑞舒伐他汀组,每组分别于术后14天、28天取主动脉组织,并行HE染色观察血管内皮厚度的变化,用逆转录聚合酶链反应检测主动脉组织血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA的表达,免疫组织化学法检测主动脉组织血管紧张素Ⅱ2型受体蛋白的表达。结果大鼠主动脉球囊损伤术后14天及28天血管内皮较对照组显著增厚(P<0.01),瑞舒伐他汀治疗14天及28天大鼠主动脉内膜增生较手术组明显减轻。术后14天及28天,手术组血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白表达较对照组显著升高(P<0.05),瑞舒伐他汀组血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白表达较手术组增加(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可抑制大鼠主动脉内皮损伤后的血管增生,并上调血管内皮血管紧张素Ⅱ2型受体的表达。

血管紧张素Ⅱ2型受体的功能及其信号转导

血管紧张素 2型受体 (AT2 )的生理功能及其信号转导机制 ,过去所知甚少 ,并存在错误认识。近年来对 AT2的研究进展很快 ,对其功能和信号转导机制又有新的发现和认识。

糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ2型受体及Ⅳ型胶原mRNA表达初步研究

研究糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ 2型受体及Ⅳ型胶原的mRNA表达。方法 :大鼠随机分成两组 :单肾切组、糖尿病组。实验第 8周 ,应用RT -PCR检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2 )及Ⅳ型胶原mRNA表达。同时用放免法检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ含量。结果 :糖尿病组大鼠尿蛋白排泄率 (t=9.32 ,P <0 .0 1)、肾皮质血管紧张素Ⅱ水平 (t=2 .2 7,P <0 .0 5 )及Ⅳ型胶原mRNA表达 (t =3.71,P <0 .0 1)均较单肾切组明显升高 ;而AT2 的mRNA水平却下降 (t=2 .35 ,P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病肾组织AT2 受体mRNA表达的下降及Ⅳ型胶原表达的增加参与了糖尿病肾病的发生、发展。

宁夏回族人群血管紧张素Ⅱ2型受体基因C3123A多态性与原发性高血压的关系

目的研究宁夏地区回族人群原发性高血压(essential hypertension,EH)与血管紧张素Ⅱ2型受体(angiogenesisⅡtype 2 receptor,AT2R)基因C3123A多态性的关系。方法选取宁夏地区回族EH患者133例和血压正常者105例分别作为病例组(EH组)和对照组(NT组),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对以上人群的外周血白细胞DNA进行AT2R(C3123A)的基因多态性检测,以分析EH组和NT组基因型和等位基因的频率分布及其与EH的关系。结果女性:EH组CC、AC、AA基因型频率(分别为32.9%、57.0%、10.1%)与NT组(分别为36.0%、60.0%和4.0%)相比差异无统计学意义(P>0.05),等位基因频率(C:61.4%;A:38.6%)与NT组(分别为66.0%和34.0%)相比差异无统计学意义(P>0.05);男性:等位基因频率(C:81.5%;A:18.5%)与NT组(分别为83.6%和16.4%)相比差异也无统计学意义(P>0.05)。二元逐步logistic回归显示女性中体质指数、三酰甘油、肌酐增高为EH的危险因素,空腹血糖为保护因素;男性中体质指数、尿素氮增高为EH的危险因素,空腹血糖为保护因素。结论 AT2R基因C3123A多态位点分子变异与宁夏回族EH患者易感无明显相关性。

血管紧张素Ⅱ2型受体与缺血性脑卒中的研究进展

脑卒中是一种神经血管疾病,是导致长期残疾和死亡的首要病因。研究发现,血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)可能参与了缺血性脑损伤及认知功能障碍过程,它们影响着正常的神经可塑性和学习记忆等认知功能。近年来,AT2R在大脑中的调节功能相关研究日益增多,本文对脑组织中AT2R活化在缺血性脑卒中的作用及调节机制相关进展进行综述。

腺病毒介导血管平滑肌细胞转染表达血管紧张素Ⅱ2型受体的研究

目的 体外培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)并以腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2 R)。方法 取大鼠主动脉血管 ,以常规组织块贴壁法培养VSMC ;用同源重组方法构建带AT2 R基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV AT2 R) ,并加以鉴定、扩增 ,以制取高滴度AdCMV AT2 R转染液 ,体外转染VSMC ;用RT PCR方法检测AT2 RmRNA表达 ,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2 R蛋白表达 ,流式细胞仪检测AT2 R表达率 ,同时检测AT1R的表达变化。结果 构建的AdCMV AT2 R体外转染培养VSMC表达率为89.5 1%。以免疫组化、免疫印迹和RT PCR检测AT2 R表明 ,转染后AT2 R表达明显增强 ,并随表达时间延长而增加 ,48小时达峰值。AT2 R转染表达不影响AT1R表达。结论 腺病毒载体可较高效率介导AT2 R在体外培养的VSMC转染表达 ,AT1R表达不受其影响。转染表达AT2 R的VSMC可作为研究AngⅡ对其增殖。

血管紧张素Ⅱ2型受体活化促进缺氧/复氧损伤PC12细胞的生长

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)活化对缺氧/复氧(H/R)损伤PC12细胞生长的影响。方法 PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株,具有神经内分泌细胞的一般特征。将PC12细胞用连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)处理后复制H/R损伤的神经细胞模型;H/R损伤PC12细胞分别予以AT2R拮抗剂(PD123319)、AT2R激动剂(CGP42112)进行处理,采用MTT法观察细胞存活率的变化;以逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化。结果 PC12细胞经40mmol/LNa_2S_2O_4处理1 h后,MTT法检测的细胞存活率约为55~60%,提示复制H/R损伤模型成功;H/R损伤PC12细胞经CGP42112处理后,细胞存活率显著增高,而Bax mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;而PD123319处理后,细胞存活率显著下降,Bax mRNA表达上调,Bcl-2 mRNA表达则下调。结论 AT2R活化可改善H/R损伤的PC12细胞的生长,其机理可能与其上调Bcl-2/Bax的比值有关。

血管紧张素Ⅱ2型受体在心血管系统的研究进展

肾素血管紧张素系统在维持水、电解质平衡,调节血压中起着关键的作用,而血管紧张素Ⅱ作为肾素血管紧张素系统中最重要的介质,对调节心血管系统的血流动力学和结构至关重要。血管紧张素Ⅱ与其特异性受体(1型受体和2型受体)结合而发挥生物作用。目前已广泛认为其大部分心血管作用是通过1型受体介导的,对于2型受体目前了解较少。现就近年来对2型受体在心血管系统中的研究进展作一综述。

人肾间质纤维母细胞培养及血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达

目的 :体外培养人肾间质纤维母细胞 (hRIF)并用腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体(AT2R)。方法 :用肾穿刺活检法取慢性肾小球肾炎病人肾组织 ,以常规组织块贴壁法培养hRIF ;构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,体外转染hRIF ;用RT -PCR方法检测AT2RmRNA表达 ,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2R蛋白表达 ,流式细胞仪检测AT2R表达率 ,同时检测AT1R的表达变化。结果 :用肾活检组织成功培养出hRIF。构建的AdCMV -AT2R体外转染培养hRIF表达率为 90 5 7%。以免疫组化、免疫印迹和RT -PCR检测AT2R表明 ,转染后AT2R表达明显增强 ,并随表达时间延长而增加 ,48h为表达峰值。AT2R转染表达不影响AT1R表达。结论 :腺病毒载体可较高效率介导AT2R在hRIF的转染表达 ,ATIR表达不受其影响。转染表达AT2R的hRIF可作为研究AngⅡ在肾间质纤维化中作用的良好细胞模型。

血管紧张素Ⅱ2型受体基因多态性与男性原发性高血压相关

目的研究血管紧张素Ⅱ2型受体(AGTR2)基因1675A/G多态性与男性原发性高血压相关性。方法随机选取山东省济宁地区男性原发性高血压患者113例和体检正常的男性101例作对照。收集临床资料。提取全血基因组DNA,采用多聚酶链式反应(PCR)、高分辨率融解曲线(HRM)、基因测序方法测定AGTR2基因1675A/G多态性。结果AA、GG基因型在男性EH组的分布为56(49.6%)、57(50.4%),显著高于正常对照组的32(31.7%)、69(68.3%)(P<0.05)。等位基因频率在高血压组中分别为A:112(49.6%)和G:114(50.4%),显著高于正常对照组的A:64(31.7%)和G:138(68.3%)(P<0.05)。结论AGTR2基因1675A/G多态性可能与山东省济宁地区男性原发性高血压有明显相关性。

血管紧张素Ⅱ2型受体与血管内皮细胞相关炎症因子表达的相关性研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2R)与血管内皮细胞相关炎症因子的关系。方法将原代人脐静脉血管内皮细胞分为空白对照组、AngⅡ低浓度组(0.1μmol/L)、中浓度组(1μmol/L)、高浓度组(10μmol/L),24小时培养后检测趋化因子(MCP)、生长因子(VEGF)的表达水平,观察细胞表面黏附分子(ICAM)的表达。分别在低、中、高浓度组中加入0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L的替米沙坦,培养24小时,再次检测MCP、VEGF和ICAM的表达。结果随着AngⅡ培养基浓度的升高,MCP、ICAM、VEG F水平均呈升高趋势,加入替米沙坦浓度后这3项水平逐渐下降;四组间比较,差异均有统计学意义;未加替米沙坦前空白对照组与低浓度组比较,这3项指标差异均无统计学意义,加入替米沙坦后差异均有统计学意义。血管紧张素与MCP、ICAM、VEGF之间存在正相关(r值分别为:0.465、0.438、0.458,P<0.01)。结论血管紧张素Ⅱ2型受体可上调血管内皮细胞相关炎症因子的表达,且呈浓度依赖性。

血管紧张素Ⅱ2型受体在心血管系统的研究进展

肾素一血管紧张素系统（RAS）是心血管活动重要的体液调节系统,在维持水、电解质平衡及调节血压中起着关键作用。血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）是该系统中最重要的介质,通过与其特异性受体结合而产生相应的生理效应。在心血管系统中AngⅡ受体主要包括AT1R和AT2R两种亚型。

血管紧张素Ⅱ2型受体基因A1675G多态性与脑梗死的关系

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因A1675G多态性与脑梗死的关系。方法采用病例对照研究,结合套式等位基因特异性引物(NASP)-PCR技术检测180例脑梗死患者和130名健康人(正常对照组)的AT2R基因1675位点的基因型和等位基因。比较和分析脑梗死组与正常对照组间该基因型及等位基因的分布频率差异,并运用Logistic回归分析脑梗死的危险因素。结果脑梗死组AT2R基因1675位点G等位基因频率(29.2%)明显低于正常对照组(51.8%)(P<0.05);男性对照亚组的G等位基因频率(48.8%)低于女性对照亚组(57.6%),但差异无统计学意义。男性脑梗死亚组G等位基因频率(21.4%)明显低于女性脑梗死亚组(43.6%)和男性对照亚组(48.8%)(均P<0.05)。女性脑梗死亚组G等位基因频率显著低于女性对照亚组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,G等位基因降低脑梗死的发生概率(OR=0.38,P<0.05)。结论 AT2R基因A1675G多态性对脑梗死的发病有保护作用,并且对男性脑梗死发病具有更好的保护作用。

血管紧张素Ⅱ2型受体抑制小鼠骨髓源树突状细胞的成熟及活化

目的研究血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）体外基因转染对小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）成熟活化及部分免疫功能的影响,探讨AT2R参与动脉粥样硬化斑块进展的免疫机制。方法取C57BL/6J小鼠骨髓,经分离、纯化、分化为BMDC,先转染带有绿色荧光蛋白报告基因的AT2R基因重组腺病毒载体（p Ad CMV/AT2R）或空病毒载体（p Ad-GFP）,再用脂多糖刺激为成熟BMDC,分PBS对照组、脂多糖组、p Ad-GFP组、p Ad CMV/AT2R组及p Ad CMV/AT2R＋PD123319组。采用RT-PCR、免疫荧光和激光共聚焦技术方法检测BMDC中AT2R mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测BMDC表面标志CD86和MHCⅡ的表达率;液体闪烁计数检测BMDC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;ELISA法检测培养基中白细胞介素12（IL-12）和γ干扰素（IFNγ）的水平。结果 p Ad CMV/AT2R转染BMDC后48~72 h有AT2R mRNA表达,在激光共聚焦显微镜下胞浆及胞核有绿色荧光表达;同时在胞浆有红色荧光AT2R表达。与PBS对照组比较,p Ad CMV/AT2R组和p Ad CMV/AT2R＋PD123319组CD86和MHCⅡ的表达、同源T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌量都显著升高（P〈0.01）,但p Ad CMV/AT2R组与脂多糖组比较显著降低（P〈0.01或P〈0.05）,而p Ad CMV/AT2R＋PD123319组与脂多糖组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论体外基因转染BMDC能表达AT2R,AT2R能抑制BMDC成熟诱导的局部免疫炎性反应,且AT2R拮抗剂能阻断此效应,推测AT2R可能介导稳定斑块及抑制动脉粥样斑块进展的作用。