加味柴胡疏肝散及其拆方对心肌缺血合并抑郁症大鼠ACE2-Ang(Ⅰ-Ⅶ)-MasR轴的影响

目的:通过观察加味柴胡疏肝散及其拆方对高血脂状态心肌缺血合并抑郁症大鼠血管紧张素转化酶2(ACE2)-血管紧张素(Ⅰ-Ⅶ)[Ang(Ⅰ-Ⅶ)]-线粒体组装受体(MasR)轴的影响,探讨其防治心肌缺血合并抑郁症的可能作用机制。方法:108只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,加味柴胡疏肝散组(11.7 g·kg^(-1)),拆方祛瘀化痰组(4.05 g·kg^(-1)),拆方疏肝行气组(3.15 g·kg^(-1)),拆方健脾养血组(4.5 g·kg^(-1)),氟西汀组(0.0018 g·kg^(-1)),曲美他嗪组(0.0054 g·kg^(-1)),辛伐他汀组(0.0018 g·kg^(-1)),每组12只。除正常组外,模型组及各药物组皆采用高脂饮食联合注射异丙肾上腺素(ISO)及慢性不可预见性温和应激(CUMS)方式建立高血脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠模型,造模共8周。造模的第1天至结束各药物组大鼠予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组灌服等量生理盐水。造模结束后旷场实验、强迫游泳实验观察各组大鼠行为学变化;心脏超声测量左室缩短分数(LVFS),左室射血分数(LVEF)观察大鼠心功能变化;酶标仪检测大鼠血清中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心脏组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),ACE2,Ang(Ⅰ-Ⅶ)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马、心脏组织ACE2,MasR mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验中心区域运动时间和距离及平均速度显著降低(P<0.01),强迫游泳实验不动时间显著增加(P<0.01),LVFS,LVEF显著降低(P<0.01),心脏组织炎性渗出及纤维排序紊乱,血清TC,LDL-C,AngⅡ,ACE2,Ang(Ⅰ-Ⅶ)水平显著升高,HDL-C水平显著降低(P<0.01),海马与心脏ACE2,海马MasR基因及蛋白表达降低,心脏MasR mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,加味柴胡疏肝散组旷场实验中心区域运动时间和距离及平均速度较模型组显著增加(P<0.01),强迫游泳实验不动时间显著降低(P<0.01),LVFS,LVEF显著升高(P<0.01),心脏损伤减少,血清TC,LDL-C,AngⅡ,ACE2,Ang(Ⅰ-Ⅶ)水平显著降低,HDL-C水平显著升高(P<0.01),海马与心脏ACE2,海马MasR基因及蛋白表达明显升高,心脏MasR基因及蛋白表达显著降低(P<0.01);各拆方组一定程度上改善上述指标(P<0.05,P<0.01),但全方组效果最佳。结论:加味柴胡疏肝散及其拆方具有抗抑郁、改善心肌损伤、降血脂作用,方中祛瘀化痰药、疏肝行气药、健脾养血药存在协同作用,使全方效果优于各拆方药物,其机制可能与激活ACE2-Ang(Ⅰ-Ⅶ)-MasR轴有关。

补中益气汤基于ACE2-Ang(1-7)-Mas轴减轻CIH诱发的肺脏炎症损伤

目的:探讨补中益气汤对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肺脏炎症的干预作用,并初步阐明其作用机制。方法:将40只健康的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成:常氧组、模型组(CIH)和补中益气汤低、中、高剂量组。常氧组暴露于常氧环境中,模型组与补中益气汤低、中、高剂量组暴露于间歇性低氧环境中。其中,补中益气汤低、中、高剂量每日放入低氧舱前30 min给予补中益气汤灌胃(低、中、高剂量分别为8.1、16.2、32.4 g·kg^(-1)·d-1),而模型组与常氧组给予同等体积生理盐水。造模5周后,应用EMKA型动物肺功能仪检测小鼠肺功能,肺功能检测完毕后取材。应用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺脏的病理学改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肺组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测IL-6、IL-8、TNF-α、血管紧张素转化酶2(ACE2)、线粒体组装受体(Mas)蛋白的表达。结果:与常氧组比较,模型组小鼠肺功能出现明显异常(P<0.05,P<0.01),肺组织出现肺泡壁增厚、炎性细胞浸润等改变;血清中IL-6、IL-8、TNF-α和肺组织中AngⅡ的含量显著上升(P<0.01),Ang(1-7)含量显著下降(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α蛋白表达显著升高、ACE2、Mas蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组小鼠肺功能有所改善(P<0.05,P<0.01),肺脏HE染色可见肺泡壁厚度大致正常,炎性细胞浸润减少;免疫组化和Western blot检测炎症相关蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),ACE2、Mas蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴抑制炎症反应改善CIH暴露后小鼠的肺脏损伤。