大鼠血管纹边缘细胞的原代培养及IsK的表达

目的 为进一步研究内淋巴生成的可能机制以及影响因素,提供可供研究的大量实验材料—边缘细胞(marginal cell, MC),建立大鼠来源的MC 的原代培养体系。方法 利用大鼠耳蜗的侧壁组织作为组织块种植培养。从第2天开始每日倒置显微镜观察,选特征性的表现照相。经选择性消化、差异性贴壁等方法抑制FLC 生长,纯化MC。经过MC 的形态、生长特征的观察;细胞角蛋白18、波形蛋白的免疫细胞化学;扫描及透射电镜;RT-PCR 检测IsK 蛋白mRNA 的表达等方法鉴定MC。 结果 新鲜组织块淡黄、透明,可见丰富的毛细血管网;但血管纹结构致密,倒置显微镜下不易分辨不同细胞的轮廓。MC 从组织块迁移出来多在培养第2 天,呈多角形外观、核大而圆、颜色较暗淡,细胞之间连接紧密,形成上皮单层时呈“铺路石样”外观。FLC 呈梭形,呈“鱼群样”包绕MC 生长,增殖速度快于MC。由纯化的MC 构成的上皮单层表面可见由成百上千个MC 包绕液体而成的dome,这提示MC 净向的跨上皮转运功能。原代MC 表达细胞角蛋白和波形蛋白,微绒毛丰富、细胞间连接提示其上皮起源。IsK 蛋白mRNA 的表达证实了培养上皮细胞的MC 起源。结论 离体培养的耳蜗边缘细胞具有与其在体相同的形态及生理特征。MC 原代培养体系的建立,可为进一步探讨边缘细胞的生?

肾上腺素β受体和胆碱能M受体对边缘细胞钾离子转运的调控

耳蜗血管纹边缘细胞向内淋巴转运钾离子对耳蜗内淋巴的生成,电化学特征的维持起到直接作用。钾离子经边缘细胞转运的过程除了受细胞内外离子浓度、膜电压的调控外还受细胞膜受体及细胞内信号转导系统调节。目前研究发现肾上腺素β受体促进边缘细胞的钾离子转运;胆碱能M受体则抑制边缘细胞的钾离子转运。肾上腺素β受体和胆碱能M受体对边缘细胞钾离子转运的调控作用具有重要的临床意义。

新生小鼠膜迷路耳蜗外侧壁的组织培养

目的培养小鼠耳蜗螺旋韧带/血管纹来源的细胞,为体外研究提供细胞模型。方法显微解剖新生小鼠耳蜗螺旋韧带/血管纹组织,组织块外植培养,胰蛋白酶消化分离细胞,免疫组织化学染色,原位透射电镜观察鉴别细胞的来源。结果自外植耳蜗螺旋韧带/血管纹组织生长出上皮样细胞及成纤维样细胞。前者呈典型的上皮细胞形态,表达细胞角蛋白,并具血管纹边缘细胞的超微结构特征。后者呈成纤维细胞形态,表达波形蛋白,具有耳蜗螺旋韧带成纤维细胞的超微结构特征。结论培养出小鼠耳蜗血管纹边缘细胞及螺旋韧带成纤维细胞来源的原代上皮细胞及传代成纤维细胞,为体外研究提供了细胞模型及方法。

前庭学

大鼠血管纹边缘细胞的原代培养及IsK的表达,二苯三硝基苯肼对耳蜗微循环的影响,冷热刺激先后顺序对眼震最大慢相角速度的影响，经颅超声对椎一基底动脉供血不足的诊断价值,高压氧治疗良性阵发性位置性眩晕33例,良性阵发性位置性眩晕的诊治.