人基质蛋白酶2(MMP-2)血红素结合蛋白样结构域原核表达、复性及生物学活性验证

用RT-PCR从人神经胶质瘤U87细胞扩增人基质金属蛋白酶-2(MMP-2)血红素结合蛋白样结构域(PEX)基因,克隆到pMD18-T载体然后测序;将PEX定向克隆到PET-25b(+)中构建原核表达载体PET-PEX,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达产生表达量近40%的包涵体蛋白,表达蛋白分子量大小约28.0KD,与预期大小相符。包涵体经优化洗涤,8 mol/L尿素变性,采用透析法进行复性。鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验显示复性后的PEX蛋白能显著抑制鸡胚新生血管生成(P<0.05),并且其抑制作用表现出一定的剂量依赖性。

抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体:运动防治心血管疾病的重要靶点

心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)是我国居民死亡的首要原因,严重影响患者的生存质量。CVD病理机制较为复杂,以慢性低度炎症为主要特征。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体是调控炎症反应的关键因子,在固有免疫应答中发挥重要作用。其异常活化诱导的过度炎症反应和细胞焦亡与动脉粥样硬化、心肌梗死和糖尿病心肌病等多种CVD发生发展密切相关。近年来研究表明,运动作为一种安全有效的非药物干预手段,可通过抑制NLRP3炎症小体活化来减轻心血管炎症反应和细胞焦亡,从而在CVD防治中发挥积极作用。但当前对于运动介导NLRP3炎症小体防治CVD的理论及机制仍缺乏系统阐释。因此,本文综述了NLRP3炎症小体与CVD的关系,探讨了不同运动类型、强度和持续时间对NLRP3炎症小体活化的影响,并总结分析以NLRP3炎症小体为靶点进行运动干预防治CVD所涉及的相关信号通路,以期为运动防治CVD提供新的思路和参考。

外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/白细胞介素-1β、白细胞介素-18通路与重症肺炎支原体肺炎患儿预后关系及应用价值

目的:探讨外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)通路与儿童重症肺炎支原体肺炎(SMPP)预后的关系及应用价值。方法:前瞻性选取SMPP患儿113例,根据30 d预后分为预后良好组(81例)与预后不良组(32例),比较两组一般资料及外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平。Pearson法分析外周血NLRP3、IL-1β、IL-18与急性生理与慢性健康评价系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分的关系;Logistic回归分析SMMP患儿预后不良的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价外周血NLRP3、IL-1β、IL-18对SMMP患儿预后的预测价值。结果:预后不良组患儿发病至入院时间>3 d比例、胸腔积液比例、APACHEⅡ评分以及外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平高于预后良好组(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平与APACHEⅡ评分呈正相关(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18预测SMPP患儿预后的最佳截断值分别为738.62、68.44、269.27 pg/ml,此时三者的曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.806、0.817,敏感度分别为87.50%、84.37%、71.87%,特异度分别为64.20%、71.60%、77.78%。在校正其他因素前后,外周血NLRP3、IL-1β、IL-18高表达是SMPP患儿预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18联合预测SMPP患儿预后不良的AUC为0.923,敏感度为84.37%,特异度为90.12%,三项联合预测价值较单项指标更高(均P<0.05)。结论:外周血NLRP3/IL-1β、IL-18通路与SMPP患儿预后关系密切,NLRP3、IL-1β、IL-18高表达是患儿预后的独立危险因素,三项联合预测SMMP患儿预后不良的效能较高,可为临床降低预后不良风险提供帮助。

2型糖尿病患者血清微小RNA-155和核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3水平变化及对颈动脉粥样硬化的诊断价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-155、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及其对2型糖尿病(T_(2)DM)患者颈动脉粥样硬化(CAS)的诊断价值。方法选取2021年1月至2023年1月四川大学华西医院收治的T_(2)DM患者142例。根据是否存在CAS分为CAS组(72例)和非CAS组(70例)。收集和比较2组患者的一般资料,检测和比较2组患者血清miR-155和NLRP3水平。采用Pearson相关性分析方法分析T_(2)DM患者血清miR-155与NLRP3水平的相关性。采用多因素Logistic回归方法分析T_(2)DM患者CAS的影响因素。采用受试者工作特征曲线分析血清miR-155、NLRP3水平对T_(2)DM患者CAS的诊断价值。结果CAS组T_(2)DM病程长于非CAS组,吸烟史比例、糖化血红蛋白、稳态模型胰岛素抵抗指数、miR-155、NLRP3均高于非CAS组(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示T_(2)DM患者血清miR-155与NLRP3水平呈正相关(r=0.765,P<0.001)。多因素Logistic回归模型结果显示T_(2)DM病程延长、吸烟史和糖化血红蛋白、稳态模型胰岛素抵抗指数、miR-155、NLRP3升高是影响T_(2)DM患者CAS的独立危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示血清miR-155、NLRP3水平二者联合诊断T_(2)DM患者CAS的曲线下面积大于血清miR-155、NLRP3水平单独诊断(0.900比0.791、0.799,Z=3.436、3.381,均P=0.001)。结论血清miR-155、NLRP3水平升高与T_(2)DM患者CAS发生密切相关,血清miR-155、NLRP3水平联合对T_(2)DM患者CAS的诊断价值较高。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

白内障超声乳化人工晶体植入术对患者泪液叉头框蛋白O3、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1表达的影响及与术后干眼症的关系

目的探讨白内障超声乳化人工晶体植入术患者泪液中叉头框蛋白O3(FOXO3)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(Nod-1)表达及与术后干眼症的关系。方法选取2022年3月至2023年8月接受白内障超声乳化人工晶体植入术的患者96例,均单眼行手术,以术眼为观察组(n=96),非术眼为对照组(n=96)。比较观察组手术前后与对照组泪液中FOXO3、Nod-1的变化情况。根据术后1个月术眼是否出现干眼症分为干眼组34例与非干眼组62例,比较干眼组与非干眼组临床资料及泪液中FOXO3、Nod-1表达水平,分析影响患者术后发生干眼症的危险因素及FOXO3、Nod-1水平检测对术后发生干眼症的预测价值。结果术后观察组FOXO3水平较术前降低且低于对照组,Nod-1水平较术前升高且高于对照组(P<0.05)。干眼组与非干眼组术后FOXO3水平均较术前降低,Nod-1水平均较术前升高,且干眼组术后FOXO3水平低于非干眼组,Nod-1水平高于非干眼组(P<0.05)。干眼组中糖尿病、睑板腺功能障碍患者占比高于非干眼组(P<0.05)。糖尿病、睑板腺功能障碍、FOXO3、Nod-1水平是白内障超声乳化人工晶体植入术后发生干眼症的独立影响因素(P<0.05,P<0.01)。FOXO3、Nod-1及联合检测对患者术后发生干眼症预测的曲线下面积分别为0.717、0.764、0.877。结论白内障超声乳化人工晶体植入术后泪液中FOXO3低表达、Nod-1高表达是白内障患者术后发生干眼症的独立危险因素,检测FOXO3、Nod-1的表达水平,对术后是否发生干眼症具有一定的预测价值。

高良姜素调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/白细胞介素-1β信号通路对哮喘幼年小鼠气道炎症的影响

目的:探讨高良姜素(GA)对支气管哮喘(BA)幼年小鼠气道炎症及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响。方法:构建BA幼年小鼠模型,将所有实验小鼠分为对照组、BA组和GA低、中、高剂量组(GA-L、GA-M、GA-H组)及GA高剂量+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(GA-H+Nig组)。检测各组小鼠肺泡灌洗液中炎症细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)计数、中性粒细胞(NEU)计数、淋巴细胞(LYM)计数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠肺泡灌洗液中炎症因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-17、IL-6水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠支气管病理形态改变;高碘酸-无色品红(PAS)染色观察各组小鼠气道上皮杯状细胞变化;Western blot法检测NLRP3、IL-1β蛋白表达情况。结果:与对照组比较,BA组幼年小鼠肺组织异常,支气管管壁结构破坏,大量炎症细胞浸润,气道杯状细胞及黏液明显增多,肺组织蓝紫色明显,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM增多,IL-17、IL-6水平上升,NLRP3、IL-1β表达上升,TGF-β1、IL-10水平下降(P<0.05);与BA组相比,GA-L、GA-M、GA-H组幼年小鼠肺组织和支气管管壁损伤逐渐减轻,炎症细胞浸润减少,气道上皮杯状细胞及黏液减少,肺组织蓝紫色减少,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM减少,IL-17、IL-6水平下降,NLRP3、IL-1β表达下降,TGF-β1、IL-10水平上升(P<0.05);与GA-H组相比,GA-H+Nig组幼年小鼠肺组织和支气管管壁损伤加重,气道上皮杯状细胞及黏液增多,肺组织蓝紫色增多,炎症细胞总数、EOS、NEU、LYM增多,IL-17、IL-6水平上升,NLRP3、IL-1β表达上升,TGF-β1、IL-10水平下降(P<0.05)。结论:GA可以通过抑制NLRP3/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年小鼠的气道炎症反应。

血红素激活含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体诱导肾小管上皮细胞焦亡

目的研究血红素是否通过活化肾小管上皮细胞含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体引起焦亡而损伤肾脏功能。方法使用血红素处理人肾小管上皮HK-2细胞,通过扫描电镜观察细胞膜上是否有穿孔,免疫荧光染色检测焦亡执行蛋白消皮素D氨基端蛋白(GSDMD-N)的形成情况,明确血红素是否引起人肾小管上皮HK-2细胞焦亡。通过Western blot法检测NLRP3炎性体相关蛋白分子NLRP3、含胱天蛋白酶募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶l前体(pro-caspase-1)和剪切体(caspase-1 p20)、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)和IL-1β等确定血红素是否引起人肾小管上皮HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化;通过异体输血构建小鼠溶血模型在动物水平进一步验证溶血释放的血红素是否活化NLRP3炎性体而导致肾损伤。采集静脉血进行血涂片进行Wright-Giemsa染色光镜观察,分光光度计比色法检测游离血红蛋白;全自动生化分析仪检测血清尿素氮以及HE染色观察肾组织病变情况确定溶血模型建立是否成功;分离提取溶血小鼠肾小管上皮细胞,Western blot法检测NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1 p20、pro-IL-1β、IL-1β、GSDMD-N蛋白表达情况明确溶血模型中NLRP3炎性体的活化情况以及焦亡执行蛋白的表达。结果血红素造成肾小管上皮HK-2细胞损伤,细胞膜上出现小孔,焦亡执行蛋白GSDMD-N表达增高,HK-2细胞中NLRP3炎性体相关蛋白caspase-1 p20、IL-1β表达上调;溶血模型小鼠的肾脏功能受损,小鼠肾小管上皮细胞中NLRP3炎性体相关蛋白caspase-1 p20、IL-1β、GSDMD-N表达上调。结论血红素活化肾小管上皮细胞的NLRP3炎性体,诱导焦亡,进而导致肾功能损伤。

间充质干细胞中血红素加氧酶-1的过表达抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体活化改善大鼠急性肺损伤

目的探究过表达血红素加氧酶-1(HO-1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠急性肺损伤(ALI)的作用及其可能机制。方法将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、BMSCs-NC组和BMSCs-HO-1组,每组各10只。应用腹腔注射脂多糖(LPS)建立ALI大鼠模型。BMSCs-NC组大鼠尾静脉注射阴性对照BMSCs,BMSCs-HO-1组大鼠尾静脉注射过表达HO-1的BMSCs,其余组大鼠尾静脉注射生理盐水。检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平。采用苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织湿/干重比(W/D);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HO-1、表面活性蛋白C(SP-C)mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测HO-1、SP-C、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和cleaved-Caspase-1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、肺损伤评分及W/D均明显升高,肺组织中HO-1和SP-C mRNA、蛋白表达水平均明显降低,NLPR3、ASC和cleaved-Caspase-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组相比,BMSCs-NC组大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、肺损伤评分及W/D均明显升高,肺组织中HO-1和SP-C mRNA、蛋白表达水平均明显升高,NLPR3、ASC和cleaved-Caspase-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与BMSCs-NC组相比,BMSCs-HO-1组大鼠各项指标均得到进一步改善(P<0.05)。结论过表达HO-1的BMSCs可能通过抑制NLPR3炎症小体活化改善大鼠ALI。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3在阿尔茨海默病和血管性痴呆患者中的表达及相关因素研究

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）对痴呆发病的影响。方法 2014年1月~2015年10月,用RT-PCR方法检测16例阿尔茨海默病（AD）患者、22例血管性痴呆（VD）患者和20名年龄相似的健康体检者外周血单个核细胞中NLRP3 m RNA水平;ELISA法检测血清中白细胞介素（IL）-1β和IL-18蛋白水平;收集患者外周血白细胞计数（WBC）和血清总钙浓度等临床检测资料;将NLRP3 m RNA水平分别与IL-1β、IL-18、WBC和钙浓度进行单因素相关分析。结果 NLRP3 m RNA水平由高到低依次为AD组〉VD组〉健康组（q〉11.48,P〈0.05）;IL-1β水平AD组高于健康组（q=16.74,P〈0.05）,AD组与VD组、VD组与健康组无显著性差异（P〉0.05）;IL-18水平各组间均无显著性差异（P〉0.05）。AD组中,NLRP3 m RNA水平与IL-1β水平（r=0.64）、血清钙水平（r=0.58）呈正相关,与IL-18、WBC无相关性（P〉0.05）。结论 NLRP3炎症小体中相关蛋白或基因表达与AD的发病可能有较大关系,与VD的发病关系不大。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域3炎性小体与牙周炎

核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域(NLRP)3被激活后形成炎性小体,NLRP3炎性小体活化半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1并进一步活化白细胞介素(IL)-1β前体,促进IL-1β释放以介导病原微生物的清除及相关程序性细胞死亡。IL-1β表达过量会造成牙髓炎、根尖周炎、牙周炎、牙槽骨丧失和口腔黏膜疾病的进一步发展。龈下菌斑与牙周炎密切相关,在龈下菌斑密度较高时,NLRP3炎性小体表达降低,炎性因子分泌减少,宿主对细菌的抵抗及清除力降低,有利于细菌的继续生存与定植。在根尖周炎和牙周炎的骨质破坏过程中,NLRP3炎性小体作为胞壁酰二肽及其分解产物的受体参与骨质吸收。调控NLRP3炎性小体及其下游炎性因子的表达,可能成为牙周炎治疗的方向之一。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3水平与肺功能、病情程度和预后的关系

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平与肺功能、病情程度和预后的关系。方法选择邯郸市中心医院2018年1月至2019年6月收治的COPD患者102例为研究对象(观察组),另选择同期来院体检健康者40例作为对照组。根据预后情况将观察组患者又分为死亡组(n=37)和存活组(n=65)。观察组患者于入院第2天、对照组受试者于体检当日采用肺功能仪测定第一秒用力呼气容积(FEV_(1))占预计值(Pred)的百分比(FEV_(1)%/Pred)、FEV_(1)占用力肺活量(FVC)的百分比(FEV_(1)/FVC)。观察组患者于入院第2天清晨、对照组受试者于体检当日抽取空腹外周静脉血约5 mL,采用酶联免疫吸附试验法测定血清中NLRP3水平。结果观察组患者血清中NLRP3水平显著高于对照组,FEV_(1)%/Pred和FEV_(1)/FVC显著低于对照组(P<0.05)。随着COPD患者病情严重程度分级的增加,患者血清中NLRP3水平逐渐升高,FEV_(1)%/Pred、FEV_(1)/FVC逐渐降低,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者血清中NLRP3水平与FEV_(1)%/Pred和FEV_(1)/FVC均呈负相关(r=-0.661、-0.618,P<0.05)。死亡组患者血清中NLRP3水平显著高于存活组(P<0.05)。结论COPD患者血清中NLRP3水平高于健康人群,且随着病情的加重其水平呈上升趋势。NLRPS水平与COPD患者肺功能呈负相关关系。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。

Toll样受体与核苷酸结合寡聚化结构域蛋白在防御反应中的相互作用

哺乳动物具有两个微生物识别系统,一个系统是由Toll样受体(TLRs)的膜结合受体家族组成;另一个系统是由位于胞浆的核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族组成。入侵机体的微生物可能通过不同抗原激活多个模式识别受体,导致免疫反应的产生。本文将对TLRs及NODs信号通路在防御反应中的相互作用进行综述。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)在免疫代谢中的研究进展

固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1)和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRC3)是NLR家族中的关键成员,它们与免疫代谢之间的关联成为研究的新焦点。NLRP3的激活可促进炎性小体的组装,导致白细胞介素1β(IL-1β)的激活,进而引发炎症反应。NLRC3则能抑制核因子κB(NF-κB)和干扰素基因刺激物/TANK结合激酶1(STING/TBK1)信号通路的激活,以及炎性小体的形成,进而调控免疫反应。而NLRX1则通过调节Ⅰ型干扰素、NF-κB信号传导以及自噬等过程,对免疫应答进行精细调控。这些NLR成员不仅参与病原体的识别,更与免疫代谢的调控密切相关。对NLR家族的深入研究将有助于揭示免疫代谢的奥秘,为疾病的治疗提供新的思路。

富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响

目的 探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg),每组15只。连续给药28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;WB法检测视网膜TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠FBG[(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L]、血-视网膜屏障(BRB)通透性[(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP[(0.85±0.09)比(0.40±0.05)]、NLRP3[(0.93±0.10)比(0.48±0.07)]、IL-1β[(0.74±0.05)比(0.41±0.04)]、胱天蛋白酶-1(caspase-1)[(0.78±0.07)比(0.24±0.04)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm]显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠FBG[(20.85±3.45)mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L]、BRB通透性[(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%]、Bax、Bcl-2、TXNIP[(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)]、NLRP3[(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)]、IL-1β[(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)]、caspase-1[(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm]明显增加(P<0.05),视网膜水肿情况减轻,GCL细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论 富氢水可抑制新生血管形成,降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路的激活有关。

血清脂蛋白相关磷脂酶A2、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3与老年冠心病Syntax积分的相关性

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA_(2))与老年冠心病患者Syntax积分的相关性。方法选取2018年1月至2020年4月濮阳市人民医院收治的114例冠心病患者作为观察组,再选取同期在濮阳市人民医院接受体检的108例健康者作为对照组。比较两组血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平,比较Syntax积分及主要不良心血管事件(MACE)发生情况,比较不同Syntax积分及不同MACE发生情况患者的血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平,分析血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平与Syntax积分的相关性以及血清NLRP3、Lp-PLA_(2)联合检测对发生MACE的预测价值。结果观察组血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平高于对照组(P<0.05)。随着Syntax积分升高,血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平逐渐升高(P<0.05);血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平与Syntax积分呈正相关(P<0.05);发生MACE患者血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线显示血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平联合检测的AUC值大于任意单一检测(P<0.05)。结论冠心病患者血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平升高,其水平与病变严重程度密切相关。通过检测NLRP3、Lp-PLA_(2)水平可预测冠心病患者MACE的发生风险。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性体的调控机制

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体是介导人体固有免疫反应的重要蛋白,其可被广泛的外源性和内源性刺激物所激活,并通过胱天蛋白酶1(caspase-1)信号通路调节白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的活化,从而在许多炎症性疾病的发病过程中发挥着重要作用。近年来针对NLRP3炎性体的调控机制做了大量的研究,发现了许多对NLRP3炎性体具有调控作用的物质,这些研究有助于加深对炎症性疾病的认识和治疗。该文对NLRP3炎性体的组成结构、激活和调控机制予以综述。