血红蛋白变异体Hb Fukuyama和Hb North Manchester干扰糖化血红蛋白检测2例报道

糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,HbA_(1c))可反映患者近2~3个月的血糖控制情况[1]。美国糖尿病协会(American Diabetes Association,ADA)在2010年就推荐将HbA_(1c)≥6.5%作为糖尿病的补充诊断标准[2]。血红蛋白(hemoglobin,Hb)病是珠蛋白基因发生突变引起的一组溶血性遗传性疾病[3]。

罕见血红蛋白变异体J-Sardegna干扰HbA1c检测1例报道

糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,Hb A1c)是血红蛋白β链-N端缬氨酸与葡萄糖结合而形成,反映近2~3个月血糖平均水平,是诊断糖尿病和评价糖尿病患者血糖控制情况的重要指标[1]。有多种因素可影响Hb A1c的检测,如红细胞寿命改变、恶性肿瘤或严重的肝肾疾病,以变异体的存在较为常见,常见的血红蛋白(hemoglobin,Hb)变异体包括Hb S、Hb E、Hb C和Hb D。随着临床对Hb A1c的关注,越来越多新的Hb变异体被发现,如Hb J-Bangkok、Hb New York、HbBeijing和HbG-Taipei。因此,在日常工作中识别新的变异体,并评估其对常用Hb A1c检测方法的干扰,是对检验科工作人员的考验。目前,Hb A1c检测方法分为两大类:1)基于Hb A1c与非Hb A1c所带电荷不同,如离子层析法、电泳法;2)基于Hb糖化基团的结构特点,如亲和层析法、离子捕获法和免疫法;高效液相色谱法和毛细管电泳法为推荐的参考方法。Hb变异体的干扰取决于所使用的检测方法和变异体的类型,天津市第一中心医院利用3种不同原理(高效液相色谱、硼酸盐亲和层析、毛细管电泳)的4种检测方法对Hb A1c进行检测,并通过测序确定位点突变和变异体类型,确诊1例罕见的Hb变异体病例。现介绍如下。

广西重型β地中海贫血HBS1L-MYB基因多态性与胎儿血红蛋白的相关性研究

目的研究HBS1L-MYB基因rs35959442、rs4895441和rs9399137位点多态性与胎儿血红蛋白(Hb F)的相关性。方法通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性,DNA测序技术检测广西籍64例重型β地中海贫血患者(病例组)及64例健康对照组HBS1L-MYB基因rs35959442、rs4895441和rs9399137位点多态性,并分析它们与Hb F水平的相关性。结果病例组HBS1L-MYB基因rs4895441和rs35959442位点G等位基因频率均明显高于健康对照组(P<0.05),而两组rs9399137位点等位基因频率及基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。rs4895441位点、rs35959442位点与Hb F水平呈正相关关系(P<0.0167),rs9399137位点与Hb F无相关关系(P>0.0167)。结论广西重型地中海贫血HBS1L-MYB基因多态性与Hb F水平有关,rs35959442和rs4895441位点基因突变可能有助于提高Hb F的水平。

蜡状芽孢杆菌(B.cereus)对血红蛋白(Hb)降解特性研究

蜡状芽孢杆菌(B.cereus)在偏酸性(pH6.5),发酵温度在30～40℃之间的环境中生长;Ca2+及司班20对其蛋白酶的合成有促进作用熏从单菌株连续发酵、单菌株多次培养发酵、多菌株混合发酵及诱变菌株对Hb降解进行分析测定。结果表明:蜡状芽孢杆菌(B.cereus)单菌株连续发酵到第三天,Hb降解速率最快,其变化率为42.60%;经多次培养可提高该菌株对Hb降解能力;多菌株混合发酵比单菌株发酵产蛋白酶活力强,Hb降解率高;随诱变代数的增加,所获得的诱变菌株降解Hb能力不断增强。

异常血红蛋白Hb J-Bangkok和Hb G-Coushatta的基因型与表型分析

目的分析2种β珠蛋白基因突变所致异常血红蛋白Hb J-Bangkok和Hb G-Coushatta的基因型及其血液学特征。方法收集深圳市龙岗区妇幼保健院2020年4至10月毛细管血红蛋白电泳检测出异常血红蛋白条带的病例4例,采用PCR-流式荧光杂交法及基因测序方法进行基因诊断,对明确诊断的异常血红蛋白病例进行回顾性血液学参数分析。结果4个病例中检测到2种β珠蛋白基因突变,均为杂合子。3例为Hb J-Bangkok,血液学表型正常,血红蛋白电泳可见Hb A峰前Z12区有一条快速的异常血红蛋白;1例为Hb G-Coushatta,血液学表型未见异常,血红蛋白电泳Z(D)区有一条慢速异常血红蛋白。结论异常血红蛋白Hb J-Bangkok和Hb G-Coushatta的携带者均无小细胞低色素贫血的表现。毛细管电泳和基因测序技术联合应用,可以分辨和发现更多的异常血红蛋白。

血红蛋白与铜(Ⅱ)-茜素红S络合物相互作用的研究

采用UV-Vis光谱法,研究在pH4·2的H3PO4-KH2PO4缓冲溶液中血红蛋白(Hb)与铜(Ⅱ)-茜素红S(ARS)络合物的反应。结果表明:Hb与Cu(Ⅱ)-ARS络合物相互作用形成红色的离子缔合复合物,该复合物的最大吸收波长为537nm。在此波长下测得复合物的组成为nHb:nCu(Ⅱ):nARS=1:4:8,表观摩尔吸光系数为1·52×105L·mol-1·cm-1,Hb浓度在1·0×10-7～2·0×10-6mol·L-1范围内与吸光度呈线性关系,回归方程为A=0·0269+151675c(mol·L-1),相关系数r=0·9972。考察了溶液酸度、试剂用量、反应时间与温度、离子强度、表面活性剂等因素对Hb-Cu(Ⅱ)-ARS复合物形成的影响,并对反应机理做了初步探讨,发现Hb与Cu(Ⅱ)-ARS络合物之间主要以静电引力相结合。进一步考察了常见氨基酸及金属离子对Hb-Cu(Ⅱ)-ARS复合物形成的影响。

全自动血红蛋白电泳与Hb-F碱变性试验在β地中海贫血中的应用及评价

目的 评价全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳与Hb—F碱变性试验在口地中海贫血中的应用。方法 采用全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳仪进行血红蛋白（Hb）电泳，测定Hb—A2及Hb-F含量，同时采用Hb—F碱变性试验对同一标本进行Hb—F含量测定．比较两种方法对Hb—F含量的检测结果。结果 检测了30例临床标本，发现Hb—A2增高者（含量〉4％）5侧，阳性率〉16．7％，测定Hb-A2的批内CV〈6％，批间〈9％。同时检测出Hb-F含量增高3例。对于Hb-F碱变性试验测得Hb—F含量增高者（含量〉3．1％），通过全自动琼脂糖凝胶电泳可以分辨出HbF区带，并且能进行定量扫描，测出的Hb—F含量与Hb-F碱变性试验测得Hb—F含量基本一致；如果Hb—F碱变性试验测得Hb-F含量在正常范围内（1.0％～3.0％），电泳就不能分辨出HbF区带。结论 全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳法能够分辨出Hb—A2及Hb—F异常增高者，为β地中海贫血的诊断提供重要的数据。

溶解氧昼夜变化对鳜血液生理生化指标及血红蛋白基因表达的影响

【目的】探究养殖水体溶解氧昼夜变化下鳜(Siniperca chuatsi)血液生理生化指标及血红蛋白基因(Hb)应答的变化规律,为揭示鱼类的短期低氧适应机制提供理论依据。【方法】以健康的鳜幼鱼为研究对象,通过转录组测序和基因组测序数据匹配,鉴定出鳜Hb基因序列,并进行生物信息学分析。在7:00、11:00、17:00和23:00等4个时间点采集鳜血液样品,使用PROCANPE-6800血细胞分析仪测定红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白浓度和平均红细胞体积,采用实时荧光定量PCR检测Hb基因的表达变化。【结果】共鉴定获得11个鳜Hb基因,包括6个α型Hb基因(hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1和hbaa1.1)及5个β型Hb基因(hbbe2、hbba2.1、hbba1、hbba1.1和hbba2);除hbae4基因序列由6个外显子和5个内含子构成外,其余10个基因序列均由3个外显子和2个内含子构成。11个鳜血红蛋白均不存在跨膜结构和信号肽,亚细胞定位于细胞质,其二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲构成。池塘水体溶解氧含量存在周期性的昼夜变化;溶解氧含量最低时(7:00),鳜血液红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度均最高,显著高于其他3个时间点(P<0.05,下同);溶解氧含量最高时(17:00),红细胞数、红细胞压积和血红蛋白含量则显著低于其他3个时间点;平均红细胞体积在4个时间点无显著变化(P>0.05)。hbae4、hbae、hbae1.1、hbae5、hbaa1.1、hbbe2、hbba2.1、hbba1和hbba2基因的相对表达量均随溶解氧昼夜变化呈先上升后下降趋势,于17:00时达最高值,且这9个Hb基因在4个时间点的表达模式基本一致,即低溶解氧时相对表达量最低,高溶解氧时相对表达量最高;而hbaa1和hbba1.1基因相对表达量与溶解氧含量成反比。【结论】鳜通过调节红细胞数、血红蛋白含量和平均红细胞血红蛋白浓度等机制及调控Hb基因表达,以适应溶解氧的昼夜变化,从而保持机体供氧稳定。

HemoCue Hb 201+分析仪测定血红蛋白结果的可比性研究

目的：评估便携式HemoCue Hb 201＋分析仪急性失血后输血的指导意义。方法选择2013年6月~2015年5月间深圳市第二人民医院全麻术中因急性失血可能需要输血的患者共208例，血标本采集后，分别采用HemoCue Hb 201＋分析仪及SYSMEX XE-2100型血细胞分析仪测定同一标本的Hb，所测得的数据进行相关分析，并采用Bland-Altman 法评价两种检验方法的一致性。结果 HemoCue Hb 201＋分析仪和中心实验室SYSMEX XE-2100全自动血液分析仪测得的Hb具有良好的相关性（y =15.9297＋0.8086x， r=0.888，P＜0.001）。两种方法检测Hb差值95%的一致性限度超出临床可接受范围。结论 HemoCue Hb 201＋分析仪在急性失血后Hb的检测具有较好的准确性，并且迅捷，对术中输血具有良好的指导意义；但与标准方法的一致性尚有不足，二者不能相互取代。

血红蛋白作催化剂茜素蓝S褪色法测定过氧化氢

H2O2能够氧化茜素蓝S使之褪色，而模拟酶——血红蛋白对其具有催化作用。据此建立了一种以茜素蓝S为指示剂的过氧化氢——茜素蓝S——血红蛋白酶催化反应体系测定痕量H2O2的新方法。研究了反应的最佳条件，体系的酸度为pH=10．1的NH3-NH1Cl缓冲溶液，最大吸收波长为580nm。该法的线性范围为2．0×10^-7．5×10^-5mol／L，检出限为1．3×10mol／L，表观摩尔吸光系数为1．7×10^1L／（mool·cm）。该方法可用于雨水及消毒水中H2O2的测定。结果今人满意。该方法简单、灵敏、选择性好，易于操作。

关于血红蛋白(Hb)低温稳定性的研究

通过三种糖类物质蔗糖，甘油和海藻糖对血红蛋白（Ｈｂ）在冷冻贮藏中影响的研究，证明了这些物质在冷冻条件下能够维持Ｈｂ诱导形态的稳定，防止其由氧合型（ｏｘｙ－Ｈｂ） 向高铁氧化型（ｍｅｔ－Ｈｂ）转化，同时对于Ｈｂ的氧合功能具有较好的保护作用．使冷冻中Ｈｂ的生理活性得到长期保持，是Ｈｂ理想的低温保护剂．

我国异常血红蛋白的研究3例Hb J Bangkok及其一级结构分析

1981年本文部分作者在陕西商洛地区普查血红蛋白病时,在两个无关家系中发现一种泳动速度相同的快速血红蛋白,其电泳位置相当于J组,同年,又在福建龙岩地区发现一家系与上述相同之快速Hb。

用双水相体系分离血红蛋白(HB)

利用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相系统分离纯化盐析得到了血红蛋白(HB)样品,考察了PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH、温度等因素对HB分离的影响。结果表明PEG双水相系统的最佳分离条件为:wPEG400=20%,w(NH4)2SO4=20%,pH=7,温度为30℃。在此条件下HB分配系数可达到65,回收率可以达到89.5%,纯度达到80.5%。

6例异常血红蛋白K(Hb K)的基因型分析

目的分析6例异常血红蛋白K患者的基因型特征.方法对9 897例常规产检的孕妇行全自动毛细管电泳检测,检出的6例异常血红蛋白K患者进行23种常见地中海贫血基因检测及α、β-珠蛋白基因测序检测.结果 (1)1例杂合突变发生在α2链上,首次报道基因突变型为CD51 (GGC->TGC);(2)3例杂合突变发生在α1链上,基因突变型为Hb Hekinan II(GAG->GAT);(3)2例杂合突变发生在β链上,基因突变型分别为Hb Hope(GGT->GAT)和Hb New York(GTG->GAG).结论同一种异常血红蛋白病存在不同的基因型,且不同基因型临床表现不尽相同.

血红蛋白Bart′s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞系的建立

目的建立血红蛋白Bart′s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞模型。方法通过收集血红蛋白Bart′s水肿胎儿综合征孕妇患者羊水标本,分离培养其中的羊水细胞;然后通过使用仙台病毒将h Oct3/4、h Sox2、h Klf4和h L-Myc四种因子转导羊水细胞进行重编程;最后通过形态学、碱性磷酸酶染色、干细胞多能表面标志物免疫荧光、RT-PCR、EB自发三胚层分化和畸胎瘤体内分化潜能实验对获得的诱导多能干细胞进行检测分析。结果获得的诱导多能干细胞呈现出明显的干细胞样形态,碱性磷酸酶染色、多能性标志物免疫荧光染色及逆转录PCR等检测结果均符合干细胞特征,与人胚胎干细胞特性相似。体外EB自发分化和体内畸胎瘤分化实验也证实具有完全的三胚层分化发育潜力。结论成功建立血红蛋白Bart′s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞系,为后续疾病特异性造血分化模型的建立、疾病治疗的研究及药物开发应用奠定基础。

异常血红蛋白Hb Phnom Penh[α117(GH5)Phe-Ile-α118(H1)Thr (α1)]家系的分子诊断与临床特征分析

目的对携带一种罕见的异常血红蛋白Hb Phnom Penh家系进行分子诊断,并探讨该异常血红蛋白的临床特征。方法应用血常规和血红蛋白电泳分析家系成员外周血的血液学指标,采用PCR-流式荧光杂交法及基因测序方法进行基因诊断,采集羊水细胞进行产前诊断。结果该家系先证者血液学表型提示无小细胞低色素征,仅血红蛋白电泳Hb A2值略低于正常值,无异常血红蛋白带。基因测序结果显示先证者α1珠蛋白基因第117/118密码子中间插入三联体ATC(codon 117/118+ATC)杂合突变,为异常血红蛋白Hb Phnom Penh。该家系中携带有同种突变的其他家系成员的临床表现与先证者类似。结论Hb Phnom Penh杂合子无明显地中海贫血临床表型,血红蛋白电泳无异常血红蛋白带。该点突变的发现丰富了中国人群α-珠蛋白异常血红蛋白谱,为异常血红蛋白病的临床诊断和遗传咨询提供了参考。

血红蛋白电泳联合红细胞Hb、MCV、MCH检测对地中海贫血的诊断价值评价

目的探讨血红蛋白电泳(HbA2含量)联合血常规血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白浓度(MCH)检测对地中海贫血的诊断价值。方法选取2018年1月-2018年12月在我院接受产检并经基因检测为地中海贫血的患者696例,另外一组为接受产检并经基因检测排除地中海贫血的正常产妇1200例作为参照组。检测两组研究对象的血红蛋白电泳HbF,HbA2及血常规Hb,MCV,MCH,并比较两组数据对地中海贫血的诊断价值。结果α-地贫组Hb,HbA2,MCH水平低于对照组(P<0.05),其MCV显著低于对照组(P<0.01)。β-地贫组及αβ-地贫组Hb,HbA2,MCV及MCH水平显著低于对照组(P<0.01),,α-地贫组HbA2低于对照组(P<0.05)。β-地贫组HbF高于对照组(P<0.05);α-地贫静止型组各筛查指标与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);α-地贫标准型组与对照组相比,Hb、HbA2低于对照组(P<0.05),MCV、MCH显著低于对照组(P<0.01);α-地贫中间型与对照组相比,HbA2低于对照组(P<0.05),Hb、MCV、MCH显著低于对照组(P<0.01);差异均有统计学意义。研究组Hb,MCV,MCH及HbA2诊断地贫的敏感性分别为59.34%,84.20%,90.09%,72.41%,其特异性分别为79.50%,85.33%,84.33%,86.0%,阳性预测值分别为62.67%,76.90%,76.93%,75.0%。阴性预测值为77.12%,90.30%,93.62%,84.31%。HbA2分别联合Hb,MCV,MCH和以上三指标,敏感性分别为50.71%,67.96%,70.40%,48.56%,其特异性分别为89.83%,91.83%,91.41%,92.00%,阳性预测值分别为74.32%,82.98%,82.63%,77.88%。阴性预测值为73.78%,83.17%,84.19%,75.51%。结论HbA2联合Hb、MCV、MCH检测可有效筛查地中海贫血,综合多因素分析,为地中海贫血的防控和诊断提供有力的依据。

异常血红蛋白Hb J-Bangkok的分子诊断及血液学特征分析

目的分析基因检测为异常血红蛋白Hb J-Bangkok患者的血液学特征。方法采集9例经血红蛋白电泳筛查为Hb J带患者的外周血标本进行血常规检测和血红蛋白电泳检测;采用液相芯片检测和基因测序方法检测患者的基因型。结果9例患者均检出β珠蛋白基因c.170 G>A突变(codon 56 GGC>GAC),为异常血红蛋白Hb J-Bangkok;其红细胞参数指标中血红蛋白含量(Hb)、平均红细胞体积(MCV)和平均血红蛋白含量(MCH)正常或轻度异常;5例红细胞参数完全正常;1例血红蛋白筛查Hb A2(1.9%)降低,其他红细胞参数略有降低,基因芯片检测结果为(αQSα/)杂合突变;1例Hb和MCV均降低,血清铁蛋白(FER)降低;1例Hb较低(103 g/L),其他红细胞参数正常;1例血红蛋白轻度降低(114 g/L),其他血液学指标正常,其测序结果为β珠蛋白基因c.170 G>A纯合突变(homo codon 56 GGC>GAC)。结论单纯的Hb J-Bangkok杂合子或纯合子对临床血液学影响不明显,但合并其他血液学疾病时其红细胞参数多可改变。

糖尿病患者糖化血红蛋白(HbA1c)与空腹血糖(FPG)水平变化及其相关性

目的分析糖尿病患者糖化血红蛋白(HbA1c)与空腹血糖(FPG)水平变化及其相关性。方法选取医院收治的糖尿病患者105例为研究对象,采用高效液相色谱法与葡萄糖氧化酶法分别检测患者HbA1c、FPG指标,按照HbA1c水平将糖尿病患者分为HbA1c正常组与HbA1c异常组,与我院40例健康医务工作志愿者正常血生化指标进行比较。结果在不同HbA1c水平中均与FPG具有明显相关性,两者指标水平呈正性趋势发展(r=0.579,P=0.0145)。糖尿病患者HbA1c、FPG指标均明显高于健康参照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HbA1c作为糖尿病诊断过程中具有良好稳定性数据指标,避免仅单一性空腹血糖检测可能存在的误差,通过联合检测提高诊断全面性。