血纤维蛋白溶酶原激活剂的开发进展

血栓形成可导致急性心肌梗塞等多种疾病，溶因栓药则是抗血栓药之一，最近几年溶血栓药研究开发取得了很大进展，特别是血纤维蛋白溶酶原激活剂的进展尤为迅速，已有不少产品被批准上市，另有一系列同类产品在开发当中，本文就血纤维蛋白溶酶原激活剂的研究和未来展望作一简述。

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型血纤维蛋白溶酶原激活剂的生成

血纤维蛋白溶酶原激活剂(PA)将纤溶酶原转化为有活性的纤溶酶,在调节多种生理和病理过程发生的蛋白水解中发挥主导作用。已在哺乳动物中发现其两种形式,即组织PA(tPA)和尿激酶PA(uPA)。本文作者研究经激素诱导免疫抑制的大鼠中PA-纤溶酶系统的变化。

关于建立组织血纤维蛋白溶酶原激活剂(t-pA)美国参考品的合作研究

t-pA是一种内源性的血纤维蛋白溶酶原激活剂。1987年,Alteplase,即一种重组t-pA已由Genentech制成并经美国许可用于急性心肌梗塞病,t-pA的标准地已由英国国家生物标准品和质控研究所实施。第一个t-pA国际标准品建立于1984年,从黑素瘤细胞培养物的上清液中获得,这一标准品被指定用来测定血浆和生物制品中的t-pA活性以及成批生产的t-pA制剂的活性。对于第二个国际标准品,已有两种候选的制剂被检测。一种是从黑素瘤细胞培养物上清液中提纯的,另一种是由Genenfech等提供的重组t-pA制剂。这两种制剂都顺利地与第一个t-pA国际标准品进行了比较。

重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓后不同时间加用替罗非班对急性缺血性脑卒中患者神经血管功能的影响

目的探讨重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓后不同时间加用替罗非班对急性缺血性脑卒中(AIS)患者神经血管功能的影响。方法选择2020年3月至2023年3月北京老年医院神经内科收治的120例AIS患者为研究对象,患者均经rt-PA静脉溶栓治疗。根据静脉溶栓治疗后加用替罗非班的时间将患者分为早期组(溶栓后6 h内,n=52)、中期组(溶栓后6~12 h,n=38)和晚期组(溶栓后12~24 h,n=30)。比较治疗前、治疗后3组患者神经功能[美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分]、血管功能[血管性假血友病因子(vWF)、血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)、血栓调节蛋白(TM)]、炎症因子[高敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、白细胞介素-1β(IL-1β)]水平,记录治疗期间不良事件发生率。结果治疗前,3组患者NIHSS、mRS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);3组患者治疗后NIHSS、mRS评分显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者NIHSS、mRS评分显著低于中期组、晚期组,中期组患者NIHSS、mRS评分显著低于晚期组(P<0.05)。治疗前,3组患者vWF、VE-cadherin、TM水平比较差异无统计学意义(P>0.05);3组患者治疗后vWF、VE-cadherin、TM水平显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者vWF、VE-cadherin、TM水平显著低于中期组、晚期组(P<0.05);治疗后,晚期组患者vWF水平显著高于中期组(P<0.05),中期组与晚期组患者VE-cadherin、TM水平差比较异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,3组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05),3组患者治疗后hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于中期组和晚期组,中期组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于晚期组(P<0.05)。治疗期间,3组患者症状性脑出血发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);早期组患者再闭塞、心肺并发症发生率显著低于中期组、晚期组(P<0.05);中期组与晚期组患者再闭塞、心肺并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论rt-PA静脉溶栓后不同时间加用替罗非班后均可促进AIS患者神经功能、血管功能恢复,同时可抑制炎症反应,其中早期加用替罗非班效果最佳。

重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中的疗效观察

目的观察重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中临床有效性和安全性。方法发病在4.5 h内接受rt-PA静脉溶栓治疗的急性脑梗死患者426例,随机分为重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗组(A组,207例)和仅接受重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓治疗对照组(B组,219例)。采用美国国立卫生研究院率中量表(NIHSS评分量表)在患者最初就诊时及治疗后对患者神经功能缺损情况进行评估。应用改良Rankin评分量表(mRS)评价患者出院3个月时远期预后情况。溶栓后24 h、7 d行多模式核磁检查(包括颅脑MRI、MRA、MR灌注,不能行颅脑MR检查患者行颅脑CT、CTA、CT灌注检查)并分析临床并发症的发生率。记录2组患者治疗前后血清中血管内皮生长因子(VEGF)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量水平。结果治疗后2组NHISS评分较治疗前下降,但是A组结果显著优于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。3个月随访时,A组神经功能预后良好129例(62.5%),B组患者为126例(57.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。A组患者治疗后7 d发生颅内出血的有1例,B组有3例,均为非症状性颅内出血,2组差异无统计学意义(P=0.087)。A组患者接受治疗后VEGF水平显著升高,hs-CR水平降低,与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗可以显著改善患者预后,且不会增加不良事件发生率。提示重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中安全有效。

急性缺血性脑卒中患者重组组织型纤溶酶原激活剂溶栓后出血性转化的影响因素及其预测价值

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后出血性转化(HT)的影响因素及预测价值,为临床治疗提供参考。方法选取2021年7月至2023年7月利津县中心医院接受rt-PA溶栓治疗的150例AIS患者为研究对象,进行回顾性分析,根据患者rt-PA溶栓治疗后是否发生HT分为HT组(32例)和非HT组(118例)。比较两组患者一般资料及纤维蛋白原(FIB)水平、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板计数(PLT)系统免疫炎症指数(SII);采用Logistic回归分析AIS患者rt-PA溶栓后HT的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估FIB、NLR联合SII对AIS患者rt-PA溶栓后HT的预测价值。结果两组患者发病至溶栓时间、FIB、中性粒细胞计数、NLR、PLT、SII指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic回归结果显示:FIB、NLR、PLT、SII是AIS患者rt-PA溶栓后HT的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:FIB、NLR、SII联合预测AIS患者rt-PA溶栓后HT的曲线下面积(AUC)为0.923,灵敏度为76.80%,特异度为92.40%,均优于FIB、NLR、SII单独预测。结论FIB、NLR、SII是AIS患者rt-PA溶栓后HT的影响因素,且FIB、NLR、SII三者联合对AIS患者rt-PA溶栓后HT具备一定的预测价值,均高于各指标单独预测。

灯盏细辛对犬急性心肌缺血时组织纤维蛋白溶酶原激活剂和纤溶酶原激活物抑制剂的影响

本实验观察灯盏细辛对犬急性心肌缺血早期组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)的影响。结果表明:灯盏细辛能够明显抑制缺血后 PAI 浓度增高。与对照组和潘生丁比较,在缺血30min、60min、6h 时有显著性差异。随着时间延长,差异越来越显著,在缺血后6h 最明显(P<0.01)。另一方面,灯盏细辛还能够使 tPA 浓度维持相对恒定。在缺血后6h 时与对照组或潘生丁比较,有显著性差异。灯盏细辛对急性心肌缺血时 tPA、PAI 的影响可能是灯盏细辛抗心肌缺血的作用原理。

新生鼠缺氧缺血性脑损伤内源性纤维蛋白溶酶原激活剂变化及其意义

目的新生儿缺氧缺血性脑损伤发病机制尚不十分清楚,目前缺乏有效的治疗手段。近年来,越来越多的研究显示组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)在神经系统中起到很重要的作用。该研究欲探讨纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)在新生鼠缺氧缺血脑损伤中的作用。方法选用Wistar大鼠7日龄的新生鼠,运用Rice-Vannucci动物模型造成新生鼠脑缺血缺氧,缺血缺氧后不同时间取新生鼠大脑检测。异硫氰酸荧光素-右旋糖酐左心室灌注分析脑缺血缺氧后新生鼠脑的再灌注障碍。用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR),酶谱法检测损伤后不同时间tPA的表达与活性;并采用双重免疫荧光,TUNEL和DAPI染色法检测血小板聚集指标(Integrin GPIIb)与纤维蛋白(fibrin)在缺血缺氧后不同时间的表达及神经细胞凋亡。结果新生鼠脑缺氧缺血后1h,异硫氰酸荧光素-右旋糖酐心室灌注提示新生鼠大脑有明显的缺血梗塞区,而Integrin GPIIb与fibrin的表达也较对照侧明显增加。但4h后缺血梗塞区面积明显缩小,伴有Integrin GPIIb与fibrin的表达减少。tPA的表达与活性在缺血缺氧后明显增加。随着缺氧缺血后恢复的时间延长,大脑凋亡细胞增加。结论tPA表达的增加在脑缺氧缺血的急性期可有助于血栓溶解,但在脑缺氧缺血的亚急性期却会导致神经细胞凋亡而加重脑损伤。

结膜下注射组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂治疗眼内积血

对前房积血及玻璃体积血,临床上常规应用尿激酶、安妥碘及玻璃酸酶等进行治疗,但疗效均不理想。组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(t-PA)是一种有特异性的新型溶血栓药物,已有报导将之用于促进眼内积血的吸收。笔者等用国产的t-PA(上海医科大学提供)治疗眼内积血,采用1次或多次的结膜下注射,效果满意,现报告如下:

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纤维蛋白显影方法是经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ将不同分子量的纤溶酶原激活剂（ＰＡ）分开，然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测ＰＡ物质活性及分子大小的方法。此法与Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法比具有检测更简便、灵敏、快速的特点，且是活性检测，但其分子量分析精度不如Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。本研究用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影方法对本室表达的重组组织型－ｐＡ（ｒｔ－ＰＡ）及突变体Ｎｌｌ７Ｑ／Ｎｌ８４Ｑ／△（Ｋ２９６——Ｇ３０２）及标准尿激酶（ＵＫ）和ｒｔ－ＰＡ进行了分析鉴定。

重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓治疗超早期脑梗死患者临床分析

目的:探讨rt-PA(重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂)治疗超早期脑梗死(<6h)的有效性和安全性。方法:对55例发病6小时以内的急性脑梗死患者进行分析,其中16例接受rt-PA静脉溶栓治疗。结果:两组治疗后NIHSS评分、Barthel指数、mRS评分比较差异有统计学意义。两组脑出血发生率差别无统计学意义。结论:符合溶栓治疗条件的超早期脑梗死患者,采用rt-PA治疗是安全有效的,能够改善神经功能,恢复生活能力。

对氨基苯甲酰纤维蛋白溶酶原-链激酶激活剂复合物的新制法

合成了化学修饰剂 (对氨基苯甲酸对脒基苯酯盐酸盐 ) ,并通过透析法得到了 L ys-纤维蛋白溶酶原。提出了利用 L- L ysine Sepharose4 B柱以人纤维蛋白溶酶原、链激酶及化学修饰剂制备对氨基苯甲酰纤维蛋白溶酶原 -链激酶激活剂复合物 (APSAC)的新方法 ,本法的优点是 APSAC的收率及纯度均较高。

重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂及突变体的分析

目的:为制订质量标准建立相应的检测方法。方法:应用肽图分析、高效液相色谱、电泳和酶活性测定等方法对tPA及突变体进行鉴别、纯度检查和活性测定。结果:反相高效液相色谱和肽图分析方法能区分相差3个氨基酸的2种tPA突变体;反相高效液相色谱、分子排阻高效液相色谱和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法能有效分离降解产物;不同结构的tPA表现的活性不同。结论:本文方法专属性强,且可操作。

组织型纤溶酶原激活剂溶栓后出血转化的机制及中医药防治的研究进展

组织型纤溶酶原激活剂(tPA)静脉溶栓可进一步增加脑梗死病人出血转化的发生率,血脑屏障破坏是出血转化的直接原因。在脑缺血再灌注损伤过程中,tPA进一步加剧了氧化应激、炎性因子释放和血管重构,从而诱导血脑屏障的损伤。保护血脑屏障完整性、减轻tPA溶栓后出血转化对治疗急性脑梗死有重要的临床意义。中医药具有多成分、多靶点的治疗优势,运用中医药保护血脑屏障对临床预防溶栓后出血具有较大的潜力。结合前期研究,综述近年来tPA溶栓引起血脑屏障渗漏的机制,以血脑屏障通透性为靶标挖掘减少tPA溶栓后出血的中药资源,以期为临床提供安全、有效的静脉溶栓使用策略。

重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(rt-PA)治疗急性下肢动脉血栓

1例81岁老年男性患有冠心病、房颤等多种疾病,行心脏起搏器电池更换术前停用抗凝药物华法林,导致术后患者右下肢持续疼痛,伴右腿苍白、冰凉;股动脉、足背动脉搏动弱,右下肢大动脉血栓形成,采用重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗,效果显著,患者肢体疼痛消失,足背动脉可触及搏动。

有望能减轻治疗中风引起出血的新药——组织纤维蛋白溶酶原激活剂类的药物

中风的发病率、死亡率和致残率均很高，是一种严重危害人类健康的疾病。自从1996年在美国批准组织纤维蛋白溶酶原激活剂类的药物（tPA）以来．它已成为治疗中风的“避雷针”。尽管研究发现该药能够降低中风引起的脑损害．但其同时也引起了潜在的、致命性的脑出血。