脉冲电磁场对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是临床常见病,脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)是治疗OP的新方法,其可以通过共振效应促进成骨细胞的增殖和分化,从而发挥治疗OP的作用。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcell,BMSC)是一种具有多向分化能力的干细胞,其对OP的预防和治疗具有重要作用。本文概述了PEMFs和BMSC,就PEMFs对BMSC的作用、PEMFs促进BMSC成骨分化的相关信号通路进行了综述。

人血源性间充质干细胞培养与体外成骨研究

目的建立分离、培养成人外周血来源的间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)的方法,观察成人血源性MSCs体外成骨潜能。方法抽取成年志愿者外周静脉血30份,每份15ml。用淋巴细胞分离液(密度为1.077g/ml)梯度离心,取单个核细胞在含有20%胎牛血清的α-MEM培养液中培养扩增MSCs,流式细胞仪分析MSCs表型。第2次传代培养时在培养液中添加成骨诱导因子(地塞米松、β-磷酸甘油、维生素C和1,25二羟维生素D3)。第5代传代细胞检测碱性磷酸酶、型胶原(collagentype,Col)、骨钙素(osteocalcin,OC)和骨粘连蛋白(osteonectin,ON)表达,连续培养1个月后检测钙结节形成情况。结果成人外周血中存在MSCs,集落形成率为0.27±0.22/106单个核细胞,表达CD44、CD54、CD105和CD166,而不表达与造血系相关的CD14、CD34、CD45及内皮细胞特异的CD31。地塞米松、β-磷酸甘油、维生素C和1,25二羟维生素D3可作用于传代培养的血源性MSCs,表现为碱性磷酸酶染色阳性细胞增多,逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)产物电泳条带显示ColI、OC和ON表达,盐酸四环素荧光标记证实有钙结节形成。结论建立的成人MSCs分离、培养条件可分选出外周血贴壁生长的细胞中一组独特的细胞群。成人血源性MSCs具有较强的体外成骨潜能,可望成为一种新的骨组织工程种子细胞。

骨形成蛋白-2基因转染人骨髓间质干细胞诱导异位成骨的实验研究

目的 评价腺病毒介导的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )转染人骨髓间质干细胞 (MSCs)的诱导成骨能力。方法 从人骨髓中分离培养获取 MSCs,分为三组 :1Adv- h BMP- 2转染细胞组 ;2 Adv- βgal转染细胞组 ;3未转染细胞组。分别于体外行 Western immunoblot试验、碱性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量测定 ,以及裸鼠肌内诱导成骨试验。共 9只裸鼠 ,双侧股后肌群内注射 ,每组 6侧。结果 Adv- h BMP- 2组 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;转染后第 9天 AL P染色多数细胞为阳性 ,其它两组 AL P染色阳性细胞少见 ;AL P活性第 3天开始升高 ,12天达高峰为 14 .76单位 ,与其它两组比较有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出现钙结节 ,而其它两组未见。裸鼠肌内注射后 4周 Adv- h BMP- 2组 X线片均有异位成骨 ,Adv- βgal转染细胞组未见明显成骨 ,未转染细胞组仅有少量骨形成。组织学检查发现 :Adv- h BMP- 2组也可见典型的板层骨和骨髓腔形成 ,Adv- βgal组主要为纤维组织 ,未转染组也可见散在骨小梁形成。结论 Adv- h BMP- 2基因转染可诱导人骨髓间质干细胞成骨。

骨髓间充质干细胞向软骨及骨分化：Wnt5a/PCP信号通路作用的研究与进展

背景:Wnt5a具有抑制经典Wnt信号和激活非经典Wnt信号途径的生物学功能。近年来,研究发现Wnt5a介导的Wnt5a/PCP非经典信号通路在骨髓间充质干细胞的增殖和分化过程中发挥着重要作用。但其参与骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成的机制并不完全清楚。目的:综述Wnt5a/PCP信号通路中的相关下游效应分子,及其在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成过程中作用的最新研究进展。方法:以"间充质干细胞、Wnt信号通路、软骨分化、骨分化"为中文捡索词,以"BMSCs、Chondrogenic differentiation、Osteogenic differentiation、Wnt、Fzd、Ror2、Rho A、ROCK、JNK"为英文检索词,在维普、中国知网(CNKI)期刊全文数据库和Pub Med数据库检索2000年1月至2016年2月有关Wnt信号通路参与间充质干细胞向软骨及骨分化的文献。排除陈旧性和重复性研究,重点分析43篇文献进行综述。结果与结论:Wnt5a是非经典Wnt信号途径的代表性Wnt蛋白,主要通过其下游信号分子Fzd、Ror、Rho A、ROCK、JNK等介导,参与细胞骨架、细胞迁移和细胞极化等活动,从而调控其增殖和分化。然而Wnt5a/PCP信号通路在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化过程中具体的作用机制并不清楚,下游效应分子之间是如何协同或独立发挥作用也是未知的,这些问题均需要进一步深入研究。

脐血间充质干细胞体外培养方法的改良及其成骨分化能力

目的:采用两种改良方法体外分离培养脐血间充质干细胞,并观察其成骨分化能力。方法:实验于2006-05/09在上海交通大学医学院附属第九人民医院骨与关节中心细胞实验室完成。①所用28份脐血标本由复旦大学医学院附属妇产科医院提供,取自足月健康顺产新生儿,产妇和家属均书面同意,实验经医学伦理委员会批准。②采集28份脐血标本,50～90mL/份,枸橼酸抗凝。采集后12h内密度梯度离心法分离出单个核细胞,接种于100mm×20mm培养皿中,细胞浓度为1×1010L-1,置于含体积分数为0.1胎牛血清的α-MEM培养液中原代培养,5～7d后半量换液,后每隔3～4d全量换液一次。③细胞贴壁后,分两组予以改良培养。改良1组10份,当培养皿底圆形巨核细胞融合、梭形成纤维样细胞脱落时将细胞悬液移入新的培养皿中培养;改良2组18份,待培养皿底圆形巨核细胞渐渐占据优势时,将培养基更换为含体积分数为0.15小牛血清的α-MEM,当圆形巨核细胞大部脱落后换回含体积分数为0.1胎牛血清的α-MEM培养基。成纤维样细胞融合至80%～90%时胰酶消化,按1∶2或1∶3传代培养。④显微镜下观察脐血间充质干细胞的形态。取第5代脐血间充质干细胞,采用流式细胞仪测定细胞免疫表型,以碱性磷酸酶法检测成骨分化能力。结果:①28份脐血间充质干细胞中,共20份原代培养中出现贴壁细胞(改良1组6份,改良2组14份),其中13份培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞(改良1组4份,改良2组9份),成功率46.4%。②原代培养5～7d后贴壁细胞呈梭形成纤维样细胞和圆形巨核细胞。改良1组与2组于原代培养5周可见成纤维样细胞集落,细胞形态与骨髓间充质干细胞相似,呈较均一的长梭形,传至22代形态无明显变化。③可强烈表达CD29、CD105等间充质干细胞表面标志,而不表达CD34、CD45和CD106等造血干细胞和内皮细胞标志。④成骨诱导1周,脐血间充质干细胞可分化为成骨细胞,碱性磷酸酶染色呈阳性。结论:脐血中存在的单个核细胞经过改良培养后,可提高脐血间充质干细胞的培养成功率。脐血间充质干细胞具有与其他来源的单个核细胞类似的表型及成骨分化潜能,且易于体外扩增、传代稳定。

悬滴培养对人脂肪间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨悬滴培养对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)成骨诱导分化的影响。方法利用酶消化法分离培养hADSCs,采用流式细胞术检测其表面标志的表达。对hADSCs进行悬滴培养,贴壁后添加诱导剂对其进行成骨诱导分化,以平板培养组为对照,诱导分化7d及21d时,利用RT-PCR检测成骨基因Runx2及Osteopontin的表达。结果分离培养的hADSCs表达干细胞表面标志CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45;悬滴培养3d的hADSCs可形成大小均一的球状三维结构;RT-PCR结果表明,在成骨诱导分化的不同时间点,hADSCs悬滴培养组的成骨基因Runx2及Osteopontin表达均比平板培养组高,表明悬滴培养可促进hADSCs的成骨诱导分化。结论悬滴培养有利于hADSCs的成骨诱导分化,有助于提高其成骨诱导效率。

小鼠卵黄囊间质干细胞向成骨细胞定向分化的实验研究

目的研究卵黄囊间质干细胞的成骨潜能。方法用０．１％的Ⅰ型胶原酶消化获得妊娠第８．５天的小鼠卵黄囊细胞；取贴壁细胞培养，并于接近融合时进行传代培养。对细胞进行形态学观察、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）及Ⅰ、Ⅲ型胶原检测，传代４次后进行成骨诱导，每天观察细胞形态，并于培养７ｄ后测定ＡＫＰ、Ⅰ、Ⅲ型胶原及骨形态发生蛋白－２（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－２，ＢＭＰ －２）的表达，培养８周后进行矿化检测。结果体外可获得纯化的卵黄囊间质干细胞，细胞大小形态均一，呈梭形，ＡＫＰ染色弱阳性，Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性。在体外可诱导卵黄囊间质干细胞定向分化为多形性成骨样细胞，细胞由梭形向星形转化，并形成胞浆突起，相互连接成网状，细胞ＡＫＰ染色阳性，Ⅰ型胶原阳性，Ⅲ型胶原阴性，ＢＭＰ －２强阳性，８周后矿化区经Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ ＇ｓ染色呈阳性反应，符合成骨细胞的生物学特征。结论经体外纯化的卵黄囊间质干细胞可诱导向成骨细胞定向分化。

物理疗法调控骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发生与成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收之间的平衡被打破密切相关,而骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化对维持二者平衡至关重要。物理疗法治疗OP具有疗效好、安全性高等特点,在临床上逐渐被广泛使用。多项研究表明,多种物理疗法治疗OP的作用机制与调控BMSC成骨分化密切相关。本文对运动疗法、全身振动、脉冲电磁场、体外冲击波等物理疗法调控BMSC成骨分化治疗OP的研究进展进行了综述。

地塞米松诱导联合骨形成蛋白2基因修饰兔骨髓间质干细胞的成骨转化(英文)

背景:骨髓间质干细胞在地塞米松等骨诱导剂的作用下能够向成骨细胞分化;同时骨形成蛋白2在骨修复过程中促进细胞增殖分化和基质分泌,在体内外均可诱导骨形成,以上二者联合应用可能会产生一定的协同效应。目的:分析体外经地塞米松诱导是否能增强骨形成蛋白2基因修饰的骨髓间质干细胞的成骨转化能力。设计:随机化配对设计。单位:解放军第四军医大学西京医院。材料:实验于2004-02/2004-08在解放军第四军医大学全军骨肿瘤研究所完成。选用2月龄新西兰白兔20只,由解放军第四军医大学实验动物中心提供(许可证号:军动管字第2005C00117号)。室温、常湿,正常喂食。双侧取材,左侧肢体来源骨髓间质干细胞为地塞米松诱导组,右侧为对照组(未经诱导)。方法:将地塞米松诱导组和对照组兔骨髓间质干细胞分别转导含有人骨形成蛋白2基因的复制缺陷重组腺病毒Ad-BMP-2后,以反转录-聚合酶链反应和免疫组化方法检测细胞中骨形成蛋白2的表达情况。观察骨髓间质干细胞的生长情况,并应用碱性磷酸酶检测试剂盒及骨钙素放免试剂盒测定Ad-BMP-2转导5d后两组骨髓间质干细胞的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。主要观察指标:①骨髓间质干细胞中骨形成蛋白2的表达情况。②骨髓间质干细胞的形态学变化。③骨髓间质干细胞中碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果:①转导后骨形成蛋白2基因在地塞米松诱导组和对照组兔骨髓间质干细胞中均有表达。②骨髓间质干细胞经地塞米松成骨诱导后形态较不规则,呈三角形、多角形改变,较基础培养基培养细胞生长缓慢。基因转导后细胞形态无明显改变。③转基因5d后,地塞米松诱导组骨髓间质干细胞培养上清中碱性磷酸酶活性高于对照组[(134.36±8.84,104.02±7.83)nkat/L(t=3.3506,P<0.01,n=20)];地塞米松诱导组骨髓间质干细胞骨钙素分泌量高于对照组[(14.68±0.73,6.52±1.21)μg/L(t=3.5682,P<0.01,n=20)]。结论:转基因前的地塞米松诱导能够促进骨形成蛋白2基因修饰的骨髓间质干细胞增殖和成骨转化。

DNMT3B对人脐带间质干细胞成骨分化能力的影响

目的研究DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)调控人脐带间质干细胞骨生成的作用。方法利用RNA干扰法获得两株DNMT3B基因低表达的人脐带间质干细胞(Human Umbilical Mesenchymal Stem Cells,hUMSCs)。在使用qPCR和免疫组织化学法确定DNMT3B表达缺失后,对hUMSCs进行骨生成定向诱导分化。并利用免疫组织化学法和茜素红染色评价突变型和野生型hUMSCs成骨能力差异。结果由RNA干扰获得的两株突变型hUMSCs中两株突变型中DNMT3B表达量分别下降至野生型hUMSCs的12.67±0.45%和35.60±0.76%(P<0.05)。而在DNMT3B突变型hUMSCs中间质干细胞标记物CD73和CD90基因mRNA的表达水平也分别下降(P<0.05)。CD73水平分别是野生型细胞的15.83±0.44%和16.60±0.37%(P<0.05);CD90的水平分别是野生型细胞的35.23±0.30%和58.64±0.71%(P<0.05)。在骨生成过程中,免疫组化染色后镜下比较显示DNMT3B突变型的细胞表达Osteocalcin较正常细胞低,qPCR结果表明RUNX2,IBSP和ALPL基因的mRNA表达量水平较正常细胞均明显下降(P<0.01),其中shD3B-1和shD3B-2的RUNX2基因表达水平分别为正常细胞的55.09±0.53%和53.77±0.47%(P<0.01);IBSP基因表达水平分别为正常细胞的53.21±0.81%和41.75±0.44%(P<0.01);ALPL基因表达水平分别为正常细胞的15.55±0.10%和17.86±24%(P<0.01)。同时茜素红染色检测也显示其成骨后细胞成骨功能减弱。结论 DNMT3B突变或缺失会导致hUMSCs骨生成能力下降。

非病毒载体携带Cbfa1诱导成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:观察核心结合因子a1(Cbfa1)对成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞定向分化的诱导作用。方法:经密度梯度离心法和贴壁筛选法获得hBMSCs。非病毒载体FuGene HD携带Cbfa1转染hBMSCs后7、14d,经Real-time PCR分析hBMSCs成骨细胞标志基因表达,包括Cbfa1、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原;培养1、2和3周,ALP染色、钙结节染色检测成骨分化。结果:培养的hBMSCs阳性表达CD73,阴性表达CD34。第3代细胞增殖曲线呈"S"形,符合对数生长曲线。Cbfa1转染hBMSCs表现出与成骨细胞相似的形态,成骨细胞标志基因ALP、OC、OPN和Ⅰ型胶原的表达均明显上调,ALP染色阳性,并且有明显的钙结节形成。结论:非病毒载体携带Cbfa1转染hBMSCs可诱导其向成骨细胞分化。

低细胞密度状态下的人骨髓间质干细胞成骨能力研究

目的 研究低密度人骨髓间质干细胞(Humanbonemarrow -derivedmesenchymalstemcells,hMSCs)体内成骨能力及影响因素。方法 从人髂骨骨髓分离培养hMSCs。以不同细胞密度与块状和颗粒型磷酸钙陶瓷(HA/TCP)载体混合,移植于裸小鼠体内,分别观察2和3个月,组织学评价研究hMSCs异体体内成骨的最小细胞密度。按3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体的比例混合细胞与载体(HA/TCP和鼠尾胶原包被的HA/TCP) ,体外共培养一周后移植裸鼠皮下,3个月后,组织学评价细胞载体体系体外培养和胶原包被载体对hMSCs体内成骨能力的影响。结果 只有以3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体在体内移植3个月后可观察到在块状和颗粒HA/TCP表面有骨组织生成。用鼠尾胶原包被的颗粒HA/TCP和细胞与载体体外共培养并无明显促进骨组织生成作用。结论 保证hMSCs异体成骨的最小细胞密度为3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体。在低密度hMSCs状态下,鼠尾胶原和细胞与载体体外共培养并不能提高hMSCs的成骨能力。

骨髓间充质干细胞向成骨细胞的定向诱导分化

骨髓由非贴壁的造血细胞和贴壁的基质细胞部分组成。这些贴壁的基质细胞部分包括多能间充质干细胞和分化的骨髓间充质基质细胞。间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）系统依靠增殖来自我更新，但是能够保持其干细胞的表型而引起成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、成纤维细胞的分化。如何定向诱导其成骨分化可为研究骨组织工程、骨折修复和骨质疏松等难题提供理论基础，具有重要的意义。本综述讨论了骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的相关研究。

骨髓间充质干细胞支持造血细胞生成和分化机制的研究进展

骨髓间充质干细胞（MSC）以其多向向中胚层起源细胞分化潜能及自我更新的干细胞特征，成为骨髓造血微环境中重要的构成组分及前体成分，参与胚胎血细胞的生成及维持造血，其本身及其衍生分化的基质细胞参与构建不同的造血龛结构，包括成骨细胞龛、基质细胞龛和脂肪细胞龛，经由细胞间多种黏附分子及相应信号通路或可溶性细胞因子直接或问接协同调控造血细胞的生成和分化，因此籍以MSC在支持造血细胞生成中发挥的作用，期待其潜在的治疗价值。

转染骨形态发生蛋白-2基因的人骨髓间质干细胞复合异种骨支架异位成骨的效果

目的 观察骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )基因转染的人骨髓间质干细胞复合异种骨支架异位成骨效果。 方法 分组 :(1)BMP - 2基因转染细胞 +异种骨支架 [去抗原牛松质骨 (BCB) ];(2 )对照基因转染细胞 +BCB ;(3)未转染细胞 +重组BMP - 2 +BCB ;(4)未转染细胞+BCB ;(5 )BCB。分别将各组人工骨植入裸鼠皮下 ,于术后 4 ,8周行组织学观察。 结果 体内植入后 3d ,细胞持续表达外源基因。BMP - 2基因转染组 8周时完全由新形成的编织骨构成 ,血管丰富。 结论 BMP - 2基因转染后细胞复合BCB支架 ,可以在异位形成骨组织并诱导毛细血管长入。

静水压力刺激对人骨髓间充质干细胞成骨、成脂双向分化的影响

目的研究短期和较长期的静水压力负荷对人骨髓间充质干细胞（BMSC）成骨或成脂的影响，并探讨细胞外信号调节激酶（ERK）1／2信号通路在其中作用。方法对BMSC施加40或80kPa的静水压强，分别持续1h或4h，然后加入10mmol／LU0126阻断ERK1，2信号通路，通过半定量RT—PCR和实时定量PCR方法检测成骨标志基因Cbfa1和骨钙素（OC）以及成脂标志性基因PPARγ2和Adipsin的mRNA表达水平。对BMSC施加40kPa的静水压刺激，每天作用4h，7d和14d后检测Cbfa1、OC、PPARγ2和Adipsin的mRNA表达水平，在3、7、14d通过组织化学染色和定量测定方法检测碱性磷酸酶的活性和表达量。结果40kPa压强的静水压连续刺激4h可以促进Cbfa1、OC的mRNA表达和抑制PPARγ2、Adipsin的mRNA表达。40kPa的静水压连续作用7d，仍表现为对BMSC的促成骨分化作用，然而连续作用14d后，则表现为促成脂分化作用。成骨诱导条件并不协同静水压的促BMSC成骨分化作用。而U0126并不能完全抑制BMSC对静水压刺激的反应。结论一定强度和作用时间的静水压刺激可以促进BMSC的成骨分化，但较长期的作用可能会促进成脂分化。成骨诱导培养条件与静水压的促BMSC成骨分化作用无协同作用。

改良扩孔介孔硅介导大鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化

目的探讨自制的扩孔介孔硅纳米粒子(LPMSNs)的材料性能,及其对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨向分化的影响。方法溶胶凝胶法合成介孔硅纳米颗粒(MSNs),使用扩孔剂1,3,5-三甲苯(TMB)对初始合成的小孔径高温扩孔。透射电镜(TEM)、N_2吸附解吸附、孔径分布、孔容及比表面积分析、傅里叶红外光谱(FTIR)、热重分析(TGA)检测其形貌结构和理化性能。体外分离培养BMSCs,并对其增殖能力和多向分化潜能进行鉴定,取第3代细胞用于实验。配置不同浓度LPMSNs培养液,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LPMSNs的细胞毒性。分为对照组、LPMSNs组(10μg/m L),培养21 d后,茜素红染色法检测各组细胞矿化结节。培养7、14 d后,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、Runx相关转录因子(Runx2)、骨钙素(OCN)表达。培养14 d后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成骨相关蛋白水平表达。使用SPSS 20.0对数据进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)和t检验比较,以P<0.05认为差异有统计学意义。结果 TEM显示LPMSNs粒径约为200 nm,其N_2吸附解吸附曲线为Ⅳ型等温线,有吸附的迟滞环;LPMSNs的孔径分布图显示其孔径分布峰值为7.39 nm,BET比表面积图计算出来的BET比表面积为(340.5±2.8)m^2/g,BJH孔容为1.8 cm^3/g。在LPMSNs的FTIR的数据中,可观察到位于460 cm^(-1)的Si-O-Si横向摇摆振动峰(TO1);位于800 cm-1的Si-O-Si对称伸缩振动峰(TO2);位于1070 cm-1的Si-O-Si非对称伸缩振动峰(TO3),位于940~960 cm^(-1)的Si-OH键振动峰,位于3000~3700 cm^(-1)的-OH振动峰。TGA显示LPMSNs在28~1000℃之间整个失重所占百分比约为1.61%。CCK-8法结果显示低浓度(<20μg/m L)的LPMSNs对细胞活力无明显影响。茜素红染色法显示与对照组相比,LPMSNs组的细胞矿化结节形成数量较多,体积较大。实时荧光定量PCR结果表明,LPMSNs组7 d时ALP表达量(6.2±1.9)与对照组相比显著提高(t=4.83,P=0.0085),Runx2表达量(4.3±0.6)与对照组相比显著提高(t=9.76,P=0.0006);14 d时ALP表达量(19.2±1.4)与对照组相比显著提高(t=4.86,P=0.0083)、Runx2表达量(4.9±0.7)与对照组相比显著提高(t=7.73,P=0.0203)、OCN表达量(17.2±3.6)与对照组相比显著提高(t=5.52,P=0.0052)。Western blot的结果显示,成骨分化的第14天,LPMSNs组的Runx2相对表达量(1.7±0.3)与对照组相比呈上升趋势(t=3.48,P=0.0254);OCN相对表达量(1.69±0.21)与对照组相比显著提高,差异有统计学意义(t=5.71,P=0.0047)。结论本研究制备LPMSNs具有较大的比表面积、孔容和亲水性,适用于负载较大分子量的蛋白或细胞因子,细胞毒性小,可促进大鼠BMSCs成骨向分化,作为骨缺损的修复材料具备一定的应用价值。

人类脐带源间充质干细胞细胞因子分泌及造血支持作用的研究

目的研究脐带源间充质干细胞（UC—MSC）细胞因子分泌特征及其对脐血源CD34^＋细胞的造血支持作用，并与骨髓源间充质干细胞（BM—MSC）相对照。方法RT—PCR法检测UC—MSC和BM—MSC细胞因子分泌。将脐血CD34^＋细胞分别接种于UC—MSC或BM—MSC滋养层共培养5周，收集贴壁与非贴壁细胞接种于标准甲基纤维素培养基，计数克隆形成细胞（CFC）。结果UC—MSC表达SCF、LIF、M—CSF、Flt-3、IL-6、GM—CSF、G—CSF、SDF-1和VEGFmRNA，不表达IL-3mRNA。与BM—MSC相比，二者表达细胞因子谱相似，但BM—MSC不表达GM—CSF和G—CSFmRNA。共培养5周计数CFC显示，BFU—E、GFU—GM和CFU—GEMM在CD刍细胞／UC—MSC（75．5±27．9，100．0±25．1，9．5±7．3）与CD34^＋细胞／BM—MSC（70．5±28．8，108．3±9．5，8．5±5.1）共培养体系差异无统计学意义（P〉0．05）。结论UC—MSC与BM—MSC具有相似的造血支持功能和细胞因子分泌谱。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对成骨分化及骨性疾病影响的研究进展

干细胞的成骨分化需要转录因子、信号通路和生物学信号的紧密协调。这种交互网络的失调会影响干细胞和成骨细胞的增殖和凋亡,从而破坏骨代谢和稳态。lncRNAs广泛参与干细胞的成骨分化过程,从而在骨关节炎、骨肿瘤等骨疾病的发生、发展和进展中发挥重要作用。长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)调节干细胞的成骨分化,并在骨形成和相关疾病的发展中起重要的中介作用。现就lncRNA HOTAIR在成骨分化及骨病中的具体作用和机制的相关研究作一综述,以期为未来骨与关节疾病的防治提供新的思路。

antimiR-138修饰骨髓基质干细胞膜片的可行性及其促进同种冻干骨粉成骨的研究

目的探索采用非病毒方法转染骨髓基质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSC）膜片的可行性;antimi R-138转染的BMSC膜片促进同种冻干骨粉（FDB）成骨的可行性。方法采用Vc连续诱导法培养BMSC膜片,通过调整Lipofectamine 2000-mi RNAs载体复合物的用量及转染步骤对BMSC膜片进行转染;采用荧光体式及显微观察、mi RNA-PCR方法比较各组的转染效率的差异;通过大体观察、HE染色和扫描电镜观察BMSC膜片的形态。将BMSC膜片/FDB复合物移植到裸鼠皮下,术后4~8周,分别采用HE和MT染色对膜片的成骨能力进行评估。结果荧光体式及显微结果表明antimi R-138可成功地转至BMSC膜片中,其中150 n M组对内源性mi R-138的抑制率为85%;体内异位成骨实验表明antimi R-138转染的BMSC膜片可显著促进并加速移植复合物的骨组织形成。结论 （1）通过对以Lipofectamine 2000为载体的转染复合物的用量及转染步骤进行优化,可以构建出具有较高转染效率,良好的细胞相容性以及结构完整的antimi R-138修饰的BMSC膜片。（2）antimi R-138转染的BMSC膜片可显著促进并加速移植复合物的异位骨组织形成。