厚壳贻贝血细胞颗粒的蛋白质组学分析

贝类的血细胞在宿主的免疫防御机制中发挥着重要的作用。文章利用线性离子阱-四级杆质谱对厚壳贻贝(Mytilus coruscus)血细胞的颗粒蛋白质组分进行了Shotgun分析,结合Mascot数据库搜索,共鉴定了125种高丰度蛋白,其中包括细胞骨架蛋白、细胞粘附蛋白、精氨酸激酶和代谢相关酶类等。此结果为深入了解厚壳贻贝血细胞颗粒的蛋白组成、贻贝免疫分子标记的筛选及其免疫机制奠定了基础。

温度骤变对栉孔扇贝全血细胞和颗粒血细胞数量的影响

血细胞及其亚群的数量是栉孔扇贝(Chlamys farreri)的重要免疫指标之一。本文研究了栉孔扇贝在17℃下,分别经水温突变(11、23和28℃)和不同温度(5、11、17和23℃)干露处理后,应用以抗栉孔扇贝全血细胞单抗和颗粒血细胞单抗分别为第一抗体的间接酶联免疫吸附实验和流式细胞术测定全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例的变化。结果表明:水温骤变全血细胞和颗粒血细胞数量变化显著,全血细胞数量11、23℃组均先升高后逐渐趋于对照组,28℃组一直显著低于对照组;颗粒血细胞数量及其比例11℃组显著增加并始终高于对照组,23℃组显著降低后逐渐恢复至对照水平,28℃组始终低于对照水平。不同温度干露后,全血细胞和颗粒血细胞数量均显著降低,海水恢复后,5℃组较11、17℃组更接近对照组,23℃组干露12h扇贝全部死亡。研究表明:全血细胞及颗粒血细胞数量对温度变化的反应敏感;较低水温有利于细胞数量的提升,较高水温下细胞数量下降显著;低温干露后细胞数量恢复较好,高温干露扇贝存活率差。

三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体的研制及7种甲壳类动物血细胞的交叉反应研究

为研究虾蟹类甲壳动物血细胞膜表面是否具有相同的抗原决定簇及共同抗原表位的生物学特征,采用制备的抗三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体,通过激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)等多种方法,测定了7种甲壳类动物(凡纳滨对虾、中国明对虾、刀额新对虾、口虾蛄、中华绒螯蟹、日本板蟹及美洲黄道蟹)颗粒血细胞及透明血细胞与三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体发生特异性结合的抗原表位。LSCM可观察到该株抗三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体与中华绒螯蟹和日本板蟹血细胞交叉反应结果为阳性,分析发现在中华绒螯蟹血淋巴中阳性颗粒血细胞在其颗粒血细胞总数中占76.74%,阳性透明血细胞在其透明血细胞总数中占70.59%,日本板蟹阳性颗粒血细胞在其颗粒血细胞总数中占73.86%,阳性透明血细胞在其透明血细胞总数中占16.67%,其余5种甲壳类动物均为阴性;Western blot测试结果显示该株单克隆抗体仅与中华绒螯蟹血细胞反应,且发生反应的抗原决定簇位于分子量为30 ku的蛋白带上;FCM分析发现该株单克隆抗体与中华绒螯蟹透明血细胞和颗粒血细胞均可发生交叉反应,阳性率分别为57.72%和77.05%,与日本板蟹透明血细胞阳性反应极少,阳性率仅为9.57%,与颗粒血细胞发生阳性反应的阳性率为82.59%。

幼虫密度对草地螟血细胞数量和组成的影响

为了阐明幼虫密度对草地螟Loxostege sticticalis L.(鳞翅目:螟蛾科)细胞免疫能力的影响,本研究调查了在活体灰菜植株上1,5,10和20头/瓶(900mL)4种密度条件下的其5龄幼虫血细胞种类、数量和组成。结果表明:草地螟幼虫血淋巴中有原血细胞、浆血细胞、颗粒血细胞、珠血细胞和类绛色血细胞等5种(类)血细胞。血细胞总数、浆血细胞、颗粒血细胞数量随幼虫密度的增加而显著递增,但原血细胞、珠血细胞和类绛色血细胞数量在幼虫密度间的差异不明显;各种血细胞所占血细胞总数的比例在4个密度中的排序相同,但10和20头/瓶密度下的浆血细胞比例显著高于1头/瓶的,其余4种血细胞的比例在不同密度之间无显著差异。可见,幼虫密度主要是通过影响草地螟幼虫浆血细胞和颗粒血细胞的数量及血细胞总数,从而影响草地螟的细胞免疫能力。

淡足侧沟茧蜂寄生对甜菜夜蛾幼虫血淋巴黑化及血细胞数量和构成的影响

为探讨寄生蜂调控寄主的免疫反应,研究了淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes Szepligeti寄生对甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫血淋巴的影响。结果表明,寄生总体上降低了寄主血淋巴的黑化率;与未被寄生幼虫相比(对照),寄生蜂寄生引起寄主血细胞总数和颗粒血细胞数量下降,且寄生后第1~3 d和6 d达到显著水平;寄生蜂寄生后第1~3 d致使寄主浆血细胞数量下降,但第4 d开始寄主桨血细胞数量增高,且寄生后第6 d显著高于对照。寄生蜂寄生也改变了寄主浆血细胞和颗粒血细胞构成比例。本研究揭示了寄生蜂寄生引起寄主血淋巴黑化和血细胞数量及其构成的变化是寄主对寄生蜂入侵产生免疫响应的结果。

菜粉蝶蛹血细胞体外细胞免疫反应及蝶蛹金小蜂毒液的影响

为探明蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液对其寄主菜粉蝶Pieris rapae蛹颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力的影响,本研究分别采用Na2-EDTA处理和尼龙毛法对菜粉蝶蛹颗粒血细胞与浆血细胞进行分离纯化;再采用离体细胞培养方法,研究了菜粉蝶蛹颗粒血细胞、浆血细胞各自在包囊和吞噬反应中的作用,以及蝶蛹金小蜂毒液对其所产生的影响。结果表明:颗粒血细胞和浆血细胞均参与了包囊反应,其中前者包囊作用明显,后者作用微弱,但两者同时存在时包囊作用最为明显;血淋巴浆质对颗粒血细胞和浆血细胞包囊反应均无显著影响。毒液对颗粒血细胞和浆血细胞的包囊能力均存在显著的抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量效应特征。此外,菜粉蝶蛹颗粒血细胞和浆血细胞均具吞噬能力,其中前者吞噬能力显著强于后者;毒液对颗粒血细胞与浆血细胞的吞噬能力亦均存在显著的抑制作用,且该抑制作用亦具有显著的剂量效应特征。结果说明,菜粉蝶蛹颗粒血细胞及浆血细胞均参与寄主的细胞免疫反应,蝶蛹金小蜂毒液对其寄主颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力均存在显著的抑制作用。

中国鲎血细胞发生的超微结构变化

中国鲎的血细胞发生于黄色结缔组织中弥散的造血组织。透射电镜观察结果表明,鲎造血组织中血细胞发生过程经历以下几个阶段:血母细胞、原血细胞、浆血细胞和颗粒血细胞。血母细胞位于造血组织中,被基膜包围,核质比大。原血细胞,胞质有所增大,细胞器较少,合少量膜泡。浆血细胞,胞质增大许多,内质网膜大量膜泡化。膜泡内沉积物不断生成,最终发育为血细胞特异性颗粒。早期颗粒血细胞内含少量的大小颗粒。随着细胞内大量大小颗粒的生成,细胞分化进入晚期颗粒血细胞阶段,即将成熟的血细胞逐渐脱离造血组织,移向血窦腔隙,在血淋巴中进一步成熟。

蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶和玉带凤蝶蛹血细胞数量和组成的影响

以血球计数板较系统地考查了菜粉蝶和柑桔凤蝶雌雄蛹被蝶蛹金小蜂寄生后浆血细胞和颗粒血细胞数量的时间动态变化,以明确该蜂寄生对其寄主血细胞数量和组成的影响。结果表明,菜粉蝶蛹被寄生后,其血细胞总数除寄生后2天外均极显著高于同期未寄生蛹,最多的约高出20倍;除被寄生后0.5和5天的寄生蛹的血细胞组成与同期未寄生蛹无显著差异外,寄生后1～4天雌雄寄生蛹的浆血细胞所占比例均显著低于同期未寄生蛹,而颗粒血细胞所占比例则反之。玉带凤蝶寄生蛹的血细胞总数在寄生后0.5～3天与同期未寄生蛹相比均无显著差异,但寄生后4～5天却显著升高,最多的约高出3倍;寄生后0.5～5天的寄生蛹浆血细胞所占比例均显著低于同期未寄生蛹,而颗粒血细胞所占比例恰反之。可见,该蜂寄生在一定时间内不仅能引起其两种寄主血细胞总数和颗粒血细胞所占比例明显增高,而且能导致浆血细胞所占比例明显下降。

鲎血淋巴系统的特点及其功能

鲎的血淋巴系统由心脏、血管和血淋巴液组成.心脏和血管系统非常发达,而且血液量巨大.血淋巴液由血浆和血细胞组成.血浆主要含有血蓝蛋白、α2-巨球蛋白、C-反应蛋白等.对鲎血细胞的种类,看法不一,其主要的血细胞类型为颗粒性血细胞,其胞质中含有特征性的大小颗粒.鲎的血淋巴中含有50种以上的免疫因子,大都位于大小颗粒中,它们在鲎的天然免疫中起重要的作用.