光动力治疗胶质瘤对血肿瘤屏障的开放的研析

由于脑胶质瘤呈浸润性生长,大多与正常脑组织无明显分界,一些部位深的肿瘤常侵犯脑重要功能区,手术难以切除根治。化疗是其术后主要的治疗方法之一,然而肿瘤组织的毛细血管存在血肿瘤屏障(blood-tumor-barrier,BTB),限制了大分子量的化疗药物进入肿瘤组织,因此极大地影响了该病术后化疗的效果。要有效地增加肿瘤组织内抗肿瘤药物的浓度,同时又要减少治疗药物对正常脑组织的影响成为有效治疗脑胶质瘤的关键。因此研究胶质瘤血肿瘤屏障特点对于综合治疗胶质瘤有重要的意义。且目前已有实验证实了低频超声及缓激肽能够在短时间内开放血肿瘤屏障,本实验证实了光动力治疗对血肿瘤屏障的影响及其机制:光动力治疗脑胶质瘤能够通过下调紧密连接相关蛋白的表达来打开紧密连接,开放血肿瘤屏障,同时能够杀伤肿瘤细胞,促使肿瘤细胞凋亡,达到更有效的治疗。

肝细胞癌患者循环血肿瘤细胞的检测、分型鉴定及其临床意义

目的通过对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的检测及亚型鉴定,分析其与HCC临床分期的关系及对手术预后的影响。方法采用CanPatrol^(TM) CTC-二代捕获技术联合RNA多重原位杂交分析(RNA in situ hybridisation,RNA-ISH),检测112例可手术切除HCC患者术前1~2 d与术后8~10 d外周循环血中的肿瘤细胞,并根据上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况对其进行分型鉴定。同时,抽取20名健康志愿者的外周血作对照。结果 112例HCC患者术前1~2 d检测出CTCs101例(90.18%),20名健康志愿者的外周血中未检测到CTCs。根据EMT相关标志物的表达情况,将检测出的CTCs分为上皮型CTCs、上皮为主型CTCs、上皮/间叶混合型CTCs、间叶为主型CTCs及间叶型CTCs。其中CTC总数及间叶型CTC的比例与HCC的巴塞罗那肝癌临床(barcelona clinic liver cancer,BCLC),分期密切相关。当以CTC总数等于16作为临界点时,预测患者术后极早期复发的敏感性为55.3%,特异性为92.3%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.74;当以间叶型CTC的比例等于2%作为临界点时,预测患者术后极早期复发的敏感性为80.9%,特异性为69.2%,AUC为0.748。CTC总数≥16且间叶型CTC的比例≥2%组的患者中位无瘤生存期为3.5个月,明显低于单纯CTC总数≥16或间叶型CTC的比例≥2%组(7个月)和CTC总数<16且间叶型CTC的比例<2%组(13.5个月),差异有统计学意义(P<0.05)。112例HCC患者术后8~10 d CTC总数较术前有所下降,但间叶型CTC的比例较术前增多。术后出现间叶型CTC的比例增多的患者无瘤生存期短于间叶型CTC的比例下降(或不变)的患者,其预后也较差(P<0.05)。对10例患者进行术后连续定期CTCs变化的动态监测直至复发,发现其中8例患者于出现临床可见复发病灶前的1~2个月,CTCs就可出现逐渐增多的趋势。结论 HCC患者外周血CTC阳性率高,CTCs能被检测出存在于早期HCC患者外周血中,提示HCC的播散转移是早期事件;术前高CTC总数或高间叶型CTC的比例以及术后出现间叶型CTC的比例增多的患者,其复发时限较短,预后较差。术后动态监测CTCs变化,对HCC极早期复发的预测具有一定的临床意义。

RhoA在缓激肽选择性开放血肿瘤屏障中的作用

目的探讨RhoA是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用RhoA的特异性抑制剂C3胞外酶(C3 ex-oenzyme)预处理体外血肿瘤屏障模型的大鼠脑微血管内皮细胞后,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障通透性的改变;Western blot法检测紧密连接相关蛋白claudin-5可溶性片段向不溶性片段的转变;免疫荧光法和细胞荧光标记法观察体外血肿瘤屏障模型的大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白claudin-5和丝状肌动蛋白结构和分布的改变。结果 C3 exoenzyme抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP流量升高;C3 ex-oenzyme抑制claudin-5可溶性片段向不溶性片段的转变;C3exoenzyme抑制claudin-5由细胞膜向细胞质重新分布,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少。结论 RhoA介导缓激肽开放血肿瘤屏障。

类透明质酸壳聚糖微乳增加大鼠血肿瘤屏障通透性的研究

目的研究类透明质酸壳聚糖微乳((HAC-ME)对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(BTB)通透性的作用效果及机制。方法采用伊文氏兰(EB)渗透评估HAC-ME作用后BTB通透性的变化。应用Western blot方法观察HAC-ME作用后大鼠脑胶质瘤微血管中紧密连接相关蛋白(Claudin)-5的表达情况。结果 EB渗透评估结果表明HAC-ME(<5 mg/m L)可引起脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性发生变化,灌注0.25 h后血肿瘤屏障通透性开始增加,灌注1 h时达高峰,而后有所下降,16 h时基本恢复至灌注前水平,同时Western blot结果表明大鼠脑胶质瘤微血管中Claudin-5蛋白的表达水平,从HAC-ME作用后0.25 h后开始减少,作用后1 h表达最少,而后有所上升,16 h时基本恢复至作用前水平。结论 HAC-ME能够增加脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障的通透性,其作用机制与Claudin-5表达水平下调相关。

信号分子PKC调控内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性机制的研究

目的探索信号分子蛋白激酶C（PKC）参与内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）增强血肿瘤屏障（BTB）通透性过程的相关机制。方法采集出生3～5d的Wistar胎鼠大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞（BMEC）原代培养；将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养，构建体外BTB模型；共培养后的BMEC随机分成3组：对照组、EMAP-Ⅱ组和H7＋EMAP-Ⅱ组，测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量，评估各组BTB通透性的变化，Westernblot法和免疫荧光法检测紧密连接相关蛋白claudin-5在各组BMEC上的表达水平变化；共培养后的BMEC被随机分成5组：EMAP-Ⅱ0，0．5，1，2，4h组，Westernblot法检测EMAP-Ⅱ作用不同时间点时BMEC膜上PKC各亚型的蛋白表达变化。结果与对照组比较，EMAP-Ⅱ组BTB的通透性显著增高（P=0．002），BMEC上claudin-5的表达水平显著降低（P=0．005），EMAP-Ⅱ的上述作用受到PKC抑制剂H7预处理的显著抑制（P=0．036）；EMAP-Ⅱ作用0．5h时，BMEC膜上PKC-α和PKC-β的蛋白表达水平显著增加，1h时达到峰值，其后表达水平逐渐下降，4h时恢复至未用药水平。BMEC膜上PKC-ζ的蛋白表达水平于O．5h时显著增加，其后表达水平逐渐下降，2h时恢复至未用药水平。结论信号分子PKC参与EMAP-Ⅱ增强BTB通透性的过程，其机制可能与BMEC膜上PKC-α、-β和-ζ的表达水平上调有关。

miR-200c调控RhoA基因表达介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制的研究

目的研究miR-200c调控Ras基因家族成员A(RhoA)表达介导RMP7增加血肿瘤屏障(BTB)通透性的机制。方法应用real-time PCR检测RMP7作用BTB后人脑微血管内皮细(ECs)miR-200c的表达;应用miR-200c模拟物和miR-200c抑制物分别转染GECs(ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞),测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析BTB通透性;应用Western blotting检测RhoA的表达;应用免疫荧光方法观察GECs中RhoA表达和分布;应用双荧光素酶报告基因检测miR-200c转录后水平调控RhoA机制。结果 RMP7作用GECs后,使GECs内源性miR-200c表达显著降低;miR-200c模拟物和miR-200c抑制物成功转染到GECs中;miR-200c模拟物显著抑制RMP7诱导TEER值的降低、HRP的升高;miR-200c模拟物显著减少RhoA的表达,促使RhoA在GECs细胞质和细胞核分布减少;miR-200c模拟物转录后水平负性调控RhoA基因表达。miR-200c抑制物与miR-200c模拟物实验结果相反。结论 miR-200c转录后水平负性调控RhoA表达,介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制。

Caveolin-2在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的表达水平变化

目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-2在内皮-单核细胞激活多肽-II(EMAP-II)增强血肿瘤屏障(BTB)通透性过程中的表达水平变化。方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组16只):EMAP-II处理0h、1h、2h和4h组。采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;RT-PCR、Western blotting、免疫组化和免疫荧光法检测脑胶质瘤组织毛细血管上caveolin-2的表达水平变化。结果:EMAP-II作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;同时,EMAP-II作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上caveolin-2的表达水平显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常。结论:EMAP-II可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与caveolin-2的表达水平上调有关。

腺嘌呤核苷受体介导肿瘤坏死因子-α开放血肿瘤屏障的作用及其机制

目的明确肿瘤坏死因子-α(TNF-α)开放血肿瘤屏障的作用及其可能机制。方法构建体外血肿瘤屏障模型,给予TNF-α后不同时间点,免疫组织化学法和Western blot法动态检测胶质瘤细胞的热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)和腺嘌呤核苷受体(adenosine A1receptor,A1R)的表达水平;荧光分析法检测体外血肿瘤屏障模型的通透性改变。结果给予TNF-α后,胶质瘤细胞内HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内A1R的表达水平也在给予TNF-α后明显增加,并于120 min达高峰后逐渐减少。其血肿瘤屏障的通透性亦于给予TNF-α后120 min达最大后减少。结论经TNF-α作用后的胶质瘤细胞HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过某种内在机制提高A1R的表达水平,进而增加了血肿瘤屏障的通透性。

EMAP-Ⅱ选择性增加胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAP-Ⅱ)对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响以及最佳的作用条件。方法应用免疫组织化学方法观察内源性EMAP-Ⅱ在正常脑组织和脑胶质瘤组织中的分布;采用伊文氏兰(EB)法检测不同浓度外源性EMAP-Ⅱ作用后血肿瘤屏障通透性的变化。结果在正常脑组织,内源性EMAP-Ⅱ主要表达在脑微血管和神经元;在脑肿瘤组织,主要表达在肿瘤组织微血管和肿瘤细胞。不同浓度的外源性EMAP-Ⅱ可使血肿瘤屏障对伊文氏兰的通透性增加,对正常脑组织的通透性没有影响,在EMAP-Ⅱ的作用1 h时达到高峰,以后逐渐下降,12 h时基本恢复至灌注前水平;40.g/kg体重的浓度为EMAP-Ⅱ的的最适作用浓度。结论EMAP-Ⅱ能够以剂量依赖的方式选择性增加血肿瘤屏障的通透性。

内皮—单核细胞激活多肽酶Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的作用位点

目的研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(BTB)的作用机制。方法采集出生3～5 d的Wistar胎鼠大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞(BMEC)的原代培养;将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型;实验随机分为4组(每组6例):对照组、EMAP-Ⅱ组、寡霉素组和寡霉素+EMAP-Ⅱ组。测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量,评估各组BTB通透性变化;Western blot检测BMEC上紧密连接(TJ)相关蛋白ZO-1的表达水平;双重免疫荧光法检测EMAP-Ⅱ和α-ATP合成酶在BMEC上的分布。结果 EMAP-Ⅱ组BTB通透性较对照组和寡霉素组显著增高(P<0.01);与对照组和寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ组TJ相关蛋白ZO-1的表达水平显著降低(P<0.01);EMAP-Ⅱ组与寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ的作用受到ATP合成酶抑制剂寡霉素的显著抑制(P<0.01);EMAP-Ⅱ与α-ATP合成酶在BMEC膜上共定位。结论 EMAP-Ⅱ通过开放TJ增强BTB的通透性,BMEC膜上的α-ATP合成酶是其作用的位点。

肝癌患者术中循环血肿瘤细胞的变化

目的研究肝癌切除手术是否会对肝癌患者循环血肿瘤细胞造成影响从而可能增加肝癌患者术后的转移率。方法抽取18例肝癌患者术中切肝前与切肝后循环血及20名健康志愿者的循环血。所有血液样本均进行血常规检测计数白细胞和显微镜下全血有核细胞总数计数,并进行比较。采用免疫荧光法和细胞培养法检测比较各组血液样本中的肿瘤细胞数量与特性。免疫荧光法使用AE1/AE3、CD133标记肿瘤细胞。结果肝癌患者术中切肝后白细胞数和全血有核细胞总数均较切肝前增高。存在AE1/AE3阳性细胞的样本总例数较存在CD133阳性细胞和双阳性细胞的样本总例数多(P<0.001)。健康志愿者循环血中的AE1/AE3阳性细胞数量多于肝癌切肝后循环血(P<0.05),CD133阳性及双阳性的细胞数量在各组间比较无统计学差异(P>0.05)。细胞培养克隆生成率在各组间比较差异无统计学意义(P>0.05),肝癌患者中形成克隆株的3例样本在肿瘤发生来源、肿瘤病理类型及分化程度上无明显区别。结论肝癌患者术中切肝前后循环血、健康人群循环血中均存在肿瘤细胞;肝癌切除手术操作不会影响肝癌患者血液中的循环血肿瘤细胞数量与特性。

C3胞外酶抑制缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的增加

目的研究Ras基因家族成员A(RhoA)的特异性抑制剂C3胞外酶(exoenzyme)对缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的作用。方法应用C3 exoenzyme预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)流量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白(ZO-1)的表达;应用免疫荧光法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(F-actin)结构和分布的改变。结果 C3 exoenzyme显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低、HRP流量的升高及ZO-1的表达,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少。结论 RhoA能够介导缓激肽开放血肿瘤屏障。

107例经EGFR-TKIs一线治疗的非小细胞肺癌患者血肿瘤标记物水平与疗效的关系

目的探讨107例经EGFR-TKIs一线治疗的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血肿瘤标记物水平与疗效的关系。方法 2008-2011年共107例NSCLC患者接受EGFR-TKIs的一线治疗,并在治疗前进行了血肿瘤标记物的检测。根据检查结果分为高表达组和低表达组,观察两组近期疗效,并进行相关性分析。结果 CEA≥5 ng/ml的患者EGFR-TKIs治疗有效率为23.4%(15/64),疾病控制率为70.3%(45/64),CEA<5 ng/ml的患者有效率为15.0%(6/40),疾病控制率为47.5%(19/40),疗效差异有统计学意义(P<0.05);CEA高表达患者PFS与CEA低表达患者相比差异无统计学意义(5.7个月vs 7.3个月,P=0.220)。其余的血肿瘤指标包括CA125、NSE、SCC及CYFRA21-1高表达组与低表达组之间DCR、ORR及PFS差异无统计学意义(P>0.05)。进一步分析了CEA高表达组和低表达组患者的一般临床特征,结果显示两组患者差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清CEA水平可作为预测EGFR-TKIs治疗疗效的指标,与PFS关系并不确定。

跨细胞途径在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的作用

目的探讨跨细胞途径参与内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(BTB)通透性过程的可能性。方法荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组12只):EMAP-Ⅱ0 h、1 h、2 h和4 h组。采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况。Western blot、免疫组化和免疫荧光法检测脑胶质瘤组织毛细血管上质膜微囊结构蛋白caveolin-1的表达水平变化。结果 EMAP-Ⅱ作用1 h时,脑胶质瘤组织中伊文思蓝的含量显著增加,随后逐渐降低,4 h时恢复正常;EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上caveolin-1的表达水平均显著增高,随后逐渐降低,4 h时恢复正常。结论跨细胞途径可能参与EMAP-Ⅱ增强血肿瘤屏障BTB通透性的作用过程。

肿瘤坏死因子-α在缓激肽开放血肿瘤屏障过程中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在缓激肽(BK)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的作用。方法:缓激肽处理C6细胞和胶质瘤大鼠后,放射免疫法动态监测培养液和脑胶质瘤组织内TNF-α浓度。利用伊文思蓝连续监测缓激肽/TNF-α处理后的C6恶性胶质瘤大鼠血肿瘤屏障的通透性,同时电镜观察血肿瘤屏障的病理学改变。结果:缓激肽可增加C6细胞培养液和胶质瘤大鼠肿瘤组织内的TNF-α含量,且两者均于给予缓激肽后15min时达高峰(与对照组相比有显著统计学意义,P<0.01)。TNF-α与缓激肽单独作用于C6动物后,均可引起胶质瘤大鼠的血肿瘤屏障紧密连接开放及通透性增加。且肿瘤坏死因子-α对肿瘤模型动物血肿瘤屏障通透性的影响与C6细胞培养液中TNF-α含量相一致。结论:缓激肽开放血肿瘤屏障过程中,可能是通过某种机制引起肿瘤组织内TNF-α增加,增加的TNF-α进而引起了血肿瘤屏障的开放。

交叉反应物质197转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制

目的研究白喉毒素的无毒突变体交叉反应物质197(cross-reacting material 197,CRM197)转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制。方法制备CRM197-HRP偶联物,建立体外血肿瘤屏障模型,给予CRM197-HRP作用2 h后,通过TMB显色法检测transwell下室中HRP活性的变化;给予CRM197作用1 h后,采用免疫组化法检测体外血肿瘤屏障内皮细胞中p-Akt的表达变化;Western blot法检测p-Akt、p-FOXO1A和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达变化。结果和对照组相比,CRM197-HRP能有效通过血肿瘤屏障,并且其转运水平呈时间依赖性增加;p-Akt主要分布在内皮细胞的胞质和胞核中,CRM197作用1 h后p-Akt的表达水平下降;同时伴有内皮细胞中p-FOXO1A表达下降和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达上调。结论 CRM197可能通过抑制内皮细胞中p-Akt的表达,减少转录因子FOXO1A的磷酸化水平,进一步上调质膜微囊蛋白caveolin-1的表达,增加血肿瘤屏障的通透性。

circ-PTBP3对血肿瘤屏障通透性的影响

目的探讨环状RNA(circRNAs)circ-PTBP3(hsa_circ_0088072)在胶质瘤微血管内皮细胞(GECs)中的表达,以及circ-PTBP3对血肿瘤屏障(BTB)通透性的调控作用。方法构建血脑屏障与BTB模型,应用qRT-PCR检测正常脑微血管内皮细胞(ECs)与GECs中circ-PTBP3的表达水平。RNase R验证circ-PTBP3对其的抵抗作用。建立circ-PTBP3稳定沉默的GECs,用跨内皮阻抗值(TEER)检测屏障的完整性,通透性测定检测屏障的通透性,Western blotting和免疫荧光实验检测紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin与claudin-5的表达与分布。结果circ-PTBP3在GECs中高表达,沉默circ-PTBP3可显著降低BTB的TEER值,增加BTB的通透性,减少紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin与claudin-5的表达与分布。结论沉默circ-PTBP3可显著增加BTB的通透性,减少紧密连接相关蛋白的表达。circ-PTBP3可能成为开放BTB的分子靶标,有效提高胶质瘤的治疗效果。

脑胶质瘤血肿瘤屏障特点的研究

血肿瘤屏障（blood—tumor—barrier，BTB）与正常的血脑屏障（blood．brain．barrier，BBB）是不同的。正常脑组织的微血管是连续的并且由紧密连接贯连，不具有胞饮小泡和膜孔。药物透过BBB的基本原理是单纯扩散，BTB是由肿瘤组织中的三种微血管亚群组成的，与BBB相似的连续的、不具有膜孔的微血管，

磷酸化caveolin在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ开放血肿瘤屏障中的表达水平变化

目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2在低剂量内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的磷酸化水平变化。方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组12只):EMAP-Ⅱ0h、1h、2h和4h组。采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Western blot和免疫荧光法检测大鼠脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平变化。结果:EMAP-Ⅱ作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平均显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常。结论:EMAP-Ⅱ可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平上调有关。

循环血肿瘤DNA含量变化对评价兔VX2肿瘤放疗早期反应的动物实验研究

目的观察外周血循环Shope病毒DNA含量变化比较VX2移植瘤放疗早期治疗效果,探讨液态活检技术在临床的潜在应用价值。方法采用组织块大腿外侧皮下接种法建立兔VX2肿瘤模型,随机分为实验组和对照组,实验组给予单剂量20Gy放射治疗。根据已知的Shope病毒基因库设计Shope病毒特征性探针,应用实时定量PCR法检测放疗前1天、放疗后第3天及放疗后第7天血浆中Shope病毒特征性DNA片段含量。于放疗后第7天留取肿瘤组织块行病理组织学分析肿瘤细胞坏死率,分组标准以肿瘤细胞坏死率达80%为界,≥80%者为放疗有效组,小于80%为放疗抵抗组。采用SAS 9. 1统计软件分析,循环血shope病毒DNA含量组间差别采用方差分析,以P <0. 05为差异有统计学意义。结果根据病理肿瘤坏死率分组,对照组n=4,有效组n=6,抵抗组n=6。病理分析发现放疗有效组肿瘤组织存在大量坏死灶,放疗有效组坏死率明显高于放疗抵抗组(P <0. 05);放疗后3天,有效组的循环血shope病毒DNA含量明显高于抵抗组(P <0. 05),放疗后7天,放疗有效组循环血shope病毒DNA含量明显低于抵抗组(P <0. 01)。外周血中shope病毒的动态变化与VX2肿瘤放疗早期病理改变相关。结论循环血Shope病毒DNA可以作为兔VX2肿瘤特征性肿瘤标志物,循环血肿瘤DNA变化在早期监测肿瘤放疗疗效时具应用价值。