注射用丹参多酚酸联合血栓通对缺氧复氧损伤血脑屏障紧密连接蛋白表达的影响

血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通过精密控制血液与脑实质之间的物质交换维持脑内微环境,保证神经系统功能。脑微血管内皮细胞作为组成BBB的核心,通过细胞间紧密连接蛋白(tight junction protei,TJs)来维持BBB的屏障完整[1-2]。研究表明[3-4],BBB的破坏是造成缺血性卒中出血转化及加重脑损伤的重要因素。因此,维持BBB的完整可能是缺血性卒中的重要治疗策略。

黄芪对创伤性脑损伤大鼠脑紧密连接相关蛋白表达及血脑屏障通透性的影响

目的探讨黄芪对创伤性脑损伤后紧密连接相关蛋白(claudin-5)表达和血脑屏障通透性的影响。方法 70只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和黄芪组各35只,两组各30只采用自由落体致伤原理造模成功。黄芪组在制作大鼠脑损伤模型前7 d至处死时,每隔12 h腹腔注射黄芪,对照组用等量生理盐水腹腔注射。两组分别于大鼠脑损伤模型制成后6 h、1 d、3 d、5 d、7 d各取2只大鼠,用Western Blot法测定脑组织claudin-5的表达,采用伊文蓝(EB)法测定血脑屏障通透性。结果脑损伤后各个时间点黄芪组脑组织claudin-5蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),脑组织EB含量均明显低于对照组(P<0.05)。结论调节claudin-5的表达,进而调节血脑屏障的通透性可能是黄芪抑制脑水肿形成的机制。

铅诱导血脑屏障体外模型中紧密连接相关蛋白的信号调控

目的研究铅损伤体外血脑屏障(BBB)模型的紧密连接过程中,MAPK、AKT通路的改变,并观察相关通路的抑制剂的调节作用。方法利用TranswellTM小室培养系统将ECV304人脐静脉内皮细胞系与C6大鼠胶质瘤细胞共培养建立体外BBB模型。共培养实验组按照加入醋酸铅(PbC4H6O4)浓度的不同分组。测量跨内皮阻抗(TEER)和FITC-葡聚糖通过量,以动态TEER峰值和FITC-葡聚糖通过量作为判断ECV304细胞紧密连接形成的标准。Western blot法检测铅暴露对细胞紧密连接相关蛋白表达的影响;利用免疫荧光细胞化学染色检测紧密连接相关蛋白的细胞定位;染铅细胞MAPK、PI3K/AKT通路抑制作用。结果铅对ECV304细胞的生长具有抑制作用,且具有时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05);随着培养时间延长,TEER的测定值不断下降,而FITC-葡聚糖通过量显著上升(P<0.05);Western blot法检测发现,在2.5μmol/L铅作用条件下,ECV304细胞和C6细胞共培养体系中ECV304细胞中的紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达水平逐渐下降;p38、ERK、AKT的磷酸化水平逐渐增强;采用免疫荧光细胞化学染色发现ECV304细胞紧密连接相关蛋白表达减弱,信号通路抑制剂抑制铅诱导的信号通路活化,ERK1/2抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY2940021可抑制铅诱导的紧密连接相关蛋白表达降低。结论铅可诱导BBB通透性增强,MAPK、AKT通路抑制剂可抑制BBB通透性。

伪狂犬病病毒感染小鼠基质金属蛋白酶-9介导紧密连接蛋白损伤血脑屏障的研究

旨在探究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)对小鼠血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性的影响及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与紧密连接(tight junction, TJ)的相关性。将昆明SPF小鼠96只,随机平均分为对照组和3个试验组,24只对照组小鼠滴鼻生理盐水,72只试验组小鼠滴鼻感染PRV,将试验组分为感染24 h组、感染48 h组和感染72 h组,每组24只。观察临床症状并采用H&E染色观察病理损伤情况;通过改良型神经学评分和脑组织病毒载量测定评价PRV感染后神经损伤情况与病毒载量的关系;通过干湿重法和伊文斯蓝染色法探究血脑屏障的通透性;通过mRNA和蛋白表达差异水平探究MMP-9和TJ的相关性。结果显示,攻毒后脑组织病变程度随时间延长而加剧,在攻毒48 h后,脑组织病毒载量出现显著性差异;神经功能损伤评分在第72小时达到最高;干/湿重值及脑组织伊文斯蓝浓度呈时间依赖性;MMP-9与TJ的相关性结果表明,PRV攻毒后MMP-9表达量增加,TJ表达量减少。结果表明,PRV感染通过MMP-9介导的TJ蛋白表达量的降低损害BBB的完整性及通透性。综上所述,PRV感染可能通过MMP-9介导的破坏来损害BBB,为进一步阐明PRV入侵机制奠定基础。

紧密连接相关蛋白对血脑屏障通透性影响的研究进展

血脑屏障作为机体中重要的组织结构,对于维持脑组织的安全及稳定具有十分重要的作用,紧密连接是血脑屏障的重要组成部分,其相关蛋白在维持紧密连接的稳定性和血脑屏障通透性方面同样至关重要。

缓激肽对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白分布和表达的影响

目的研究缓激肽(BK)对血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白(ZO-1)分布和表达的影响,以及蛋白激酶C(PKC)在BK开放紧密连接中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和BK 5、10、15、30、60 m in组共6组。建立C6大鼠胶质瘤模型,颈动脉给药,应用W estern b lot法检测脑肿瘤微血管上ZO-1和PKC表达水平的变化;应用免疫组织化学法检测脑肿瘤微血管上ZO-1的分布和表达水平变化。结果与对照组相比,BK组紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平显著降低,BK 15 m in组降低最明显(P<0.01);BK作用后PKC表达水平明显增加,BK 10 m in组增加最显著(P<0.01)。结论缓激肽可通过下调ZO-1的表达开放紧密连接,PKC可能是BK开放紧密连接的调节机制之一。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的表达及意义

目的通过观察大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑皮层紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的变化及JNK抑制剂SP600125对其表达的影响,探讨SAH后早期脑损伤的机制。方法成年雄性SD大鼠75只,随机分成假手术组(sham组)、SAH组、SAH+DMSO组、SAH+SP600125(10 mg/kg)组和SAH+SP600125(30 mg/kg)组5组。采用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,在SAH后24 h时,应用电镜观察各组脑皮层微血管血脑屏障形态学变化;应用Western blot检测各组中脑皮层Claudin-5、ZO-1表达的变化。结果 SAH后早期脑皮层微血管发生明显损伤改变;与sham组相比,SAH组出血后24 h Claudin-5、ZO-1的表达水平明显降低(P<0.05),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125明显改善了脑皮层微血管形态学损伤程度,并抑制了Claudin-5、ZO-1表达水平的降低。结论大鼠SAH后早期血脑屏障结构破坏是早期脑损伤关键性机制之一;SP600125可能通过抑制细胞凋亡、保护血脑屏障发挥SAH早期脑损伤的神经保护作用。

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P<0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P<0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。

紧密连接蛋白与血脑屏障

血脑屏障是机体内最重要的器官防御结构之一,紧密连接蛋白是血脑屏障重要的组成部分。血脑屏障结构和功能的改变多与其紧密连接蛋白的表达变化有关。该文主要对影响血脑屏障结构和功能的各种紧密连接蛋白进行综述,为研究药物影响血脑屏障结构功能改变的机制及新药筛选提供借鉴。

紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组（即假手术组）,每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖（LPS）浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低（P均〈0.01）.相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关（P均〈0.05）.光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.

紧密连接蛋白1与肝性脑病大鼠模型血脑屏障通透性的关系

目的研究肝性脑病(HE)大鼠脑组织紧密连接蛋白(ZO)1水平与血脑屏障通透性改变之间的关系。方法将180只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组HE 4、8和12 h共4组,每组45只。应用D-氨基半乳糖(400 mg/kg)和内毒素(100μg/kg)联合腹腔内注射建立HE大鼠模型。分别于造模后4、8和12 h检测血氨浓度、伊文思蓝(EB)含量、脑组织含水量及real-time Q-PCR法检测血脑屏障ZO-1 mRNA含量。计量资料方差齐时采用LSD检测,方差不齐时采用Dunnett T3法检测。结果造模2 h后HE组大鼠逐渐出现HE症状;造模后4 h与正常组相比,大鼠血氨浓度[(74.27±1.77)μmol/L vs(33.85±1.50)μmol/L]、脑组织EB含量[(4.84±0.43)μg/g vs(3.96±0.48)μg/g]、脑组织含水量[(78.63±0.46)%vs(76.07±0.39)%]即开始升高(P值均<0.001),且随时间延长,血氨浓度、脑组织EB含量、含水量升高更加明显(F值分别为5983.36、111.54、737.25,P值均<0.001);造模后4 h大鼠脑组织ZO-1 mRNA表达的相对含量[(1.282 3±0.057 4)vs(1.457 6±0.065 4)]即开始下降(P<0.001),且随时间延长,脑组织ZO-1 mRNA表达的相对含量下降更加明显(F=135.38,P<0.001)。结论 HE时出现血脑屏障通透性增强及脑水肿,可能与ZO-1 mRNA表达下降有关。

续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4 (AQP4) mRNA表达的影响

目的:观察续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达的影响。方法:将清洁级SD大鼠分为分假手术组、模型组、尼莫地平组、续命汤低剂量组、中剂量组、高剂量组6组,通过栓线法制备局灶性脑缺血中风大鼠模型,观察并记录SD大鼠造模后神经功能评分、免疫组化法检测脑缺血大鼠脑组织紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达。结果:造模后大鼠神经行为学评分显著升高,Zo-1蛋白阳性表达降低,AQP4 mRNA的表达增加,续命汤各治疗组能拮抗以上作用,以续命汤中、高剂量组为显著,其疗效优于或与尼莫地平组相当。结论:续命汤能减少Zo-1蛋白的损失,维持紧密连接复合体结构的完整性,抑制AQP4 mRNA的过度释放与表达,减轻脑缺血和水肿,进而实现保护血脑屏障的作用。

缺血再灌注对血脑屏障紧密连接蛋白的影响

紧密连接是血脑屏障的结构功能基础,它是一个复杂的、具有主动调节性的细胞系统。近来的研究表明缺血再灌注通过各种途径影响紧密连接的结构和分布。探讨血脑屏障连接复合体的分子结构、在脑损伤时的变化以及对血脑屏障通透性调节的可能机制为脑损伤的临床防治提供了一个全新的思路。

体外循环对大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨体外循环(CPB)对大鼠血脑屏障(BBB)功能及脑血管内皮紧密连接蛋白表达的影响。方法 24只成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)和体外循环组(C组)。S组进行相应的麻醉和手术操作但不进行CPB,C组进行CPB 60 min并继续观察2 h。每组随机取6只测脑组织伊文思蓝(EB)含量,另6只做脑组织含水量测定、紧密连接蛋白Oc-cludin和ZO-1的表达以及大鼠BBB超微结构的观察。结果与S组比较,C组大鼠海马区脑组织EB含量和含水量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,C组大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。S组BBB基膜均匀一致,完整性良好,内皮细胞间的紧密连接完整;C组基底膜变厚,微血管腔狭窄,内皮细胞间紧密连接不清楚。结论 CPB使大鼠BBB的结构发生变化、通透性增加,其机制可能与大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白改变有关。

异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。

谷氨酸化学交换饱和转移MR成像对脂多糖诱导脓毒症相关性脑病的大鼠血脑屏障损伤的应用研究

目的:采用谷氨酸化学交换饱和转移成像(Glu-CEST)观察由脂多糖诱导的脓毒症相关性大鼠脑内的影像改变与大鼠血脑屏障损伤的关系。方法:将24只健康雄性SD大鼠均分为脓毒症相关性脑病(SAE)组(10 mg/kg脂多糖)和对照组(注射与脂多糖等量的生理盐水)两组,并通过旷场实验分别观察两组大鼠行为学表现,其行为学指标包括大鼠的活动总路程、活动时间、站立次数以及跨格次数。采用7.0T小动物专用磁共振扫描仪获得大鼠脑中的Glu-CEST图像。最后通过伊文思蓝实验检测大鼠血脑屏障的损伤。结果:旷场实验的行为学表现表明与对照组对比,SAE组的大鼠的活动时间、站立次数显著下降(P<0.01),提示SAE组大鼠焦虑、抑郁症状更显著;SAE组大鼠脑中的Glu-CEST值((15.20±0.79)%)较对照组((11.93±1.63)%)显著升高(P<0.01),同时SAE组((4.07±0.64)ng/mL)的伊文思蓝溶液渗透结果亦较对照组((1.97±0.23)ng/mL)更显著(P<0.05),且通过Person相关性分析提示伊文思蓝实验的渗透值与Glu-CEST值具有正相关。结论:结合Glu-CEST MRI可在分子影像水平上无创性地反映脂多糖诱导脓毒症相关性脑病的大鼠脑中的血脑屏障受损变化及程度。

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响

目的:探讨局部亚低温对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型紧密连接相关蛋白-5(Claudin-5)表达的影响以及局部亚低温减轻ICH后水肿的可能机制。方法:选取雄性SD大鼠216只,采用自体血注入法制备ICH模型,并随机分为ICH组和ICH加局部亚低温(ICH+H)组。每组又分为假手术组以及ICH后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组共6个亚组。ICH+H组于注血后给予局部亚低温治疗。采用免疫组织化学法检测Claudin-5的表达,采用伊文思蓝法进行血脑屏障通透性的检测,采用干湿质量法进行脑组织含水量的检测。结果:ICH组大鼠血肿周围脑组织中Claudin-5表达在ICH后6 h开始减少,ICH后24 h下降最显著,ICH后7 d时仍低于假手术组(P<0.05);ICH组大鼠在ICH后6 h开始出现血脑屏障通透性及脑组织含水量增加(P<0.05),在ICH后3 d达到高峰,然后逐渐消退。ICH+H组大鼠ICH后各时间点Claudin-5表达均高于ICH组(P<0.05),而血脑屏障通透性、脑组织含水量则低于ICH组(P<0.05)。结论:局部亚低温可能通过提高Claudin-5的表达来抑制ICH后脑水肿的形成。

冰片对血脑肿瘤屏障开放程度及紧密连接蛋白表达的影响

目的：探讨冰片对血脑肿瘤屏障（BTB）开放程度和紧密连接蛋白表达的影响。方法建立体外BTB试验模型，分为空白对照组（培养基）、冰片低剂量组（25μg/ml）、冰片中剂量组（50μg/ml）、冰片高剂量组（100μg/ml）。采用辣根过氧化酶（HRP）流量和酶联免疫吸附法（ELISA）测定不同时间点BTB的通透性及紧密连接相关蛋白的表达。结果随着时间延长，低、中、高剂量组各时间点通透率均逐渐升高（P﹤0.01）；低、中、高剂量组10～240 min通透率高于空白组（P﹤0.01）；中、高剂量组30～180 min通透率高于低剂量组（P﹤0.05）；高剂量组10～180 min通透率高于中剂量组（P﹤0.05）；不同时间点间和不同组别间Occludin蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；各组ZO-1和F-actin蛋白表达量均先降低后逐渐升高（P﹤0.05）；低剂量组30 min后，中、高剂量组60 min后蛋白表达量缓慢上升，且均至240 min时基本与给药前水平一致（P﹥0.05）；中、高剂量组在30、60 min时ZO-1和F-actin蛋白表达量最低（P﹤0.01），并存在剂量依赖趋势，即高剂量﹤中剂量﹤低剂量﹤给药前。结论冰片可以增加BTB的开放程度，从而提高化疗药物的透过率，其机制可能是通过调控紧密连接蛋白ZO-1和F-actin的表达而实现的。

紧密连接蛋白occludin在血脑屏障中的研究概述

紧密连接(Tight junction,TJ)是细胞间的重要结构,而occludin是构成TJ的重要跨膜蛋白。血脑屏障(blood brainbarrier,BBB)是中枢神经系统在解剖和生理上重要屏障,而TJ对于BBB的形成具有重要作用。Occludin的表达异常和位置改变,可以影响BBB的功能,是研究BBB的重要手段。本文将介绍TJ相关蛋白occludin的基本结构和功能,并简述occludin在BBB中的作用。